Name: heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio
Uploaded: 2011-09-30T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio at JoVE.com

Tack vare Marie Birne, Areti Tsiola, Jaymie Estevez och Arelys Uribe. Detta arbete stöddes delvis av CUNY Research Foundation och Howard Hughes Medical Institute Grant sommarskola för studenter (SPUR) och NIH RO3 41702-00-01. Forskning stöddes också av Queens College och några av experimenten gjordes på utrustning från Core Facility for Imaging, Cell-och molekylärbiologi vid Queens College.

Zebrafisk höjdes med standardprotokoll 13 i Queens College Djuranläggningen vid 28 ° C. Enskilda fiskar par eller parningar grupp bör vara förformade och den resulterande embryona rengöras och lagras i ett 28 ° C inkubator. Fisk hälsa bör undersökas dagligen. Vid 5-dagars efter befruktning (DPF), bör fisk delas in i tankar vid en 10-15 fiskar täthet och trädde i fisken anläggningen barnkammaren. För protokollet presenteras här zebrafisk samlades in vid larv genom vuxna stadier: 15, 30, 45, 60,...

<ol>
	<li>Ahmad, N., Long, S., Rebagliati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+southpaw+joins+the+roster:+the+role+of+the+zebrafish+nodal-related+gene+southpaw+in+cardiac+LR+asymmetry.">A southpaw joins the roster: the role of the zebrafish nodal-related gene southpaw in cardiac LR asymmetry.</a> Trends Cardiovasc Med. 14, 43-49 (2004).</li><li>Armstrong, E. J., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+development:+endothelial+cell+signaling+and+differentiation.">Heart valve development: endothelial cell signaling and differentiation.</a> Circ Res. 95, 459-470 (2004).</li><li>Bakkers, J., Verhoeven, M. C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+the+zebrafish+heart:+from+left-right+axis+specification+to+epithelial+tissue+morphogenesis.">Shaping the zebrafish heart: from left-right axis specification to epithelial tissue morphogenesis.</a> Dev Biol. 330, 213-220 (2009).</li><li>Glickman, N. S., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+development+in+zebrafish:+coordination+of+form+and+function.">Cardiac development in zebrafish: coordination of form and function.</a> Semin Cell Dev Biol. 13, 507-513 (2002).</li><li>Heicklen-Klein, A., McReynolds, L. J., Evans, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+zebrafish+model+to+study+GATA+transcription+factors.">Using the zebrafish model to study GATA transcription factors.</a> Semin Cell Dev Biol. 16, 95-106 (2005).</li><li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cardiac+development:+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics.">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin Cell Dev Biol. 18, 27-35 (2007).</li><li>Beis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+cellular+analyses+of+zebrafish+atrioventricular+cushion+and+valve+development.">Genetic and cellular analyses of zebrafish atrioventricular cushion and valve development.</a> Development. 132, 4193-4204 (2005).</li><li>Lepilina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+epicardial+injury+response+supports+progenitor+cell+activity+during+zebrafish+heart+regeneration.">A dynamic epicardial injury response supports progenitor cell activity during zebrafish heart regeneration.</a> Cell. 127, 607-619 (2006).</li><li>Wills, A. A., Holdway, J. E., Major, R. J., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+addition+of+new+myocardial+and+epicardial+cells+fosters+homeostatic+cardiac+growth+and+maintenance+in+adult+zebrafish.">Regulated addition of new myocardial and epicardial cells fosters homeostatic cardiac growth and maintenance in adult zebrafish.</a> Development. 135, 183-192 (2008).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238, 2975-3015 (2009).</li><li>Huang, C. J., Tu, C. T., Hsiao, C. D., Hsieh, F. J., Tsai, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ-line+transmission+of+a+myocardium-specific+GFP+transgene+reveals+critical+regulatory+elements+in+the+cardiac+myosin+light+chain+2+promoter+of+zebrafish.">Germ-line transmission of a myocardium-specific GFP transgene reveals critical regulatory elements in the cardiac myosin light chain 2 promoter of zebrafish.</a> Dev Dyn. 228, 30-40 (2003).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book,+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">The Zebrafish Book, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> , (1995).</li></ol>

Dessa metoder för dissekering av zebrafisk hjärtat av post-embryonala fisk möjliggör fullständig borttagning av ett oskadat hjärta. Även om denna teknik är enkel och ger riktlinjer för extern nedskärningar som förhindrar skador på hjärtat, är en stadig hand viktigt för mindre fiskar. Ett viktigt steg under dissektionen är att identifiera de silverfärgade hjärtsäcken som hjärtat är direkt inom detta SAC. Visualisera hjärtsäck är en viktig markör för att hitta och slu...

