Name: study of the actin cytoskeleton in live endothelial cells expressing gfp-actin
Uploaded: 2011-11-18T13:00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin at JoVE.com

وقدمت بسخاء البلازميد GFP - β - الأكتين من قبل الدكتور واين أور ، LSUHSC - S قسم علم الأمراض ، وتتضخم في مختبر الدكتور بيكي Worthylake ، LSUHSC - NO قسم الصيدلة. وأيد هذا العمل عن طريق المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (P20 RR - 018766) ، وجمعية القلب الأميركية (05835386N).

<ol>
	<li>Spindler, V., Schlegel, N., Waschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+GTPases+in+control+of+microvascular+permeability.">Role of GTPases in control of microvascular permeability.</a> Cardiovasc. Res. 87, 243-253 (2010).</li><li>Wojciak-Stothard, B., Ridley, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+GTPases+and+the+regulation+of+endothelial+permeability.">Rho GTPases and the regulation of endothelial permeability.</a> Vascul. Pharmacol. 39, 187-199 (2002).</li><li>Yuan, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+transduction+pathways+in+enhanced+microvascular+permeability.">Signal transduction pathways in enhanced microvascular permeability.</a> Microcirculation. 7, 395-403 (2000).</li><li>Birukov, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+GTPases+in+mechanosensitive+regulation+of+endothelial+barrier.">Small GTPases in mechanosensitive regulation of endothelial barrier.</a> Microvasc. Res. 77, 46-52 (2009).</li><li>Duran, W. N., Sanchez, F. A., Breslin, J. W., Tuma, R. F., Duran, W. N., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculatory+Exchange+Function.">Microcirculatory Exchange Function.</a> Handbook of Physiology: Microcirculation. , 81-124 (2008).</li><li>Hu, Y. L., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+motion+of+paxillin+on+actin+filaments+in+living+endothelial+cells.">Dynamic motion of paxillin on actin filaments in living endothelial cells.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 357, 871-876 (2007).</li><li>Borm, B., Requardt, R. P., Herzog, V., Kirfel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+ruffles+in+cell+migration:+indicators+of+inefficient+lamellipodia+adhesion+and+compartments+of+actin+filament+reorganization.">Membrane ruffles in cell migration: indicators of inefficient lamellipodia adhesion and compartments of actin filament reorganization.</a> Exp. Cell. Res. 302, 83-95 (2005).</li><li>Hotulainen, P., Lappalainen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+fibers+are+generated+by+two+distinct+actin+assembly+mechanisms+in+motile+cells.">Stress fibers are generated by two distinct actin assembly mechanisms in motile cells.</a> J. Cell. Biol. 173, 383-394 (2006).</li><li>Pellegrin, S., Mellor, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+stress+fibres.">Actin stress fibres.</a> J. Cell. Sci. 120, 3491-3499 (2007).</li><li>Ballestrem, C., Wehrle-Haller, B., Imhof, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+dynamics+in+living+mammalian+cells.">Actin dynamics in living mammalian cells.</a> J. Cell. Sci. 111, 1649-1658 (1998).</li><li>Helmke, B. P., Rosen, A. B., Davies, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+mechanical+strain+of+an+endogenous+cytoskeletal+network+in+living+endothelial+cells.">Mapping mechanical strain of an endogenous cytoskeletal network in living endothelial cells.</a> Biophys. J. 84, 2691-2699 (2003).</li><li>Birukova, A. A., Smurova, K., Birukov, K. G., Kaibuchi, K., Garcia, J. G., Verin, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Rho+GTPases+in+thrombin-induced+lung+vascular+endothelial+cells+barrier+dysfunction.">Role of Rho GTPases in thrombin-induced lung vascular endothelial cells barrier dysfunction.</a> Microvasc. Res. 67, 64-77 (2004).</li><li>van Nieuw Amerongen, G. P., van Delft, S., Vermeer, M. A., Collard, J. G., van Hinsbergh, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+RhoA+by+thrombin+in+endothelial+hyperpermeability:+role+of+Rho+kinase+and+protein+tyrosine+kinases.">Activation of RhoA by thrombin in endothelial hyperpermeability: role of Rho kinase and protein tyrosine kinases.</a> Circ. Res. 87, 335-340 (2000).</li><li>Moy, A. B., Blackwell, K., Kamath, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+histamine+and+thrombin+on+endothelial+barrier+function+through+actin-myosin+tension.">Differential effects of histamine and thrombin on endothelial barrier function through actin-myosin tension.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 282, H21-H29 (2002).</li><li>Wittman, T., Littlefield, R., Waterman-Storer, C., Goldman, R. D., Spector, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+speckle+microscopy+of+cytoskeletal+dynamics+in+living+cells.">Fluorescent speckle microscopy of cytoskeletal dynamics in living cells.</a> Live Cell Imaging: A Laboratory Manual. , 184-204 (2005).</li><li>Rabut, G., Ellenberg, J., Goldman, R. D., Spector, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photobleaching+techniques+to+study+mobility+and+molecular+dynamics+of+proteins+in+live+cells:+FRAP,+iFRAP,+and+FLIP.">Photobleaching techniques to study mobility and molecular dynamics of proteins in live cells: FRAP, iFRAP, and FLIP.</a> Live Cell Imaging: A Laboratory Manual. , 101-126 (2005).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

