Name: creating two-dimensional patterned substrates for protein and cell confinement
Uploaded: 2011-09-06T13:00:00
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Nous tenons à remercier l&#39;ensemble du groupe Maurer à l&#39;Université Washington, dont la connaissance collective a fait de ce protocole possible. Le financement de ce travail est fourni par le National Institute of Mental Health (1R01MH085495).

1. Préparation du Master motifs (figure 1) <ol><li> Centre de la plaquette de silicium sur le spin-coucheuse et rincer la plaquette avec de l&#39;acétone pendant l&#39;étape initiale du programme de rotation en deux cycles dans le tableau 1. L&#39;acétone va s&#39;évaporer durant la deuxième étape du programme de tour en laissant un endroit propre, galette sèche. </li><li> Appliquer environ 1 mL AZ9245 photorésine / en (de diamètre) à la plaquette et de spin-coat en utilisant les conditions décrites dans l...

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	<li>Wilbur, J., Kumar, A., Biebuyck, H., Kim, E., Whitesides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+printing+of+self-assembled+monolayers:+Applications+in+microfabrication.">Microcontact printing of self-assembled monolayers: Applications in microfabrication.</a> Nanotechnology. 7, 452-457 (1996).</li><li>Chang, J., Brewer, G., Wheeler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+microstamping+technique+enhances+polylysine+transfer+and+neuronal+cell+patterning.">A modified microstamping technique enhances polylysine transfer and neuronal cell patterning.</a> Biomaterials. 24, 2863-2870 (2003).</li><li>Lange, S., Benes, V., Kern, D., Horber, J., Bernard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+printing+of+DNA+molecules.">Microcontact printing of DNA molecules.</a> Analytical Chemistry. , 1641-1647 (2004).</li><li>Xia, Y., Mrksich, M., Kim, E., Whitesides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+printing+of+octadecylsiloxane+on+the+surface+of+silicon+dioxide+and+its+application+in+microfabrication.">Microcontact printing of octadecylsiloxane on the surface of silicon dioxide and its application in microfabrication.</a> J. Am. Chem. Soc. , 9576-9577 (1995).</li><li>Mrksich, M., Dike, L., Tien, J., Ingber, D., Whitesides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+microcontact+printing+to+pattern+the+attachment+of+mammalian+cells+to+self-assembled+monolayers+of+alkanethiolates+on+transparent+films+of+gold+and+silver.">Using microcontact printing to pattern the attachment of mammalian cells to self-assembled monolayers of alkanethiolates on transparent films of gold and silver.</a> Experimental Cell Research. , 305-313 (1997).</li><li>Prime, K. L., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adsorption+of+proteins+onto+surfaces+containing+end-attached+oligo(ethylene+oxide)+-+a+model+system+using+self-assembled+monolayers.">Adsorption of proteins onto surfaces containing end-attached oligo(ethylene oxide) - a model system using self-assembled monolayers.</a> J. Am. Chem. Soc. 115, 10714-10721 (1993).</li><li>Raghavan, S., Desai, R., Kwon, Y., Mrksich, M., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterned+Dynamically+Adhesive+Substrates+for+Cell+Migration.">Micropatterned Dynamically Adhesive Substrates for Cell Migration.</a> Langmuir. , 17733-17738 (2010).</li><li>Rogers, J., Bao, Z., Baldwin, K., Dodabalapur, A., Crone, B., Raju, V. R., Kuck, V., Katz, H., Amundson, K., Ewing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paper-like+electronic+displays:+Large-area+rubber-stamped+plastic+sheets+of+electronics+and+microencapsulated+electrophoretic+inks.">Paper-like electronic displays: Large-area rubber-stamped plastic sheets of electronics and microencapsulated electrophoretic inks.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 4835-4840 (2001).</li><li>Yanker, D., Maurer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+printing+of+trichlorosilanes+on+glass+for+selective+protein+adsorption+and+cell+growth.">Direct printing of trichlorosilanes on glass for selective protein adsorption and cell growth.</a> Molecular Biosystems. 4, 502-504 (2008).</li><li>Johnson, D., Maurer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recycling+and+reusing+patterned+self-assembled+monolayers+for+cell+culture.">Recycling and reusing patterned self-assembled monolayers for cell culture.</a> Chemical Communications. , 520-522 (2011).</li><li>Herne, T., Tarlov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+DNA+probes+immobilized+on+gold+surfaces.">Characterization of DNA probes immobilized on gold surfaces.</a> J. Am. Chem. Soc. , 8916-8920 (1997).</li><li>Hanson, E., Schwartz, J., Nickel, B., Koch, N., Danisman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bonding+self-assembled,+compact+organophosphonate+monolayers+to+the+native+oxide+surface+of+silicon.">Bonding self-assembled, compact organophosphonate monolayers to the native oxide surface of silicon.</a> J. Am. Chem. Soc. , 16074-16080 (2003).</li><li>Johannes, M., Cole, D., Clark, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscope+based+nanofabrication+of+master+pattern+molds+for+use+in+soft+lithography.">Atomic force microscope based nanofabrication of master pattern molds for use in soft lithography.</a> Applied Physics Letters. , (2007).</li><li>Bessueille, F., Pla-Roca, M., Mills, C. A., Martinez, E., Samitier, J., Errachid, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Submerged+microcontact+printing+(S&#x03BC;CP):+An+unconventional+printing+technique+of+thiols+using+high+aspect+ratio,+elastomeric+stamps.">Submerged microcontact printing (S&#x03BC;CP): An unconventional printing technique of thiols using high aspect ratio, elastomeric stamps.</a> Langmuir. , 12060-12063 (2005).</li><li>Xia, Y., Whitesides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+microcontact+printing+as+a+microlithographic+technique.">Extending microcontact printing as a microlithographic technique.</a> Langmuir. , 2059-2067 (1997).</li><li>Biasco, A., Pisignano, D., Krebs, B., Pompa, P. P., Persano, L., Cingolani, R., Rinaldi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformation+of+microcontact-printed+proteins+by+atomic+force+miroscopy+molecular+sizing.">Conformation of microcontact-printed proteins by atomic force miroscopy molecular sizing.</a> Langmuir. , 5154-5158 (2005).</li><li>Shen, K., Qi, J., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+printing+of+proteins+for+cell+biology.">Microcontact printing of proteins for cell biology.</a> J Vis Exp. (22), e1065-e1065 (2008).</li><li>Piner, R., Zhu, J., Xu, F., Hong, S., Mirkin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Dip-pen"+nanolithography.">"Dip-pen" nanolithography.</a> Science. 283, 661-663 (1999).</li><li>Ryan, D., Parviz, B. A., Linder, V., Semetey, V., Sia, S. K., Su, J., Mrksich, M., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+multiple+aligned+self-assembled+monolayers+using+light.">Patterning multiple aligned self-assembled monolayers using light.</a> Langmuir. , 9080-9088 (2004).</li></ol>

