Name: heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio
Uploaded: 2011-09-30T12:00:00
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Gracias a Marie Birne, Tsiola Areti, Estévez Jaymie y Arelys Uribe. Este trabajo fue apoyado en parte por la Fundación de Investigación de CUNY y Howard Hughes Medical Institute Programa de Verano de becas para estudiantes de pregrado (SPUR) y NIH SR3 41702-00-01. La investigación también fue apoyada por el Queens College y algunos de los experimentos se realizaron en el equipo del Fondo para el núcleo de la Imagen, Biología Celular y Molecular de la Universidad de Queens.

Pez cebra se plantearon a través de protocolos estándar de 13 en las instalaciones de animales Queens College a 28 ° C. Los distintos pares de pescado o apareamientos grupo debe ser preformado y los embriones resultantes limpian y se almacenan en una incubadora de 28 ° C. Salud de los peces deben ser examinados todos los días. En la fecundación después de 5 días (DPF), el pescado debe ser separada en los tanques, con una densidad de peces 10-15 y entró en la guardería instalación de pescado. Para q...

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	<li>Ahmad, N., Long, S., Rebagliati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+southpaw+joins+the+roster:+the+role+of+the+zebrafish+nodal-related+gene+southpaw+in+cardiac+LR+asymmetry.">A southpaw joins the roster: the role of the zebrafish nodal-related gene southpaw in cardiac LR asymmetry.</a> Trends Cardiovasc Med. 14, 43-49 (2004).</li><li>Armstrong, E. J., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+development:+endothelial+cell+signaling+and+differentiation.">Heart valve development: endothelial cell signaling and differentiation.</a> Circ Res. 95, 459-470 (2004).</li><li>Bakkers, J., Verhoeven, M. C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+the+zebrafish+heart:+from+left-right+axis+specification+to+epithelial+tissue+morphogenesis.">Shaping the zebrafish heart: from left-right axis specification to epithelial tissue morphogenesis.</a> Dev Biol. 330, 213-220 (2009).</li><li>Glickman, N. S., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+development+in+zebrafish:+coordination+of+form+and+function.">Cardiac development in zebrafish: coordination of form and function.</a> Semin Cell Dev Biol. 13, 507-513 (2002).</li><li>Heicklen-Klein, A., McReynolds, L. J., Evans, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+zebrafish+model+to+study+GATA+transcription+factors.">Using the zebrafish model to study GATA transcription factors.</a> Semin Cell Dev Biol. 16, 95-106 (2005).</li><li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cardiac+development:+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics.">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin Cell Dev Biol. 18, 27-35 (2007).</li><li>Beis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+cellular+analyses+of+zebrafish+atrioventricular+cushion+and+valve+development.">Genetic and cellular analyses of zebrafish atrioventricular cushion and valve development.</a> Development. 132, 4193-4204 (2005).</li><li>Lepilina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+epicardial+injury+response+supports+progenitor+cell+activity+during+zebrafish+heart+regeneration.">A dynamic epicardial injury response supports progenitor cell activity during zebrafish heart regeneration.</a> Cell. 127, 607-619 (2006).</li><li>Wills, A. A., Holdway, J. E., Major, R. J., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+addition+of+new+myocardial+and+epicardial+cells+fosters+homeostatic+cardiac+growth+and+maintenance+in+adult+zebrafish.">Regulated addition of new myocardial and epicardial cells fosters homeostatic cardiac growth and maintenance in adult zebrafish.</a> Development. 135, 183-192 (2008).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238, 2975-3015 (2009).</li><li>Huang, C. J., Tu, C. T., Hsiao, C. D., Hsieh, F. J., Tsai, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ-line+transmission+of+a+myocardium-specific+GFP+transgene+reveals+critical+regulatory+elements+in+the+cardiac+myosin+light+chain+2+promoter+of+zebrafish.">Germ-line transmission of a myocardium-specific GFP transgene reveals critical regulatory elements in the cardiac myosin light chain 2 promoter of zebrafish.</a> Dev Dyn. 228, 30-40 (2003).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book,+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">The Zebrafish Book, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> , (1995).</li></ol>

Estos métodos para la disección del corazón del pez cebra de post-embrionario de peces permite la extirpación completa de un corazón en buen estado. Si bien esta técnica es sencilla y ofrece guías para los cortes externos que evitar que se dañe el corazón, una mano firme es esencial para los peces más pequeños. Un paso clave en la disección es identificar el pericardio plateado como el corazón está directamente dentro de este saco. Visualizar el pericardio proporciona un marcad...

