Name: visualizing dengue virus through alexa fluor labeling
Uploaded: 2011-07-09T12:00:00
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यह काम राष्ट्रीय चिकित्सा अनुसंधान परिषद, सिंगापुर द्वारा वित्त पोषित किया गया.

1. डेंगू वायरस के Alexa Fluor लेबलिंग <ol><li> लेबलिंग प्रतिक्रिया से पहले, sucrose के तकिया के साथ डेंगू वायरस शुद्ध और आवश्यक अभिकर्मकों और उपकरणों के रूप में प्रोटोकॉल में संकेत दिया तैयार. </li><li> ताजा 0.2M सोडियम बिकारबो...

<ol>
	<li>Olenych, S. G., Claxton, N. S., Ottenberg, G. K. &. a. m. p. ;. a. m. p., Davidson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Fluorescent+Protein+Color+Palette.">The Fluorescent Protein Color Palette.</a> Current Protocols in Cell Biology. 21.5, 1-34 (2007).</li><li>Panchuk-Voloshina, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alexa+dyes,+a+series+of+new+fluorescent+dyes+that+yield+exceptionally+bright,+photostable+conjugates.">Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 47, 1179-1188 (1999).</li><li>Shaner, N. C., Patterson, G. H., Davidson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+fluorescent+protein+technology.">Advances in fluorescent protein technology.</a> J Cell Sci. 120, 4247-4260 (2007).</li><li>Lippincott-Schwartz, J., Patterson, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+use+of+fluorescent+protein+markers+in+living+cells.">Development and use of fluorescent protein markers in living cells.</a> Science. 300, 87-91 (2003).</li><li>Kuhn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+dengue+virus:+implications+for+flavivirus+organization,+maturation,+and+fusion.">Structure of dengue virus: implications for flavivirus organization, maturation, and fusion.</a> Cell. 108, 717-725 (2002).</li><li>Aguilar, J. S., Roy, D., Ghazal, P., Wagner, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethyl+sulfoxide+blocks+herpes+simplex+virus-1+productive+infection+in+vitro+acting+at+different+stages+with+positive+cooperativity.+Application+of+micro-array+analysis.">Dimethyl sulfoxide blocks herpes simplex virus-1 productive infection in vitro acting at different stages with positive cooperativity. Application of micro-array analysis.</a> BMC Infect Dis. 2, 9-9 (2002).</li><li>Zhang, S. L., Tan, H. C., Hanson, B. J., Ooi, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+Alexa+Fluor+dye+labelling+of+dengue+virus.">A simple method for Alexa Fluor dye labelling of dengue virus.</a> J Virol Methods. 167, 172-177 (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Alexa Fluor Succinimidyl Esters (Molecular Probes. , (2009).</li><li>Huang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+proteins+stained+by+Alexa+dyes.">Analysis of proteins stained by Alexa dyes.</a> Electrophoresis. 25, 779-784 (2004).</li><li>Freistadt, M. S., Eberle, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+poliovirus+for+flow+cytometric+cell+surface+binding+studies.">Fluorescent poliovirus for flow cytometric cell surface binding studies.</a> J Virol Methods. 134, 1-7 (2006).</li></ol>

हालांकि इस रिपोर्ट में AF594 डाई इस्तेमाल किया गया था, इसी तरह की लेबलिंग रसायन शास्त्र के साथ Alexa Fluor succinimidyl एस्टर श्रृंखला में fluorophores की एक विस्तृत श्रृंखला उपलब्ध है. यह इमेजिंग परे लेबलिंग आवेदन का विस्तार क?...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </th></tr><tr><td> सोडियम बिकारबोनिट </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> S6297 </td><td></td></tr><tr><td> Hydroxylamine </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> 159417 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम हीड्राकसीड </td><td> मर्क </td><td> 106498 </td><td></td></tr><tr><td> AF594 succinimidyl एस्टर </td><td> आण्विक जांच, Invitrogen </td><td> A20004 </td><td></td></tr><tr><td> PD-10 स्तंभ </td><td> जीई हेल्थकेयर </td><td> 17-0851-01 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> H6147 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> S3014 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> E9884 </td><td></td></tr><tr><td> M-199 </td><td> Invitrogen </td><td> 11150 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td><td></td></tr><tr><td> 4-अच्छी तरह से थाली </td><td> Nunc </td><td> 176740 </td><td></td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> Einst </td><td> 0111520 </td><td></td></tr><tr><td> माइक्रोस्कोप स्लाइड </td><td> ब्रांड सेल </td><td> 7105 </td><td></td></tr><tr><td> 3H5 हाइब्रिडोमा </td><td> ATCC </td><td> HB46 </td><td></td></tr><tr><td> 10x पीबीएस </td><td> 1 बेस </td><td> BUF - २,०४०-10X1L </td><td></td></tr><tr><td> Saponin </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> S4521 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> A7906 </td><td></td></tr><tr><td> मैग्नीशियम क्लोराइड </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> M2670 </td><td></td></tr><tr><td> कैल्शियम क्लोराइड </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> C3306 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehye </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> 15,812-7 </td><td></td></tr><tr><td> 4-88 Mowiol </td><td> Calbiochem </td><td> 475904 </td><td></td></tr><tr><td> Dabco </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> D27802 </td><td></td></tr><tr><td> Tabletop अपकेंद्रित्र </td><td> Eppendorf </td><td> 5424 </td><td></td></tr><tr><td> Confocal खुर्दबीन </td><td> Zeiss </td><td> 710 LSM </td><td></td></tr></tbody></table> एम 199 मध्यम विकास तैयार करने के लिए, 50ml FBS जोड़ने के लिए, सोडियम पाइरूवेट और एम 199, बाँझ फिल्टर के 500ml गैर जरूरी अमीनो एसिड की 5ml 5ml. एम 199 रखरखाव मध्यम तैयार करने के लिए, FBS की 15ml, सोडियम पाइरूवेट और एम 199, बाँझ फिल्टर के 500ml गैर जरूरी अमीनो एसिड की 5ml 5ml जोड़ें.

