Name: heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio
Uploaded: 2011-09-30T12:00:00
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Grazie a Marie Birne, Areti Tsiola, Jaymie Estevez e Arelys Uribe. Questo lavoro è stato sostenuto in parte da CUNY Research Foundation e Howard Hughes Medical Institute programma estivo di sovvenzione per gli studenti universitari (SPUR) e NIH RO3 41702-00-01. La ricerca è stata sostenuta anche dal Queens College e alcuni degli esperimenti sono stati fatti su apparecchi dal Fondo Core for Imaging, Biologia Cellulare e Molecolare al Queens College.

Zebrafish sono state sollevate utilizzando protocolli standard 13 nel Fondo Queens College di animali a 28 ° C. Coppie o singoli pesci accoppiamenti gruppo dovrebbe essere preformato e gli embrioni risultanti puliti e conservati in un incubatore 28 ° C. Salute dei pesci dovrebbero essere esaminati ogni giorno. A 5 giorni di fecondazione post (DPF), il pesce deve essere separata in vasche ad una densità 10-15 pesce ed è entrato in funzione il vivaio di pesci. Per il protocollo presentato qui zebrafish sono...

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	<li>Ahmad, N., Long, S., Rebagliati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+southpaw+joins+the+roster:+the+role+of+the+zebrafish+nodal-related+gene+southpaw+in+cardiac+LR+asymmetry.">A southpaw joins the roster: the role of the zebrafish nodal-related gene southpaw in cardiac LR asymmetry.</a> Trends Cardiovasc Med. 14, 43-49 (2004).</li><li>Armstrong, E. J., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+development:+endothelial+cell+signaling+and+differentiation.">Heart valve development: endothelial cell signaling and differentiation.</a> Circ Res. 95, 459-470 (2004).</li><li>Bakkers, J., Verhoeven, M. C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+the+zebrafish+heart:+from+left-right+axis+specification+to+epithelial+tissue+morphogenesis.">Shaping the zebrafish heart: from left-right axis specification to epithelial tissue morphogenesis.</a> Dev Biol. 330, 213-220 (2009).</li><li>Glickman, N. S., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+development+in+zebrafish:+coordination+of+form+and+function.">Cardiac development in zebrafish: coordination of form and function.</a> Semin Cell Dev Biol. 13, 507-513 (2002).</li><li>Heicklen-Klein, A., McReynolds, L. J., Evans, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+zebrafish+model+to+study+GATA+transcription+factors.">Using the zebrafish model to study GATA transcription factors.</a> Semin Cell Dev Biol. 16, 95-106 (2005).</li><li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cardiac+development:+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics.">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin Cell Dev Biol. 18, 27-35 (2007).</li><li>Beis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+cellular+analyses+of+zebrafish+atrioventricular+cushion+and+valve+development.">Genetic and cellular analyses of zebrafish atrioventricular cushion and valve development.</a> Development. 132, 4193-4204 (2005).</li><li>Lepilina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+epicardial+injury+response+supports+progenitor+cell+activity+during+zebrafish+heart+regeneration.">A dynamic epicardial injury response supports progenitor cell activity during zebrafish heart regeneration.</a> Cell. 127, 607-619 (2006).</li><li>Wills, A. A., Holdway, J. E., Major, R. J., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+addition+of+new+myocardial+and+epicardial+cells+fosters+homeostatic+cardiac+growth+and+maintenance+in+adult+zebrafish.">Regulated addition of new myocardial and epicardial cells fosters homeostatic cardiac growth and maintenance in adult zebrafish.</a> Development. 135, 183-192 (2008).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238, 2975-3015 (2009).</li><li>Huang, C. J., Tu, C. T., Hsiao, C. D., Hsieh, F. J., Tsai, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ-line+transmission+of+a+myocardium-specific+GFP+transgene+reveals+critical+regulatory+elements+in+the+cardiac+myosin+light+chain+2+promoter+of+zebrafish.">Germ-line transmission of a myocardium-specific GFP transgene reveals critical regulatory elements in the cardiac myosin light chain 2 promoter of zebrafish.</a> Dev Dyn. 228, 30-40 (2003).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book,+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">The Zebrafish Book, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> , (1995).</li></ol>

Questi metodi per la dissezione del cuore zebrafish di post-embrionale di pesce permette la rimozione completa di un cuore integro. Mentre questa tecnica è semplice e fornisce guide per tagli esterni che evitare di danneggiare il cuore, una mano ferma è essenziale per i più piccoli pesci. Un passo fondamentale durante la dissezione è quello di identificare il pericardio argenteo come il cuore è direttamente all&#39;interno di questa uscita. Visualizzando il pericardio fornisce un indica...