التصوير من GFP - الأكتين في الخلايا البطانية العيش يتيح تحليلا مفصلا لديناميات الهيكل الخلوي الأكتين استجابة لمحفزات للالتهابات. هذا الأسلوب قد يكون من المفيد أيضا للبناء على النتائج السابقة تبين إعادة تشكيل الهيكل الخلوي استجابة لقوى مادية مثل إجهاد القص 11. بالإضافة إلى ذلك ، هذا الأسلوب يسمح للتقييم مفصل للمساهمة الديناميات الأكتين هيكل الخلية لمختلف أنشطة الخلية البطانية ، بما في ذلك الهجرة ، والانقسام ، وتشكيل تقاطعات بين الخلايا وصلي النضج ، والحفاظ على وظيفة الحاجز. في البيانات الواردة ، يمكن ملاحظة سلوك الهيكل الخلوي الأكتين البطانية قبل وبعد العلاج مع ثرومبين. وقد لوحظت lamellipodia المحلية على طول حواف الخلايا البطانية تشكيل وتراجع مع مرور الزمن في كل من الخلية monolayers nonconfluent ومتموجة. المعاملة مع توقف لفترة وجيزة ثرومبين lamellipodia شكلأوجه ودوران. ثرومبين تسبب أيضا في الخلايا لعقد بقليل ، وذلك بالاتفاق مع التقارير السابقة التي ثرومبين أسباب تشكيل ألياف الأكتين الإجهاد وزيادة حدة التوتر جابذ التنمية في الخلايا البطانية 12-14. ومع ذلك ، يعيش من الدراسات التصويرية مثل هذه الخلية ، ويمكن الآن منشأ ألياف الإجهاد يتم تحديدها. في HUVEC ، أكثر من ألياف التوتر تنشأ في محيط الخلايا وألياف تشبه قوس عرضية في الخلايا المهاجرة 8 و 9. آخر قوة من هذا الأسلوب أكثر من استخدام الخلايا الثابتة التي يمكن كميا في عدد من ألياف التوتر في الخلايا الفردية قبل وبعد العلاج الثرومبين ، والقضاء على التحيز في الاختيار بين المجموعات التجريبية. مع هذا البروتوكول نقيم حركة ديناميكية من حافة الخلية وألياف الأكتين الإجهاد. لفهم ديناميات مونومر الأكتين في الخلايا البطانية ، وتقنيات أكثر تقدما مثل الانتعاش بعد مضان photobleaching (FRAP) أو مضان رقطة MICROSويمكن تطبيق نسخة (FSM) 15 ، 16. بالإضافة إلى ذلك ، لأنه قد الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة تمثل أفضل نموذج من وظيفة الاوعية الدموية الدقيقة الحاجز ، والتحسين من البروتوكولات ترنسفكأيشن بفعالية للتعبير عن GFP - الأكتين في الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة يمثل الاتجاه المستقبلي منطقية. في الموجز ، والتصوير من الخلايا البطانية يعيش معربا عن GFP - الأكتين يمثل أداة قوية لتحديد كيفية الأكتين الخلية البطانية الهيكل الخلوي يستجيب لأنواع مختلفة من المحفزات. وسوف تستخدم الدراسات monolayers البطانية متكدسة بإحكام مساعدة في تحديد أدوار هياكل دينامية مثل الأكتين الغنية lamellipodia والعرضي ألياف الإجهاد في وظيفة حاجز قوس البطانية. بالإضافة إلى ذلك ، سوف يعيش التصوير خلية من الخلايا البطانية معربا عن GFP - الأكتين أو البروتينات الانصهار الأخرى التي تسمح التصور الهياكل التحت خلوية أخرى تقدم معلومات مفصلة spatiotemporal اللازمة لفهم الإشارات والآليات الهيكلية التي دetermine حاجز النزاهة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="4"> 1. الجرس أسهم 5X </td></tr><tr><td> مادة كيميائية </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> كمية </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> EMD </td><td> SX0420 - 3 </td><td> 35 ز </td></tr><tr><td> كلوريد البوتاسيوم </td><td> JT بيكر </td><td> 3040 </td><td> ز 1.75 </td></tr><tr><td> كلوريد الكالسيوم </td><td> سيغما </td><td> C - 3881 </td><td> ز 1.47 </td></tr><tr><td> كبريتات المغنيسيوم </td><td> سيغما </td><td> M - 9397 </td><td> ز 1.44 </td></tr><tr><td> معقمة الماء المصفى </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td colspan="4"> تصفية في زجاجات معقمة تعقيمها ومخازن في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 2. اجتماعات الأطراف العازلة </td></tr><tr><td> مادة كيميائية </td><td>شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> كمية </td></tr><tr><td> اجتماعات الأطراف </td><td> سيغما </td><td> M3183 </td><td> ز 125.6 </td></tr><tr><td> معقمة الماء المصفى </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td colspan="4"> تصفية في زجاجات معقمة تعقيمها ومخازن في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 3. ألبومين محلول الملح الفسيولوجي (هذه الخدمات) </td></tr><tr><td> مادة كيميائية </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> كمية </td></tr><tr><td> قذف الأسهم (5X) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 مل </td></tr><tr><td> المماسح العازلة </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 مل </td></tr><tr><td> فوسفات الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S - 9638 </td><td> 0،168 ز </td></tr><tr><td> البيروفات الصوديوم &lt;/ TD&gt; <td> سيغما </td><td> P5280 </td><td> ز 0.22 </td></tr><tr><td> الصوديوم EDTA الملح </td><td> سيغما </td><td> ED2SS </td><td> ز 0.0074 </td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> سيغما </td><td> G7528 </td><td> 0،901 ز </td></tr><tr><td> الزلال ، البقري </td><td> USB </td><td> 10856 </td><td> 10 ز </td></tr><tr><td> معقمة الماء المصفى </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td colspan="4"> ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 في 37 درجة مئوية ، ثم التصفية في زجاجات معقمة تعقيمها وتخزينها في 4 درجات مئوية. </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 4. 0.9 ٪ مالحة </td></tr><tr><td> مادة كيميائية </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> كمية </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> EMD </td><td> SX0420 - 3 </td><td> 9 ز </td></tr><tr><td> معقمة الماء المصفى </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td colspan="4"> تصفية في زجاجات معقمة تعقيمها ومخازن في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 5. الحل الجيلاتين 1.5 ٪ </td></tr><tr><td> الجيلاتين من جلد الخنزير </td><td> سيغما </td><td> G2500 </td><td> 15 ز </td></tr><tr><td> 0.9 ٪ مالحة </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td colspan="4"> دافئة الحل ل37 درجة مئوية لإذابة الجيلاتين بما فيه الكفاية. في حين لا تزال دافئة ، في زجاجات معقمة تصفية تعقيمها وتخزينها في 4 درجات مئوية </td></tr></tbody></table>