<table border="1"><tbody><tr><th> Material </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th><th> Kommentarer (frivilligt) </th></tr><tr><td> Paraformaldehyd </td><td> EMD </td><td> PX0055 </td><td> .04g/mL I PBS </td></tr><tr><td> Tång # 55 </td><td> FST </td><td> 11.295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-sax </td><td> FST </td><td> 15.005-08 </td><td></td></tr><tr><td> Pin hållare </td><td> FST </td><td> 26.016-12 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-nålar </td><td> FST </td><td> 10.130-10 </td><td></td></tr><tr><td> Näringsagar </td><td> BBL </td><td> 11.472 </td><td> 23g / L i destillerat H 2 O </td></tr><tr><td> Petriskålar </td><td> BD Falcon </td><td> 351.029 </td><td></td></tr><tr><td> PCR-8-tube remsor </td><td> USA Vetenskapliga </td><td> 1402-2500 </td><td></td></tr><tr><td> Digitalt Skjutmått </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-648-17 </td><td></td></tr></tbody></table>

heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, danio rerio

Zebrafisk har blivit en positiv och praktisk modell organism för studier av embryonala hjärtat utveckling (se guide 1-6), men arbetet undersöka post-embryonala genom vuxen hjärt utveckling har varit begränsade 7-10. Undersöka ändra morfologi mogna och åldrande hjärta begränsas av bristen på tekniker för mellanstationer och isolera unga och vuxna hjärtan. För att analysera hjärtats utveckling under fiskens livscykel, dissekera vi zebrafisk hjärtan på flera stadier och fotografera dem för vidare analys 11. Den morfologiska funktioner i hjärtat kan lätt kvantifieras och enskilda hjärtan kan analyseras ytterligare genom en mängd standardmetoder. Zebrafisk växa till rörlig ränta och mognad korrelerar bättre med fisk storlek än ålder, alltså efter fixering, vi fotograferar och mäta fisk längd som en mätare av fisk mognad. Detta protokoll förklarar två olika, storlek beroende dissektion tekniker för zebrafisk, allt från larver 3,5 mm standard längd (SL) med ett hjärta av 100μm ventrikeln längd (VL), för vuxna, med SL i 30mm och VL 1 mm eller större. Larver och vuxen fisk har helt olika kropp och orgel morfologi. Larver är inte bara betydligt mindre, de har mindre pigment och varje organ är visuellt mycket svårt att identifiera. Av denna anledning använder vi olika dissektion tekniker. Vi använde före dissektion förfaranden fixering, eftersom vi upptäckt att hjärtan dissekeras direkt efter euthanization har en mer varierande morfologi, med mycket lös och ballong som förmak jämfört med hjärtan bort efter fixering. Fisken fasta före dissektion, behålla in vivo morfologi och kammare ställning (data visas inte). Dessutom, för demonstration tar vi nytta av hjärtat (hjärtinfarkt) särskilda GFP transgena Tg (myl7: GFP) twu34 (12), som tillåter oss att visualisera hela hjärtat och är särskilt användbart i tidiga stadier i utvecklingen när hjärt- morfologi är mindre skiljer sig från omgivande vävnader. Dissektion av hjärtat ger ytterligare analys av cell-och molekylärbiologi underliggande hjärt utveckling och mognad med in situ hybridisering, immunohistokemi, RNA-extraktion eller andra analysmetoder lättare i post-embryonal zebrafisk. Detta protokoll kommer att ge en värdefull teknik för att studera hjärtats utveckling mognad och åldrande.

Watch this Scientific Journal Video about Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio at JoVE.com

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

En tydlig och standardiserad metod för dissekering och isolering av zebrafisk hjärtat på flera utvecklingsstadier beskrivs. Annotering och kvantifiering tekniker diskuteras också.

Hjärta Dissection i Larvernas, unga och vuxna Zebrafish, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

Research

JoVE Journal

Biology

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Dissekering av Larvernas CNS i Drosophila melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

Drosophila Larvernas NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

Gross och Fine dissekering av Inner Ear Sensorisk epitel i Vuxen Zebrafish ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Dissektion av organ från vuxna Zebrafish

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissektion och färgning av Drosophila Larvernas Äggstockar

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Dissekering av vuxna Zebrafish Kidney

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo elektroporering av Morpholinos i Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

Regelbunden skötsel och underhåll av en zebrafisk (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Laboratorium: En introduktion

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

In Vivo Modellering av Morbid Human Genome hjälp Danio rerio

Here,  we present methods for the development of assays to query potentially clinically  significant nonsynonymous changes using in  vivo complementation ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging vuxna zebrafisk

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...