Name: visualizing dengue virus through alexa fluor labeling
Uploaded: 2011-07-09T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling at JoVE.com

Bu çalışma, Singapur Ulusal Tıp Araştırma Konseyi tarafından finanse edilmiştir.

1. Dang virüsü Alexa Fluor etiketleme <ol><li> Etiketleme reaksiyon önce, sakaroz yastık dang virüs arındırmak ve protokolde belirtilen gerekli reaktifler ve ekipman hazırlamak. </li><li> Etiketleme ve filtre 0.2μm şırınga filtreler ile sterilize hemen önce taze 0,2 M sodyum bikarbonat tamponu, pH 8.5 (etiketleme tampon), ve 1,5 M hidroksilamin tamponu, pH 8.3 (reaktif durdurmak) hazırlayın. </li><li> 1ml 2ml tüp tampon etiketleme saflaştırılmış dang virüsü yaklaşık 3x10 8 plak olu?...

<ol>
	<li>Olenych, S. G., Claxton, N. S., Ottenberg, G. K. &. a. m. p. ;. a. m. p., Davidson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Fluorescent+Protein+Color+Palette.">The Fluorescent Protein Color Palette.</a> Current Protocols in Cell Biology. 21.5, 1-34 (2007).</li><li>Panchuk-Voloshina, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alexa+dyes,+a+series+of+new+fluorescent+dyes+that+yield+exceptionally+bright,+photostable+conjugates.">Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 47, 1179-1188 (1999).</li><li>Shaner, N. C., Patterson, G. H., Davidson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+fluorescent+protein+technology.">Advances in fluorescent protein technology.</a> J Cell Sci. 120, 4247-4260 (2007).</li><li>Lippincott-Schwartz, J., Patterson, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+use+of+fluorescent+protein+markers+in+living+cells.">Development and use of fluorescent protein markers in living cells.</a> Science. 300, 87-91 (2003).</li><li>Kuhn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+dengue+virus:+implications+for+flavivirus+organization,+maturation,+and+fusion.">Structure of dengue virus: implications for flavivirus organization, maturation, and fusion.</a> Cell. 108, 717-725 (2002).</li><li>Aguilar, J. S., Roy, D., Ghazal, P., Wagner, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethyl+sulfoxide+blocks+herpes+simplex+virus-1+productive+infection+in+vitro+acting+at+different+stages+with+positive+cooperativity.+Application+of+micro-array+analysis.">Dimethyl sulfoxide blocks herpes simplex virus-1 productive infection in vitro acting at different stages with positive cooperativity. Application of micro-array analysis.</a> BMC Infect Dis. 2, 9-9 (2002).</li><li>Zhang, S. L., Tan, H. C., Hanson, B. J., Ooi, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+Alexa+Fluor+dye+labelling+of+dengue+virus.">A simple method for Alexa Fluor dye labelling of dengue virus.</a> J Virol Methods. 167, 172-177 (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Alexa Fluor Succinimidyl Esters (Molecular Probes. , (2009).</li><li>Huang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+proteins+stained+by+Alexa+dyes.">Analysis of proteins stained by Alexa dyes.</a> Electrophoresis. 25, 779-784 (2004).</li><li>Freistadt, M. S., Eberle, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+poliovirus+for+flow+cytometric+cell+surface+binding+studies.">Fluorescent poliovirus for flow cytometric cell surface binding studies.</a> J Virol Methods. 134, 1-7 (2006).</li></ol>

Bu raporda AF594 boya kullanılmış olmasına rağmen, Alexa Fluor succinimidyl esterleri serisi fluorophores geniş bir yelpazede benzer etiketleme kimyası ile kullanılabilir. Bu etiketleme uygulaması görüntüleme ötesinde genişletmek olabilir. Flow sitometri, heyecanlı ve FACS makine ile tespit edilebilir fluorophores etiketleme derecesini tahmin etmek için konfokal mikroskopi bir alternatif olarak kullanılabilir. Alexa Fluor boyalar, serbest amino grupları, öncelikle arginin ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> Sodyum bikarbonat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S6297 </td><td></td></tr><tr><td> Hidroksilamin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 159417 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum hidroksit </td><td> Merck </td><td> 106498 </td><td></td></tr><tr><td> AF594 succinimidyl esterleri </td><td> Moleküler Problar, Invitrogen </td><td> A20004 </td><td></td></tr><tr><td> PD-10 sütun </td><td> GE Healthcare </td><td> 17-0851-01 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H6147 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S3014 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E9884 </td><td></td></tr><tr><td> M-199 </td><td> Invitrogen </td><td> 11150 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td><td></td></tr><tr><td> 4-plaka </td><td> Nunc </td><td> 176740 </td><td></td></tr><tr><td> Lameller </td><td> Einst </td><td> 0111520 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop lamı </td><td> Marka Yelken </td><td> 7105 </td><td></td></tr><tr><td> 3H5 hibridoma </td><td> ATCC </td><td> HB46 </td><td></td></tr><tr><td> 10x PBS </td><td> 1. Tabanı </td><td> BUF-2040-10X1L </td><td></td></tr><tr><td> Saponin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S4521 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A7906 </td><td></td></tr><tr><td> Magnezyum klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2670 </td><td></td></tr><tr><td> Kalsiyum klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3306 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehye </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 15,812-7 </td><td></td></tr><tr><td> Mowiol 4-88 </td><td> Calbiochem </td><td> 475904 </td><td></td></tr><tr><td> Dabco </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D27802 </td><td></td></tr><tr><td> Masa üstü santrifüj </td><td> Eppendorf </td><td> 5424 </td><td></td></tr><tr><td> Konfokal mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> EKK 710 </td><td></td></tr></tbody></table> M-199 büyüme ortamı hazırlamak için, 500ml M-199, steril filtre olmayan amino asitlerin sodyum piruvat ve 5ml 5ml, FBS 50ml ekleyin. M-199 bakım ortamı hazırlamak için, FBS, 15ml, 500ml M-199, steril filtre olmayan amino asitlerin sodyum piruvat ve 5ml, 5ml ekleyin.