Un certain nombre de questions peuvent surgir dans la production lithographique de maître utilisé pour la création de timbre de PDMS. Sous-exposition des résultats plaquette résister à revêtement dans les modèles flous et indistincts et la surexposition des résultats plaquette résister à revêtement en fonctionnalités élargie ou manquant. En général, les maîtres avec des tailles disposent de grandes (&gt; 10 mm) sont relativement faciles à motif et se développer, alors que les maîtres avec de petites ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> Plaquette de silicium </td><td> Wafer Reclaim services </td><td></td><td> 2 pouce </td></tr><tr><td> Spin coucheuse / plaque chauffante </td><td> Brewer Science </td><td> Cee 200CB Spin-Cuire système </td><td></td></tr><tr><td> AZ9245 Photoresist </td><td> Mays Chemical Company </td><td> 105880034-1160 </td><td></td></tr><tr><td> Système de photolithographie à écriture directe </td><td> Microtech srl </td><td> LW325 Système LaserWriter </td><td></td></tr><tr><td> Masque de géométrie </td><td> HTG </td><td> 3HR </td><td></td></tr><tr><td> Développeur 400K AZ </td><td> Mays Chemical Company </td><td> 105880018-1160 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 182 Kit élastomère de silicone </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 25 mm non. Une des lamelles en verre ronds </td><td> VWR </td><td> 16004-310 </td><td></td></tr><tr><td> Oxydant Plasma </td><td> Diener </td><td> Femto </td><td></td></tr><tr><td> Titane pièces Kamis </td><td> Incorporated </td><td></td><td> 99,95% </td></tr><tr><td> Granules d&#39;or </td><td> Kamis Incorporated </td><td></td><td> Pur à 99,999% </td></tr><tr><td> Par faisceau d&#39;électrons d&#39;évaporateur </td><td> Kurt J. Lesker </td><td> PVD 75 Système de dépôt de couches minces </td><td> avec des faisceaux d&#39;électrons d&#39;accessoires </td></tr><tr><td> Hexadecanethiol </td><td> Alfa Aesar </td><td> A11362 </td><td></td></tr><tr><td> 1-mercaptoundec-11-yl) tétra (éthylène glycol) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 674508 </td><td></td></tr><tr><td> Éthanol </td><td> Pharmco-AAPER </td><td> 111000200 </td><td> 200 preuve, absolue </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS </td><td> VWR </td><td> 4500-434 </td><td> Sans calcium et de magnésium </td></tr><tr><td> Souris Laminine I </td><td> VWR </td><td> 95036-762 </td><td></td></tr><tr><td> La fibronectine de plasma humain </td><td> Invitrogen </td><td> 33016-015 </td><td></td></tr><tr><td> AlexaFluor ® 647 d&#39;acide carboxylique, ester succinimidyle </td><td> Invitrogen </td><td> A-20006 </td><td></td></tr><tr><td> Mitotracker Rouge 580 </td><td> Invitrogen </td><td> M22425 </td><td></td></tr><tr><td> AlexaFluor ® 350 carboxylique succinimidyle </td><td> Invitrogen </td><td> A-10168 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-laminine d&#39;anticorps </td><td> Fisher Scientific </td><td> AB2034MI </td><td></td></tr></tbody></table>

