Name: heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio
Uploaded: 2011-09-30T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio at JoVE.com

תודה מארי Birne, ארטי Tsiola, Jaymie אסטבס Arelys אוריבה. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי CUNY Research Foundation ו - הווארד יוז רפואי מכון גרנט תוכנית קיץ לסטודנטים לתואר ראשון (השלוחה) ו-NIH RO3 41702-00-01. המחקר נתמך גם על ידי בקווינס קולג&#39; וחלק הניסויים נעשו על ציוד ממתקן Core for Imaging, ביולוגיה תאית ומולקולרית בקווינס קולג&#39;.

דג הזברה הועלו באמצעות פרוטוקולים סטנדרטיים 13 במתקן בעלי חיים בקווינס קולג&#39; ב 28 ° C. זוגות בודדים או דגים הזדווגויות קבוצה צריכה להיות preformed ואת עוברי כתוצאה ניקה מאוחסנים 28 ° C חממה. בריאות דגים יש לבחון מדי יום. בשלב ההפריה 5 ימים פוסט (DPF), דגים צריכים להיות מופ?...

<ol>
	<li>Ahmad, N., Long, S., Rebagliati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+southpaw+joins+the+roster:+the+role+of+the+zebrafish+nodal-related+gene+southpaw+in+cardiac+LR+asymmetry.">A southpaw joins the roster: the role of the zebrafish nodal-related gene southpaw in cardiac LR asymmetry.</a> Trends Cardiovasc Med. 14, 43-49 (2004).</li><li>Armstrong, E. J., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+development:+endothelial+cell+signaling+and+differentiation.">Heart valve development: endothelial cell signaling and differentiation.</a> Circ Res. 95, 459-470 (2004).</li><li>Bakkers, J., Verhoeven, M. C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+the+zebrafish+heart:+from+left-right+axis+specification+to+epithelial+tissue+morphogenesis.">Shaping the zebrafish heart: from left-right axis specification to epithelial tissue morphogenesis.</a> Dev Biol. 330, 213-220 (2009).</li><li>Glickman, N. S., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+development+in+zebrafish:+coordination+of+form+and+function.">Cardiac development in zebrafish: coordination of form and function.</a> Semin Cell Dev Biol. 13, 507-513 (2002).</li><li>Heicklen-Klein, A., McReynolds, L. J., Evans, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+zebrafish+model+to+study+GATA+transcription+factors.">Using the zebrafish model to study GATA transcription factors.</a> Semin Cell Dev Biol. 16, 95-106 (2005).</li><li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cardiac+development:+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics.">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin Cell Dev Biol. 18, 27-35 (2007).</li><li>Beis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+cellular+analyses+of+zebrafish+atrioventricular+cushion+and+valve+development.">Genetic and cellular analyses of zebrafish atrioventricular cushion and valve development.</a> Development. 132, 4193-4204 (2005).</li><li>Lepilina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+epicardial+injury+response+supports+progenitor+cell+activity+during+zebrafish+heart+regeneration.">A dynamic epicardial injury response supports progenitor cell activity during zebrafish heart regeneration.</a> Cell. 127, 607-619 (2006).</li><li>Wills, A. A., Holdway, J. E., Major, R. J., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+addition+of+new+myocardial+and+epicardial+cells+fosters+homeostatic+cardiac+growth+and+maintenance+in+adult+zebrafish.">Regulated addition of new myocardial and epicardial cells fosters homeostatic cardiac growth and maintenance in adult zebrafish.</a> Development. 135, 183-192 (2008).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238, 2975-3015 (2009).</li><li>Huang, C. J., Tu, C. T., Hsiao, C. D., Hsieh, F. J., Tsai, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ-line+transmission+of+a+myocardium-specific+GFP+transgene+reveals+critical+regulatory+elements+in+the+cardiac+myosin+light+chain+2+promoter+of+zebrafish.">Germ-line transmission of a myocardium-specific GFP transgene reveals critical regulatory elements in the cardiac myosin light chain 2 promoter of zebrafish.</a> Dev Dyn. 228, 30-40 (2003).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book,+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">The Zebrafish Book, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> , (1995).</li></ol>