visualizing dengue virus through alexa fluor labeling

वायरस और सेल के बीच बातचीत में जल्दी घटनाओं संक्रमण के परिणाम पर गहरा प्रभाव हो सकता है. निर्धारण कारक है कि इस बातचीत को प्रभावित रोग रोगजनन की बेहतर समझ के लिए नेतृत्व और इस तरह से टीका या चिकित्सीय डिजाइन को प्रभावित कर सकता है. इसलिए, विधियों के विकास के लिए इस बातचीत की जांच उपयोगी होगा. Fluorophores विकास 1-3 और इमेजिंग प्रौद्योगिकी 4 में हाल ही में प्रगति डेंगू रोगजनन पर हमारे वर्तमान ज्ञान में सुधार और इस प्रकार सालाना घटनेवाला डेंगू संक्रमण के लाखों को कम करने के लिए मार्ग प्रशस्त करने के लिए शोषण किया जा सकता है. छा डेंगू वायरस के लिए एक बाहरी पाड़ 90 लिफाफा glycoprotein (ई) nucleocapsid खोल, जो एक सकारात्मक भूग्रस्त आरएनए जीनोम 5 शामिल रक्षा dimers से मिलकर की है. वायरस की सतह पर समान प्रोटीन सब यूनिटों को इस तरह से एक amine प्रतिक्रियाशील डाई के साथ लेबल किया जा सकता है और immunofluorescent माइक्रोस्कोपी के माध्यम से कल्पना. यहाँ, हम Alexa Fluor succinimidyl एस्टर डाई सोडियम बिकारबोनिट बफर है कि लेबलिंग के बाद अत्यधिक व्यवहार्य वायरस झुकेंगे में सीधे भंग के साथ डेंगू वायरस की लेबलिंग का एक सरल विधि प्रस्तुत करते हैं. जीवित वायरस और मौजूदा निर्माता प्रोटोकॉल के लिए प्रोटीन लेबलिंग आमतौर पर डाइमिथाइल sulfoxide में डाई के पुनर्गठन की आवश्यकता है की लेबलिंग के लिए कोई मानकीकृत प्रक्रिया है. डाइमिथाइल sulfoxide की उपस्थिति भी मिनट मात्रा में, इस वायरस के उत्पादक संक्रमण ब्लॉक और भी सेल cytotoxicity 6 प्रेरित कर सकते हैं. इस प्रोटोकॉल में डाइमिथाइल sulfoxide के उपयोग के अपवर्जन इस प्रकार इस संभावना को कम. एलेक्सा Fluor रंजक बेहतर photostability है और fluorescein और rhodamine 2 के रूप में आम रंजक, की तुलना में कम पीएच के प्रति संवेदनशील हैं, उन्हें सेलुलर तेज और वायरस के endosomal परिवहन पर अध्ययन के लिए आदर्श बना. Alexa Fluor डाई के संयुग्मन लेबल डेंगू वायरस के वायरस विशेष एंटीबॉडी और मेजबान 7 कोशिकाओं में अपने ख्यात रिसेप्टर्स द्वारा मान्यता को प्रभावित नहीं किया. इस विधि virological अध्ययन में उपयोगी अनुप्रयोगों सकता है.

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Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

Fluorophore विकास और इमेजिंग तकनीक, Alexa Fluor लेबलिंग डेंगू के वायरस वायरस और सेल के बीच बातचीत जल्दी कल्पना करने के लिए तैयार किया गया था की एक सरल विधि के क्षेत्र में प्रगति का लाभ उठाते हुए.

एलेक्सा Fluor लेबल के माध्यम से डेंगू वायरस Visualizing

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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न्युट्रोफिल अलगाव और विश्लेषण करने के लिए चिकित्सीय एजेंट लिंफोमा सेल संवेदनशीलता में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए

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visualizing Macrophage Extracellular जाल का उपयोग कर फोकल माइक्रोस्कोपी

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तेजी से, सुरक्षित, और सरल मैनुअल बेडसाइड न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण पूरे रक्त के नमूनों में वायरस का पता लगाने के लिए

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