1. Isolierung von PBMC <ol><li> Draw Blut (7,5 bis 8,0 ml) in einen BD Vacutainer CPT Cell Preparation Röhrchen mit Natrium Heparin. Die Röhre enthält eine Natrium-Heparin als Antikoagulans und eine Ficoll-Hypaque Dichte Flüssigkeit, plus ein Polyester-Gel-Schranke, die die beiden Flüssigkeiten voneinander trennt. Zentrifugenröhrchen / Blutprobe bei Raumtemperatur (18 ° C bis 25 ° C) in einer horizontalen Rotor (swing-out Kopf) für 20 min bei 1800 x g. Schalten Zentrifuge bremst ab. </li><li> Nach de...

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	<li>Bonneville, M., O'Brien, R. L., Born, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#947;+T+cell+effector+functions:+a+blend+of+innate+programming+and+acquired+plasticity.">&#947; T cell effector functions: a blend of innate programming and acquired plasticity.</a> Nat Rev Immunol. 10, 467-478 (2010).</li><li>Hintz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+(E)-4-hydroxy-3-methyl-but-2-enyl+pyrophosphate+as+a+major+activator+for+human+&#947;&#948;+T+cells+in+Escherichia+coli.">Identification of (E)-4-hydroxy-3-methyl-but-2-enyl pyrophosphate as a major activator for human &#947;&#948; T cells in Escherichia coli.</a> FEBS Lett. 509, 317-322 (2001).</li><li>Gober, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T+cell+receptor+&#947;&#948;+cells+recognize+endogenous+mevalonate+metabolites+in+tumor+cells.">Human T cell receptor &#947;&#948; cells recognize endogenous mevalonate metabolites in tumor cells.</a> J Exp Med. 197, 163-168 (2003).</li><li>Kabelitz, D., Wesch, D., He, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+of+gammadelta+T+cells+in+tumor+immunology.">Perspectives of gammadelta T cells in tumor immunology.</a> Cancer Res. 67, 5-8 (2007).</li><li>Roelofs, A. 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Die hier vorgestellte Methode ermöglicht eine effiziente Erweiterung der γδ T-Zellen aus PBMC. γδ T-Zellen aktiviert und durch Zoledronat erweitert und IL-2 entwickeln komplette Effektor-Funktionen, durch die Zytokin-Produktion und Zytotoxizität wider. Es wurde berichtet, dass die synthetischen phosphoantigens Bromhydrin Pyrophosphat (BrHPP) und 2-Methyl-3-Butenyl-1-pyrophosphat (2M3B1PP) auch erweitern γδ T-Zellen, jedoch sind sie nicht im Handel erhältlich. Im Gegensatz dazu ist Zoledronat bereits für klinis...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagent Name </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> ZOMETA </td><td> Novartis Pharma K. K </td><td></td><td> Zoledronat </td></tr><tr><td> Proleukin </td><td> Novartis Pharmaceuticals </td><td></td><td> humanem rekombinantem IL-2 </td></tr><tr><td> BD Vacutainer CPT Cell Preparation Röhrchen mit Natrium-Heparin </td><td> BD </td><td> 362753 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 21870-076 </td><td></td></tr><tr><td> ALyS203-Medium </td><td> Cell Science &amp; Technology Institute </td><td> 0301-7 </td><td></td></tr><tr><td> OpTmizer </td><td> Invitrogen </td><td> 0080022SA </td><td></td></tr><tr><td> Brefeldin A </td><td> Sigma </td><td> B5936-200 &amp;mgr; l </td><td></td></tr><tr><td> Phorbol 12-myristat 13-Acetat (PMA) </td><td> Sigma </td><td> P1585-1MG </td><td></td></tr><tr><td> Ionomycin </td><td> Sigma </td><td> 13909-1ML </td><td></td></tr><tr><td> IntraPrep </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07803 </td><td></td></tr><tr><td> anti-human CD3-FITC oder PE/Cy5 </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07746 FITC A07749 PE/Cy5 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD4-ECD </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> 6604727 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD8-PE/Cy5 </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> 6607011 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD14-PE/Cy5 </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07765 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD19-PE </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07769 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD45-ECD </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07784 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD56-PE/Cy5 </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07789 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-TCRαβ-PE </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A39499 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-TCR Vγ9-FITC </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> IM1463 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD27-PE/Cy5 </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> 6607107 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD45RA-ECD </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> IM2711 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-CD69-PE </td><td> BD </td><td> 555531 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Human-NKG2D-PE </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A08934 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-humal IFNy-PE </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> IM2717U </td><td></td></tr><tr><td> Maus IgG1 Isotyp-Kontroll-PE </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07796 </td><td></td></tr><tr><td> Maus IgG1 Isotyp-Kontroll-ECD oder PE/Cy5 </td><td> Wichtige Produktinformation </td><td> A07797 A07798 </td><td></td></tr></tbody></table>