אלה שיטות לניתוח הלב דג הזברה של דגים שלאחר עובריים מאפשר הסרה מלאה של הלב ניזוק. אמנם שיטה זו היא פשוטה, ומספק מדריכים עבור חתכים חיצוניים שימנעו פגיעה בלב, יד יציבה חיונית דגים קטנים יותר. צעד מרכזי במהלך דיסקציה היא לזהות את קרו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> חומר </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> EMD </td><td> PX0055 </td><td> .04g/mL ב PBS </td></tr><tr><td> מלקחיים # 55 </td><td> FST </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> מיקרו מספריים </td><td> FST </td><td> 15005-08 </td><td></td></tr><tr><td> בעל פין </td><td> FST </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> מיקרו מחטים </td><td> FST </td><td> 10130-10 </td><td></td></tr><tr><td> מזין אגר </td><td> BBL </td><td> 11472 </td><td> 23g / L ב מזוקקים H 2 O </td></tr><tr><td> צלחות פטרי </td><td> BD פלקון </td><td> 351029 </td><td></td></tr><tr><td> 8-PCR צינור רצועות </td><td> ארה&quot;ב מדעי </td><td> 1402-2500 </td><td></td></tr><tr><td> Digital Caliper </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 14-648-17 </td><td></td></tr></tbody></table>

heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio

דג הזברה הפכו אורגניזם מודל מועיל ומעשי ללימוד התפתחות הלב העוברי (ראה הסקירות האחרונות 1-6), לעומת זאת, העבודה בוחנת שלאחר עובריים באמצעות פיתוח מבוגר לב הוגבל 7-10. בחינת המורפולוגיה שינוי של הלב התבגרות והזדקנות מוגבלים על ידי חוסר של טכניקות עבור הבימוי ובידוד לבבות צעירים ומבוגרים. על מנת לנתח את התפתחות הלב על תוחלת החיים של הדגים, אנו לנתח לבבות דג הזברה בשלבים רבים לצלם אותם לניתוח נוסף 11. המאפיינים המורפולוגיים של הלב יכול בקלות לכימות ולבבות בודדים ניתן לנתח עוד יותר על ידי שורה של שיטות סטנדרטיות. דג הזברה לצמוח בקצב משתנה התבגרות בקורלציה טובה עם גודל הדג לגיל, וכך, לאחר קיבוע, אנחנו מצלמים ולמדוד אורך דגים כמדד של התבגרות הדג. פרוטוקול זה מסביר two ברורים, טכניקות גודל לנתיחה תלוי על דג הזברה, החל אורך הזחלים 3.5mm סטנדרטית (SL) עם לבבות של אורך החדר 100μm (VL), על מבוגרים, עם SL של 30mm ו VL 1mm או גדולים יותר. דגים הזחל למבוגרים יש גוף שונה לגמרי ומורפולוגיה איברים. הזחלים הם לא רק קטן יותר באופן משמעותי, יש להם פחות פיגמנט כל איבר הוא ויזואלית קשה מאוד לזהות. מסיבה זו, אנו משתמשים בטכניקות שונות לנתיחה. השתמשנו מראש לנתיחה קיבעון הליכים, כפי שגילינו כי לבבות גזור ישירות לאחר euthanization יש מורפולוגיה משתנה יותר, עם בלון רופף מאוד כמו אטריה בהשוואה לבבות להסיר קיבוע הבאה. הדגים קבוע לפני לנתיחה, לשמור במורפולוגיה vivo ואת המיקום קאמרית (מידע לא מוצג). בנוסף, למטרות הדגמה, אנו מנצלים את הלב (שריר הלב) ספציפי GFP מהונדס Tg (myl7: GFP) twu34 (12), אשר מאפשר לנו לדמיין את הלב כולו והוא שימושי במיוחד בשלבים הראשונים בהתפתחות כאשר הלב מורפולוגיה היא ברורה פחות הרקמות הסובבות. Dissection הלב עושה ניתוח נוסף של התא וביולוגיה מולקולרית הבסיסית לפיתוח לב התבגרות משתמש הכלאה באתרו, אימונוהיסטוכימיה, מיצוי RNA או שיטות אנליטיות אחרות קל יותר דג הזברה שלאחר עובריים. פרוטוקול זה יספק טכניקה ערך לחקר הזדקנות התבגרות התפתחות הלב.

Watch this Scientific Journal Video about Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio at JoVE.com

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

שיטה ברורה, תקנית לנתיחה ובידוד של הלב דג הזברה בשלבים התפתחותיים מרובים מתוארים. טכניקות ביאור וכימות הם דנו גם.

הלב Dissection ב הזחל, דג הזברה לנוער ו למבוגרים, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

Research

JoVE Journal

Biology

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Dissection של מערכת העצבים המרכזית הזחל ב תסיסנית melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

תסיסנית הזחל Dissection NMJ

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

Dissection גרוס פיין epithelia של האוזן הפנימית חושית למבוגרים דג הזברה ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Dissection של איברים מן דג הזברה למבוגרים

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection ו מכתים של תסיסנית הזחל השחלות

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Dissection של הכליה דג הזברה למבוגרים

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך הרשתית דג הזברה למבוגרים

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

טיפול קבוע ותחזוקה של דג זברה (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) מעבדה: מבוא

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

בדוגמנות Vivo של הגנום האנושי החולנית באמצעות Danio rerio

Here,  we present methods for the development of assays to query potentially clinically  significant nonsynonymous changes using in  vivo complementation ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging דג הזברה למבוגר

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...