1。 PBMCの分離<ol><li>ヘパリンナトリウムでBDバキュテイナCPTの細胞調製チューブへの血液（7.5〜8.0ミリリットル）を描く。チューブはヘパリンナトリウム抗凝固剤とフィコール- Hypaque密度流体、および2つの液体を分離するポリエステルゲル障壁を、含まれています。 1800 × gで20分間水平ローター（スイングアウトの頭）で、室温（18℃〜25℃）でチューブ/血液サンプルを遠心分離しま...

<ol>
	<li>Bonneville, M., O'Brien, R. L., Born, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#947;+T+cell+effector+functions:+a+blend+of+innate+programming+and+acquired+plasticity.">&#947; T cell effector functions: a blend of innate programming and acquired plasticity.</a> Nat Rev Immunol. 10, 467-478 (2010).</li><li>Hintz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+(E)-4-hydroxy-3-methyl-but-2-enyl+pyrophosphate+as+a+major+activator+for+human+&#947;&#948;+T+cells+in+Escherichia+coli.">Identification of (E)-4-hydroxy-3-methyl-but-2-enyl pyrophosphate as a major activator for human &#947;&#948; T cells in Escherichia coli.</a> FEBS Lett. 509, 317-322 (2001).</li><li>Gober, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T+cell+receptor+&#947;&#948;+cells+recognize+endogenous+mevalonate+metabolites+in+tumor+cells.">Human T cell receptor &#947;&#948; cells recognize endogenous mevalonate metabolites in tumor cells.</a> J Exp Med. 197, 163-168 (2003).</li><li>Kabelitz, D., Wesch, D., He, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+of+gammadelta+T+cells+in+tumor+immunology.">Perspectives of gammadelta T cells in tumor immunology.</a> Cancer Res. 67, 5-8 (2007).</li><li>Roelofs, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+blood+monocytes+are+responsible+for+gammadelta+T+cell+activation+induced+by+zoledronic+acid+through+accumulation+of+IPP/DMAPP.">Peripheral blood monocytes are responsible for gammadelta T cell activation induced by zoledronic acid through accumulation of IPP/DMAPP.</a> Br J Haematol. 144, 245-250 (2009).</li><li>Dieli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+&#947;&#948;+T-lymphocyte+effector+functions+by+bisphosphonate+zoledronic+acid+in+cancer+patients+in+vivo.">Induction of &#947;&#948; T-lymphocyte effector functions by bisphosphonate zoledronic acid in cancer patients in vivo.</a> Blood. 102, 2310-2311 (2003).</li><li>Kondo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zoledronate+facilitates+large-scale+ex+vivo+expansion+of+functional+&#947;&#948;+T+cells+from+cancer+patients+for+use+in+adoptive+immunotherapy.">Zoledronate facilitates large-scale ex vivo expansion of functional &#947;&#948; T cells from cancer patients for use in adoptive immunotherapy.</a> Cytotherapy. 10, 842-856 (2008).</li><li>Espinosa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+synthesis+and+biological+activity+of+bromohydrin+pyrophosphate,+a+potent+stimulator+of+human+&#947;&#948;+T+cells.">Chemical synthesis and biological activity of bromohydrin pyrophosphate, a potent stimulator of human &#947;&#948; T cells.</a> J Biol Chem. 276, 18337-18344 (2001).</li><li>Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+profile+and+anti-tumor+effects+of+adoptive+immunotherapy+using+&#947;&#948;+T+cells+against+advanced+renal+cell+carcinoma:+a+pilot+study.">Safety profile and anti-tumor effects of adoptive immunotherapy using &#947;&#948; T cells against advanced renal cell carcinoma: a pilot study.</a> Cancer Immunol Immunother. 56, 469-476 (2007).</li><li>Murali-Krishna, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+antigen-specific+CD8+T+cells:+a+reevaluation+of+bystander+activation+during+viral+infection.">Counting antigen-specific CD8 T cells: a reevaluation of bystander activation during viral infection.</a> Immunity. 8, 177-187 (1998).</li><li>Sato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+culture+medium+on+the+expansion+of+T+cells+for+immunotherapy.">Impact of culture medium on the expansion of T cells for immunotherapy.</a> Cytotherapy. 11, 936-946 (2009).</li><li>Abe, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+immunological+evaluation+of+zoledronate-activated+V&#947;9+&#947;&#948;T-cell-based+immunotherapy+for+patients+with+multiple+myeloma.">Clinical and immunological evaluation of zoledronate-activated V&#947;9 &#947;&#948;T-cell-based immunotherapy for patients with multiple myeloma.</a> Exp Hematol. 37, 956-968 (2009).</li><li>Nakajima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+I+study+of+adoptive+immunotherapy+for+recurrent+non-small-cell+lung+cancer+patients+with+autologous+&#947;&#948;+T+cells.">A phase I study of adoptive immunotherapy for recurrent non-small-cell lung cancer patients with autologous &#947;&#948; T cells.</a> Eur J Cardiothorac Surg. 37, 1191-1197 (2010).</li></ol>

