Name: heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio
Uploaded: 2011-09-30T12:00:00
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Graças à Marie Birne, Tsiola Areti, Estevez Jaymie e Uribe Arelys. Este trabalho foi financiado em parte pela CUNY Research Foundation e Instituto Médico Howard Hughes Grant Programa de Verão para Estudantes de Graduação (SPUR) e RO3 NIH 41702-00-01. A pesquisa foi apoiada também por Queens College e alguns dos experimentos foram feitos em equipamentos a partir do Núcleo Facility for Imaging, Biologia Celular e Molecular no Queens College.

Peixe-zebra foram levantadas utilizando protocolos padrão 13 no Biotério Queens College a 28 ° C. Pares de peixes individuais ou acasalamentos grupo deve ser pré-formados e os embriões resultantes limpos e armazenados em um 28 ° C incubadora. Saúde dos peixes deve ser examinado diariamente. Em cinco dias pós-fertilização (DPF), o peixe deve ser separado em tanques a uma densidade de peixes 10-15 e entraram na creche facilidade de peixe. Para o protocolo aqui apresentados foram coletados em zebrafish...

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	<li>Ahmad, N., Long, S., Rebagliati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+southpaw+joins+the+roster:+the+role+of+the+zebrafish+nodal-related+gene+southpaw+in+cardiac+LR+asymmetry.">A southpaw joins the roster: the role of the zebrafish nodal-related gene southpaw in cardiac LR asymmetry.</a> Trends Cardiovasc Med. 14, 43-49 (2004).</li><li>Armstrong, E. J., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+development:+endothelial+cell+signaling+and+differentiation.">Heart valve development: endothelial cell signaling and differentiation.</a> Circ Res. 95, 459-470 (2004).</li><li>Bakkers, J., Verhoeven, M. 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Estes métodos para dissecção do coração do peixe zebra pós-embrionário de peixes permite a remoção completa de um coração danificado. Embora essa técnica é simples e fornece guias para cortes externos que irão evitar danos ao coração, uma mão firme é essencial para peixes menores. Um passo fundamental durante a dissecção é identificar o pericárdio prateado como o coração está diretamente dentro desse saco. Visualizando o pericárdio fornece um importante marcador par...

<table border="1"><tbody><tr><th> Material </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> Paraformaldeído </td><td> EMD </td><td> PX0055 </td><td> .04g/mL Em PBS </td></tr><tr><td> Fórceps # 55 </td><td> FST </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-tesoura </td><td> FST </td><td> 15005-08 </td><td></td></tr><tr><td> Titular Pin </td><td> FST </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-agulhas </td><td> FST </td><td> 10130-10 </td><td></td></tr><tr><td> Agar nutriente </td><td> BBL </td><td> 11472 </td><td> 23g / L de H 2 O destilada </td></tr><tr><td> Placas de Petri </td><td> BD Falcon </td><td> 351029 </td><td></td></tr><tr><td> PCR 8 tubo de tiras </td><td> EUA Scientific </td><td> 1402-2500 </td><td></td></tr><tr><td> Caliper Digital </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-648-17 </td><td></td></tr></tbody></table>

heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio

Peixe-zebra tornou-se um organismo modelo benéfico e prático para o estudo do desenvolvimento embrionário do coração (ver comentários recentes 1-6), no entanto, o trabalho de examinar pós-embrionário, através do desenvolvimento adulto cardíaca tem sido limitada 7-10. Examinar a morfologia mudança do coração amadurecimento e envelhecimento são restritas pela ausência de técnicas disponíveis para o estadiamento e isolar os corações juvenis e adultos. A fim de analisar o desenvolvimento do coração mais tempo de vida do peixe, dissecamos corações zebrafish em estágios numerosos e fotografá-los para posterior análise 11. As características morfológicas do coração podem ser facilmente quantificadas e corações individuais podem ser posteriormente analisado por uma série de métodos standard. Zebrafish crescer a taxas variáveis ​​e maturação se correlaciona melhor com o tamanho do peixe do que a idade, assim, pós-fixação, nós comprimento dos peixes fotografia e medida como um indicador de maturação dos peixes. Este protocolo explica duas distintas, tamanho técnicas de dissecção dependente de peixe-zebra, que vão desde larvas de comprimento padrão de 3,5 mm (SL) com corações de comprimento ventrículo 100μm (VL), para adultos, com SL de 30mm e 1mm VL ou maior. Larvas de peixes e adultos têm corpo bastante distintos e morfologia do órgão. Larvas não são apenas significativamente menor, eles têm menos pigmentos e cada órgão é visualmente muito difíceis de identificar. Por este motivo, usamos técnicas de dissecção distintas. Usamos pré-dissecção procedimentos de fixação, como descobrimos que os corações dissecados imediatamente após a eutanásia tem uma morfologia mais variável, com balão muito solto e, como átrios em comparação com os corações retirados fixação seguintes. O peixe fixadas antes dissecção, manter vivo na morfologia e posição de câmara (dados não mostrados). Além disso, para fins de demonstração, aproveitamos do coração (miocárdio) específicos GFP transgênicos Tg (myl7: GFP) twu34 (12), o que nos permite visualizar todo o coração e é particularmente útil nos primeiros estágios de desenvolvimento quando o cardíaco morfologia é menos distinta dos tecidos adjacentes. Dissecção do coração faz uma análise mais aprofundada da biologia celular e molecular subjacentes ao desenvolvimento e maturação do coração utilizando hibridização in situ, imuno-histoquímica, extração de RNA ou outros métodos de análise mais fácil no pós-embrionário zebrafish. Este protocolo irá proporcionar uma técnica valiosa para o estudo da maturação de desenvolvimento cardíacas e envelhecimento.

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Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Um método, claro padronizados para dissecção e isolamento do coração zebrafish em vários estágios de desenvolvimento são descritos. Técnicas de anotação e quantificação também são discutidos.

Dissecção do coração em larval, Zebrafish Juvenil e Adulto, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

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Biology

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