expansion of human peripheral blood  &gamma;&delta; t cells using zoledronate

Menschliche γδ T-Zellen erkennen und reagieren auf eine Vielzahl von Stress-induzierte Antigene, wodurch die Entwicklung angeborenen breiten Anti-Tumor-und anti-infektiösen Aktivität. 1 Die Mehrheit der γδ T-Zellen im peripheren Blut haben die Vγ9Vδ2 T-Zell-Rezeptor. Diese Zellen erkennen Antigen in einer Haupthistokompatibilitätskomplex-unabhängige Art und Weise und zu entwickeln starke zytolytischer und Th1-like Effektor-Funktionen. 1 Darum sind γδ T-Zellen attraktiven Kandidaten Effektorzellen zur Immuntherapie von Krebs. Vγ9Vδ2 T-Zellen zu phosphoantigens wie reagieren (E)-4-Hydroxy-3-methyl-but-2-enyl-pyrophosphat (HMBPP), die in Bakterien über Isoprenoidbiosynthese synthetisiert wird; 2 und Isopentenylpyrophosphat (IPP), das hergestellt wird in eukaryotischen Zellen durch die Mevalonatweges. 3 In physiologischer Zustand, ist die Erzeugung von IPP in transformierten Zellen nicht ausreichend für die Aktivierung von γδ T-Zellen. Dysregulation des Mevalonat-Weg in Tumorzellen führt zu einer Akkumulation von IPP und γδ T-Zellen-Aktivierung. 3 Weil Aminobisphosphonate (wie Pamidronat oder Zoledronat) hemmen Farnesylpyrophosphat Synthase (FPP), das Enzym wirkt hinter IPP in der Mevalonat-Weg, intrazellulären IPP und sensitibity auf γδ T-Zellen Anerkennung kann therapeutisch durch Aminobisphosphonate erhöht werden. IPP Akkumulation ist weniger effizient in nontransfomred Zellen als Tumorzellen mit einem pharmakologisch relevante Konzentration von Aminobisphosphonate, die es uns ermöglichen Immuntherapie gegen Krebs durch Aktivierung γδ T-Zellen mit Aminobisphosphonate. 4 Interessanterweise, IPP in Monozyten ansammelt, wenn PBMC mit Aminobisphosphonate behandelt werden, weil der effizienten Drogen-Aufnahme durch die Zellen. 5 Monozyten, die IPP zu akkumulieren Antigen-präsentierenden Zellen und stimulieren Vγ9Vδ2 T-Zellen im peripheren Blut. 6 auf diese Mechanismen, entwickelten wir eine Technik, die für eine groß angelegte Ausbau des γδ T-Zell-Kulturen mit Zoledronat und Interleukin -2 (IL-2). 7 Andere Methoden zur Erweiterung der γδ T-Zellen nutzen die synthetische phosphoantigens Bromhydrin Pyrophosphat (BrHPP) 8 oder 2-Methyl-3-Butenyl-1-pyrophosphat (2M3B1PP). 9 Alle diese Methoden ex ermöglichen vivo Expansion, die sich in einer großen Anzahl von γδ T-Zellen für den Einsatz in adoptiven Immuntherapie. Allerdings ist nur Zoledronat eine FDA-Zulassung im Handel erhältlichen Reagenz. Zoledronat-expanded γδ T-Zellen-Display CD27 - CD45RA - Effektor-Memory-Phänotyp und ihre Funktion kann durch IFN-γ Produktion Assay 7 ausgewertet werden.

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Expansion of Human Peripheral Blood  ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells using Zoledronate

Eine Methode, um γδ T-Zellen aus dem peripheren Blut mononukleären Zellen (PBMC) erweitern wird beschrieben. PBMC-derived γδ T-Zellen stimuliert und erweitert mit Zoledronat und Interleukin-2 (IL-2). Großräumige Ausdehnung der γδ T-Zellen können zur autologen zellulären Immuntherapie von Krebs angewendet werden.

Expansion von humanen peripheren Blut γδ T-Zellen mit Zoledronat

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

Expansion, Reinigung und Functional Assessment of Human peripheren Blut NK-Zellen

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Klinische Anwendung der<em&gt; Dornröschen</em&gt; Und künstliche Antigen präsentierenden Zellen genetisch zu verändern T Zellen aus dem peripheren und Nabelschnurblut

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

Generation of Human Alloantigen-spezifischen T-Zellen aus peripherem Blut

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Isolierung und Analyse über Durchflusszytometrie der Menschen Endozervikale Gamma-Delta-T-Zellen

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran erhöht die Effizienz der Lentivirale Transduktion von murinen und menschliche primäre NK-Zellen

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Highly Multiplexed, Super-resolution Imaging of T Cells Using madSTORM

Hochmultiplexed, Super-Auflösung Bildgebung von T-Zellen mit madSTORM

Imaging heterogeneous cellular structures using single molecule localization microscopy has been hindered by inadequate localization precision and ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

Bewertung der synaptischen Schnittstelle der primären menschlichen T-Zellen aus peripherem Blut und Lymphgewebe

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

Flotation-Based T Cell Isolation, Activation, and Expansion from Human Peripheral Blood Mononuclear Cell Samples Using Microbubbles

Flotationsbasierte T-Zell-Isolierung, -Aktivierung und -Expansion aus mononukleären Blutproben des menschlichen peripheren Blutes unter Verwendung von Mikrobläschen

The process of isolating T cells from peripheral blood mononuclear&#160;cells (PBMCs) to establish ex vivo cultures is crucial for research, clinical ...

Differentiation of Functional Osteoclasts from Human Peripheral Blood CD14+ Monocytes

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Abgrenzung funktioneller Osteoklasten von CD14+ Monozyten aus humanem peripherem Blut

Osteoclasts (OCs) are bone-resorbing cells that play a pivotal role in skeletal development and adult bone remodeling. Several bone disorders are caused ...