creating two-dimensional patterned substrates for protein and cell confinement

Impression par microcontact fournit une méthode rapide, hautement reproductible pour la création de substrats motifs bien définis. 1 Pendant l&#39;impression par microcontact peut être employée pour imprimer directement un grand nombre de molécules, y compris les protéines, l&#39;ADN 2, 3 et silanes, 4 la formation de l&#39;auto -assemblés monocouches (SAM) de longues alcane thiols sur l&#39;or offre un moyen simple de limiter les protéines et les cellules pour des modèles spécifiques contenant des régions adhésif et résistant. Ce confinement peut être utilisé pour contrôler la morphologie cellulaire et est utile pour l&#39;examen d&#39;une variété de questions en protéines et en biologie cellulaire. Ici, nous décrivons une méthode générale pour la création de motifs protéiques bien définis pour les études cellulaires 5 Ce processus comprend trois étapes:. La production d&#39;un maître à motifs en utilisant la photolithographie, impression de la création d&#39;un timbre en PDMS, et microcontact d&#39;un or- substrat revêtu. Une fois modelée, ces substrats de culture de cellules sont capables de confiner les protéines et / ou de cellules (cellules primaires ou de lignées cellulaires) pour le motif. L&#39;utilisation de la chimie monocouche auto-assemblée permet un contrôle précis sur les régions à motifs adhésifs protéines / cellules et non-adhésive régions, ce qui ne peut être réalisée à l&#39;aide d&#39;emboutissage directe des protéines. Hexadecanethiol, la longue chaîne alcane thiols utilisés dans l&#39;étape d&#39;impression par microcontact, produit une surface hydrophobe qui adsorbe facilement protéines de la solution. Le glycol terminée par un thiol, utilisés pour le remblayage des régions non-imprimées du substrat, crée une monocouche qui est résistant à l&#39;adsorption des protéines et donc la croissance cellulaire. 6 Ces monomères thiol produisent des monocouches hautement structurés qui définissent précisément les régions du substrat qui peuvent soutenir l&#39;adsorption des protéines et la croissance cellulaire. En conséquence, ces substrats sont utiles pour une large variété d&#39;applications de l&#39;étude du comportement intercellulaire 7 à la création de la microélectronique. 8 Alors que d&#39;autres types de chimie monocouche ont été utilisés pour des études de culture de cellules, y compris les travaux de notre groupe en utilisant trichlorosilanes pour créer des motifs directement sur ​​des substrats en verre, 9 monocouches à motifs formés à partir de thiols alcane sur l&#39;or sont simples à préparer. Par ailleurs, les monomères utilisés pour la préparation monocouche sont disponibles dans le commerce, stable, et ne nécessitent pas de stockage ou la manipulation sous atmosphère inerte. Substrats préparés à partir de thiols Patterned alcane peuvent également être recyclés et réutilisés plusieurs fois, le maintien de l&#39;isolement cellulaire. 10

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Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Monocouches auto-assemblées (SAM) formé à partir de thiols à long alcane sur l&#39;or de fournir des substrats bien définis pour la formation de motifs protéiques et de l&#39;isolement cellulaire. D&#39;impression par microcontact hexadecanethiol l&#39;aide d&#39;un polydiméthylsiloxane (PDMS) de timbre suivie par remblayage avec un glycol terminée alcane thiols monomère produit un modèle où les protéines et les cellules s&#39;adsorbent seulement pour la région estampillé hexadecanethiol.

Créer deux dimensions Substrats motifs pour le confinement des protéines et de cellules

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Research

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Bioengineering

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Création transitoires pores de la membrane cellulaire à l&#39;aide d&#39;une imprimante jet d&#39;encre standard

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Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

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Parylene-C: SiO2 Substrates

Cellule structuration par photolithographie sur Défini Parylene-C: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; Substrats

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Ordering Single Cells and Single Embryos in 3D Confinement: A New Device for High Content Screening

Commande de cellules simples et simple Embryons en 3D Confinement: un nouveau dispositif de criblage à haut débit

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