<table border="1"><tbody><tr><th> Materiale </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th><th> Commenti (opzionale) </th></tr><tr><td> Paraformaldeide </td><td> EMD </td><td> PX0055 </td><td> .04g/mL In PBS </td></tr><tr><td> Pinza # 55 </td><td> FST </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-forbici </td><td> FST </td><td> 15005-08 </td><td></td></tr><tr><td> Pin titolare </td><td> FST </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-aghi </td><td> FST </td><td> 10130-10 </td><td></td></tr><tr><td> Nutrient Agar </td><td> BBL </td><td> 11472 </td><td> 23g / L in H 2 O distillata </td></tr><tr><td> Petri </td><td> BD Falcon </td><td> 351029 </td><td></td></tr><tr><td> PCR 8-tubo strisce </td><td> USA scientifico </td><td> 1402-2500 </td><td></td></tr><tr><td> Calibro digitale </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-648-17 </td><td></td></tr></tbody></table>

heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio

Zebrafish sono diventati un organismo modello utile e pratico per lo studio dello sviluppo embrionale cuore (vedi recensioni più recenti 1-6), tuttavia, il lavoro esaminando post-embrionale attraverso lo sviluppo cardiaco adulto è stato limitato 7-10. Esaminando la morfologia cambia del cuore maturazione e l&#39;invecchiamento sono limitate dalla mancanza di tecniche disponibili per la stadiazione e isolare i cuori giovani che adulti. Al fine di analizzare lo sviluppo cuore oltre la durata della vita del pesce, si sezionano i cuori pesce zebra in numerose fasi e fotografarli per ulteriori analisi 11. Le caratteristiche morfologiche del cuore può essere facilmente quantificata e cuori individuali possono essere ulteriormente analizzati da una serie di metodi standard. Zebrafish crescere a tassi variabili e la maturazione si correla meglio con dimensione dei pesci di età, quindi, post-fissazione, abbiamo lunghezza pesce fotografare e misurare come un indicatore di maturazione di pesce. Questo protocollo spiega due distinte tecniche di dissezione dimensioni dipendenti per zebrafish, che vanno dalla lunghezza standard di larve da 3,5 mm (SL) con i cuori di lunghezza ventricolo 100μm (VL), agli adulti, con SL di 30mm e VL 1mm o più grandi. Larve e adulti hanno il corpo ben distinte e la morfologia degli organi. Le larve non sono solo molto più piccoli, hanno meno pigmento e ogni organo è visivamente molto difficile da identificare. Per questa ragione, usiamo tecniche di dissezione distinte. Abbiamo usato pre-dissezione procedure di fissaggio, come abbiamo scoperto che il cuore sezionato direttamente dopo euthanization hanno una morfologia più variabile, con palloncino molto sciolto e, come atri rispetto al cuore rimosso fissazione seguente. Il pesce fisso prima di dissezione, trattenere in vivo la morfologia e la posizione della camera (dati non riportati). In aggiunta, a scopo dimostrativo, approfittiamo del cuore (infarto) specifiche GFP transgenici Tg (myl7: GFP) twu34 (12), che ci permette di visualizzare il cuore e il servizio è particolarmente utile nelle fasi iniziali di sviluppo quando la cardiaco morfologia è meno distinto dai tessuti circostanti. Dissezione del cuore fa un&#39;ulteriore analisi della biologia cellulare e molecolare alla base dello sviluppo del cuore e con la maturazione di ibridazione in situ, immunoistochimica, estrazione di RNA o altri metodi analitici più facile in post-embrionale di zebrafish. Questo protocollo fornisce una valida tecnica per lo studio della maturazione dello sviluppo cardiaco e l&#39;invecchiamento.

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Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Un chiaro, metodo standardizzato per la dissezione e l&#39;isolamento del cuore zebrafish a più stadi di sviluppo sono descritti. Tecniche di annotazione e la quantificazione vengono anche discussi.

Dissezione di cuore in larvale, Zebrafish giovanile e degli adulti, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

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Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

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