<table border="1"><tbody><tr><th> Material </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> Paraformaldehído </td><td> EMD </td><td> PX0055 </td><td> .04g/mL En PBS </td></tr><tr><td> Pinzas # 55 </td><td> FST </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-tijeras </td><td> FST </td><td> 15005-08 </td><td></td></tr><tr><td> Pin titular </td><td> FST </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-agujas </td><td> FST </td><td> 10130-10 </td><td></td></tr><tr><td> Agar nutritivo </td><td> BBL </td><td> 11472 </td><td> 23 g / L en agua destilada H 2 O </td></tr><tr><td> Placas de Petri </td><td> BD Falcon </td><td> 351029 </td><td></td></tr><tr><td> PCR tiras de 8 tubos </td><td> EE.UU. Científico </td><td> 1402-2500 </td><td></td></tr><tr><td> Calibre digital </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-648-17 </td><td></td></tr></tbody></table>

heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio

Pez cebra se han convertido en un organismo modelo beneficioso y práctico para el estudio del desarrollo embrionario del corazón (ver comentarios de los últimos 1-6), sin embargo, el trabajo de examen de post-embrionario a través del desarrollo adulto cardiaca se ha limitado 7.10. Examinar el cambio de morfología del corazón de maduración y el envejecimiento se ven limitadas por la falta de técnicas disponibles para la puesta en escena y el aislamiento de los corazones juveniles y adultos. Con el fin de analizar el desarrollo del corazón durante la vida útil del pescado, que diseccionan el corazón del pez cebra en varias etapas y una fotografía para su posterior análisis 11. Las características morfológicas del corazón puede ser cuantificado y corazones individuales pueden ser analizados por una serie de métodos estándar. Pez cebra crecen a tasas variables y la maduración se correlaciona mejor con el tamaño de los peces de la edad, por lo tanto, posterior a la fijación, longitud del pez fotografía y medida como un indicador de la maduración de los peces. Este protocolo se explican dos técnicas distintas, el tamaño de la disección dependientes de pez cebra, que van desde 3,5 mm de longitud estándar larvas (SL) con el corazón de la longitud del ventrículo 100μm (VL), a los adultos, con el SL de 30 mm y 1 mm de VL o más grande. Las larvas de peces y adultos tienen el cuerpo muy diferente y la morfología de órganos. Las larvas no sólo son significativamente más pequeños, tienen menos pigmento y cada órgano es visualmente muy difíciles de identificar. Por esta razón, utilizamos distintas técnicas de disección. Se utilizó antes de la disección de los procedimientos de fijación, como hemos descubierto que el corazón disecado directamente después de la eutanasia tienen una morfología más variable, con el balón muy flojo y como aurículas en comparación con el corazón eliminado después de la fijación. Los peces fijo antes de la disección, mantener vivo en la morfología y la posición de la cámara (datos no mostrados). Además, para fines de demostración, nos aprovechamos del corazón (miocardio) específicos GFP transgénicos Tg (myl7: GFP) twu34 (12), que nos permite visualizar todo el corazón y es particularmente útil en las primeras etapas de desarrollo, cuando el corazón morfología es menos clara de los tejidos circundantes. La disección del corazón hace un mayor análisis de la biología celular y molecular que subyacen al desarrollo del corazón y la maduración utilizando hibridación in situ, inmunohistoquímica, la extracción de RNA o otros métodos analíticos más fácil en el post-embrionario del pez cebra. Este protocolo proporciona una técnica valiosa para el estudio de la maduración de desarrollo cardíaco y el envejecimiento.

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Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Un método claro y estandarizado para la disección y el aislamiento del corazón del pez cebra en varias etapas de desarrollo se describen. Técnicas de anotación y cuantificación también se discuten.

La disección del corazón en las larvas, juveniles y adultos de pez cebra, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

Research

JoVE Journal

Biology

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

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