ここで紹介する方法は、PBMCからのγδT細胞の効率的な展開を可能にします。ゾレドロネートで活性化と拡大γδT細胞とIL - 2は、サイトカイン産生と細胞毒性によって反射された完全なエフェクター機能を、開発する。それが合成phosphoantigensのブロモヒドリンピロリン酸（BrHPP）と2 - メチル-3 - ブテニル-1 - ピロリン酸（2M3B1PP）ことが報告されてもγδT細胞を展開していますが、それらは市販さ?...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬名</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td>ゾメタ</td><td>ノバルティスファーマK. K </td><td></td><td>ゾレドロネート</td></tr><tr><td> PROLEUKIN </td><td>ノバルティスファーマ</td><td></td><td>ヒト組換えIL - 2 </td></tr><tr><td> BDバキュテイナCPTナトリウムヘパリンによる細胞調製チューブ</td><td> BD </td><td> 362753 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI1640 </td><td>インビトロジェン</td><td> 21870-076 </td><td></td></tr><tr><td> ALyS203 -培地</td><td>細胞科学技術研究所</td><td> 0301から7 </td><td></td></tr><tr><td> OpTmizer </td><td>インビトロジェン</td><td> 0080022SA </td><td></td></tr><tr><td>ブレフェルジン</td><td>シグマ</td><td> B5936 - 200UL </td><td></td></tr><tr><td>ホルボール12 - ミリステート13 - アセテート（PMA） </td><td>シグマ</td><td> P1585 - 1mgの</td><td></td></tr><tr><td>イオノマイシン</td><td>シグマ</td><td> 13909 - 1mLの</td><td></td></tr><tr><td> IntraPrep </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07803 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD3 - FITCまたはPE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07746 FITC A07749 PE/Cy5 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD4 - ECD </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6604727 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD8-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6607011 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD14-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07765 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD19 - PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07769 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD45 - ECD </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07784 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD56-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07789 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトTCRαβ- PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A39499 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトTCRVγ9- FITC </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM1463 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD27-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6607107 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD45RA - ECD </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM2711 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトCD69 - PE </td><td> BD </td><td> 555531 </td><td></td></tr><tr><td>抗ヒトNKG2D - PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A08934 </td><td></td></tr><tr><td>抗humalIFNγ- PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM2717U </td><td></td></tr><tr><td>マウスIgG1アイソタイプコントロール- PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07796 </td><td></td></tr><tr><td>マウスIgG1アイソタイプコントロール、ECDまたはPE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07797 A07798 </td><td></td></tr></tbody></table>