visualizing dengue virus through alexa fluor labeling

Virüs ve hücre arasındaki etkileşimin erken olaylar enfeksiyon sonucu üzerinde derin bir etkiye sahip olabilir. Bu etkileşimin etkileyen faktörlerin belirlenmesi, hastalık patogenezi daha iyi anlaşılması için yol ve böylece aşı veya tedavi edici tasarımı etkileyebilir. Bu nedenle, bu etkileşimin prob yöntemlerin geliştirilmesi yararlı olacaktır. Fluorophores geliştirme 1-3 ve görüntüleme teknolojisi 4, son gelişmeler, dang patogenezi ile ilgili mevcut bilgi geliştirmek ve böylece milyonlarca yılda meydana gelen dang enfeksiyonları azaltmak için önünü yararlanılabilir. Zarflı Dang virüsü tek bir pozitif iplikli RNA genomu 5 içeren nucleocapsid kabuk korunması, 90 zarf glikoprotein (E) dimerleri oluşan harici bir iskele vardır. Böylece virüsün yüzeyinde aynı protein altbirimden amin reaktif boya ile etiketlenmiş ve immunofluorescent mikroskobu yoluyla görüntülendi olabilir. Burada, Alexa Fluor succinimidyl ester boya etiketleme sonra, son derece canlı virüs vermiştir sodyum bikarbonat tampon doğrudan çözünmüş dang virüsü etiketleme basit bir yöntem mevcut. Canlı virüs ve protein etiketleme genellikle dimetil sülfoksit boya sulandırılması gereklidir mevcut üretici protokol etiketlenmesi için standart bir prosedür yoktur. Varlığı, dimetil sülfoksit dakika miktarlarda bile, virüs verimli enfeksiyonu engellemek ve aynı zamanda hücre sitotoksik 6 neden. Bu protokol dimetil sülfoksit kullanımı dışlama böylece bu olasılığı azalır. Alexa Fluor boyalar üstün fotostabilite ve hücresel alımı ve virüs endosomal taşıma çalışmaları için ideal hale getirir, floresein ve rodamin 2 olarak ortak boyalar, daha az pH duyarlı . Alexa Fluor boya konjugasyon virüs spesifik antikor ve konak hücrelerine 7 varsayılan reseptörleri etiketli Dang virüsü tanıma etkilemedi. Bu yöntem, virolojik çalışmalarda faydalı uygulamalar olabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling at JoVE.com

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

Fluorofor geliştirme ve görüntüleme teknolojisi, virüs, virüs ve hücre arasındaki ilk etkileşimleri görselleştirmek için geliştirildi dang Alexa Fluor etiketleme basit bir yöntem gelişmeler yararlanan.

Alexa Fluor Etiketleme Dang Virüs görselleştirme

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Nötrofil İzolasyon ve Analiz Terapötik Ajanların için Lenfoma Hücre Duyarlılık kendi Rolü belirleme

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Bir gen ya da ilaç terapisinde kullanım için, HIV-1 üretim yapan RNA&#39;lar etkinlik ve toksisite Değerlendirilmesi

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

Yeni Bir Dünyadan Rekombinant Virüsün Kurtarılması ve Karakterizasyonu Zika Virüsü Bulaşıcı Klon

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Makrofaj hücre dışı tuzaklar Confocal mikroskobu kullanılarak görüntülenmesi

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

Basit Akış Sitometresi Vitro antikor bağımlı Enhancement-in dang virüs Zika virüs nekahat Serum kullanarak belirlemek için tahlil dayalı

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Tam kan örneklerinde virüs tespiti için hızlı, güvenli ve basit el ile başucu nükleik asit çıkarma

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

Measuring Dengue Virus RNA in the Culture Supernatant of Infected Cells by Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction

Dang virüs RNA kültür süpernatant gerçek zamanlı nicel polimeraz zincir reaksiyonu tarafından enfekte hücre içinde ölçme

At present, real-time polymerase chain reaction (PCR) technology is an indispensable tool for the detection and quantification of viral genomes in ...

Identification of Coding and Non-coding RNA Classes Expressed in Swine Whole Blood

Kodlama ve RNA sınıfları kodlamayan teşhis kodu içinde domuz tam kan ifade.

The advent of innovative and increasingly powerful next generation sequencing techniques has opened new avenues into the ability to examine the underlying ...

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

Dang humması virüs kaynaklı akut viral Ensefalitis-benzeri hastalık bir Murine modeli

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA Testi Kuduz Aşısı Potens Değerlendirmek için

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...