expansion of human peripheral blood  &gamma;&delta; t cells using zoledronate

人間のγδT細胞が認識し、ストレス誘発抗原のさまざまに反応する、それによって生来の広範な抗腫瘍および抗感染活動を展開することができます。末梢血中のγδT細胞の1大多数がVγ9Vδ2T細胞受容体を持っている。これらの細胞は主要組織適合性複合体に依存しない方法で抗原を認識し、強力な細胞傷害性とTh1細胞のようなエフェクター機能を開発する。1したがって、γδT細胞は、癌免疫療法のための魅力的な候補エフェクター細胞である。 Vγ9Vδ2T細胞は、次のようなphosphoantigensに対応する（E）-4 -ヒドロキシ-3 -メチル-ブト-2 -エニルピロリン酸（HMBPP）、イソプレノイド生合成を介して細菌で合成され、生成される2、イソペンテニルピロリン酸（IPP）、メバロン ​​酸経路を介して真核細胞で。生理的な状態で3、非形質転換細胞におけるIPPの世代は、γδT細胞の活性化のために十分ではありません。腫瘍細胞でのメバロン ​​酸経路の調節不全は、IPPの蓄積とγδT細胞の活性化につながる。3 aminobisphosphonatesが（そのようなパミドロネートまたはゾレドロネートなど）ファルネシルピロリン酸合成酵素（FPPS）、メバロン ​​酸経路でIPPの下流で作用する酵素の細胞内レベルを抑制するので、 IPPとγδT細胞の認識にsensitibityは、治療上aminobisphosphonates増加させることができる。 IPPの蓄積は私たちにaminobisphosphonatesとγδT細胞を活性化することによって、癌の免疫療法を可能にすること、aminobisphosphonatesの薬理学的に関連する濃度で腫瘍細胞よりもnontransfomred細胞に効率的ではありません。おもしろい4 PBMCがaminobisphosphonatesで処理されるとき、IPPのために効率的で、単球に蓄積これらの細胞による薬物取り込み。IPPとなる抗原提示細胞を蓄積し、末梢血でVγ9Vδ2T細胞を刺激する5単球6これらのメカニズムに基づいて、我々は、ゾレドロネートおよびインターロイキンを使用して、γδT細胞培養物の大規模展開のための技術を開発-2（IL - 2）。γδT細胞の拡大のための7他の方法は、合成phosphoantigensのブロモヒドリンピロリン酸（BrHPP）8または2 -メチル-3 -ブテニル-1 -ピロリン酸（2M3B1PP）を利用する。これらのメソッドの9すべてがexを許可養子免疫療法における使用のためのγδT細胞の多数の結果in vivoでの展開、。ただし、ゾレドロネートがFDA承認された市販の試薬です。ゾレドロネート-拡張されたγδT細胞はCD27を表示- CD45RA -エフェクターメモリー表現型とそれらの機能は、IFN -γ産生アッセイによって評価することができる7。

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Expansion of Human Peripheral Blood  &#947;&#948; T Cells using Zoledronate

末梢血単核細胞（PBMC）からのγδT細胞を拡大する方法が記載されている。 PBMC由来のγδT細胞を刺激し、ゾレドロネートとインターロイキン-2（IL - 2）を使用して展開されます。 γδT細胞の大規模の拡大は、癌の自家細胞免疫療法に適用することができます。

ゾレドロネートを使用してヒト末梢血γδT細胞の拡大

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

拡大、精製、及びヒト末梢血NK細胞の機能的評価

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

免疫・感染学

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

の臨床応用<em&gt;眠れる森の美女</em遺伝的に末梢及び臍帯血由来のT細胞を変更する&gt;と人工抗原提示細胞

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

末梢血からのヒトアロ抗原特異的T細胞の生成

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

ヒト子宮頸管ガンマ・デルタT細胞の単離およびフローサイトメトリー分析

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

デキストランは、マウスとヒト NK 細胞のレンチ ウイルスの伝達効率を向上します。

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Highly Multiplexed, Super-resolution Imaging of T Cells Using madSTORM

madSTORMを用いたT細胞の高度に多重化された超解像イメージング

Imaging heterogeneous cellular structures using single molecule localization microscopy has been hindered by inadequate localization precision and ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

末梢血およびリンパ組織から主な人間の T 細胞のシナプスのインタ フェースの評価

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

Flotation-Based T Cell Isolation, Activation, and Expansion from Human Peripheral Blood Mononuclear Cell Samples Using Microbubbles

マイクロバブルを用いたヒト末梢血単核細胞サンプルからの浮遊選鉱ベースのT細胞の単離、活性化、および増殖(英語)

The process of isolating T cells from peripheral blood mononuclear&#160;cells (PBMCs) to establish ex vivo cultures is crucial for research, clinical ...

Differentiation of Functional Osteoclasts from Human Peripheral Blood CD14+ Monocytes

Differentiation of Functional Osteoclasts from Human Peripheral Blood CD14+ Monocytes

機能性破骨細胞のヒト末梢血CD14+ 単球との鑑別

Osteoclasts (OCs) are bone-resorbing cells that play a pivotal role in skeletal development and adult bone remodeling. Several bone disorders are caused ...