study of the actin cytoskeleton in live endothelial cells expressing gfp-actin

بطانة الاوعية الدموية الدقيقة تلعب دورا هاما كحاجز منفذة بشكل انتقائي للسوائل والأملاح. منعطفات لاصق بين الخلايا البطانية تنظيم نفاذية البطانة ، والعديد من الدراسات بينت أهمية المساهمة في الهيكل الخلوي الأكتين لتحديد سلامة صلي 1-5. ويعتقد أن الحزام الأكتين القشرية إلى أن تكون مهمة للحفاظ على استقرار تقاطعات 1 ، 2 ، 4 ، 5. في المقابل ، يعتقد أن ألياف الأكتين الإجهاد لتوليد الجاذبية التوتر داخل الخلايا البطانية التي تضعف تقاطعات 2-5. وقد استند جزء كبير من هذه النظرية على الدراسات التي تعامل بها مع الخلايا البطانية وسطاء التهابات معروفة لزيادة نفاذية البطانية ، ثم وتحديد الخلايا ووضع العلامات F - الأكتين لمراقبة مجهرية. ومع ذلك ، فإن هذه الدراسات توفر فهم محدود جدا من دور الهيكل الخلوي الأكتين لأن الصور من الخلايا الثابتة الوحيدة في تقديم لقطاتالوقت مع عدم وجود معلومات حول ديناميات الهياكل الأكتين 5. تعيش خلية التصوير يسمح بإدراج الطبيعة الديناميكية لالهيكل الخلوي الأكتين في دراسات لتحديد آليات البطانية سلامة الجدار. والميزة الرئيسية لهذا الأسلوب هو أنه يمكن تقييم أثر المحفزات التهابات مختلفة في هياكل الأكتين في الخلايا البطانية في نفس مجموعة من الخلايا الحية قبل وبعد العلاج ، وإزالة التحيز المحتملة التي قد تحدث عند مراقبة عينات ثابتة. وtransfected خلايا بطانة الوريد السري (HUVEC) مع GFP - β - الأكتين البلازميد ونمت لالتقاء coverslips على الزجاج. يتم التقاط الصور مرور الزمن من GFP - الأكتين في HUVEC متموجة قبل وبعد إضافة وسطاء التهابات التي تثير التغيرات التي تعتمد على الوقت في نزاهة حاجز غشائي. هذه الدراسات تمكن الملاحظة البصرية لتسلسل السائل من التغييرات في الهيكل الخلوي الأكتين التي تسهم في بطائنل خلل الحاجز والترميم. نتائجنا تظهر باستمرار المحلية ، وتشكيل lamellipodia الأكتين الغنية ودوران في الخلايا البطانية. ويمكن أيضا تشكيل والحركة من ألياف الأكتين الإجهاد يمكن ملاحظتها. يمكن أن تكون موثقة تحليلا للتشكيل وتيرة دوران من lamellipodia المحلية ، قبل وبعد العلاج مع المثيرات التي يحلل kymograph التهابات. هذه الدراسات توفر معلومات هامة حول طبيعة ديناميكية الهيكل الخلوي الأكتين في الخلايا البطانية التي يمكن استخدامها لاكتشاف الآليات الجزيئية التي لم تحدد سابقا هامة للحفاظ على سلامة حاجز غشائي.

Watch this Scientific Journal Video about Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin at JoVE.com

Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin

التصوير المجهري للخلايا البطانية يعيش معربا عن GFP - الأكتين يسمح توصيف التغيرات الدينامية في الهياكل هيكل الخلية. على عكس التقنيات التي تستخدم عينات ثابتة ، وهذا الأسلوب يوفر تقييما مفصلا للتغيرات الزمنية في الهيكل الخلوي الأكتين في الخلايا نفسها قبل وأثناء وبعد مختلف المحفزات المادية والدوائية ، أو التهابات.

دراسة الهيكل الخلوي أكتين في الخلايا البطانية لايف تعرب عن GFP - أكتين

The microvascular endothelium plays an important role as a selectively permeable barrier to fluids and solutes. The adhesive junctions between endothelial ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

The Cytoskeleton I: Actin and Microfilaments

SCIENTISTS IN ACTION

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

اختبار الحساسية البصرية للسرعة واتجاه الحركة في السحالي

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Computer-Generated Animal Model Stimuli

الحاسوب خلق المحفزات الحيوان النموذجي

Communication between animals is diverse and complex. Animals may communicate using auditory, seismic, chemosensory, electrical, or visual signals. In ...

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

أكتين المشارك الترسيب الفحص ، وبالنسبة للتحليل البروتين ملزمة لF - أكتين

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

يعيش التصوير خلية من طراز F - أكتين حيوية عن طريق الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

يعيش التصوير في القدرة على الحركة والهيكل الخلوي أكتين خلية من الخلايا العصبية الفردية والخلايا العصبية في الأجنة كريست اسماك الزرد

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

افعل ذلك بنفسك جهاز لاستخراج العينات Cryopreserved سقطت سهوا في صهاريج التخزين المبردة

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

يعيش التصوير من تخليص الخلية أفكارك أثناء<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مرحلة التطور الجنيني

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

حيوي داخلي المجهري للهياكل التصوير التحت خلوية في الفئران لايف تعرب عن البروتينات الفلورية

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

البطانية أنبوب تشكيل خلية الفحص ل<em&gt; في المختبر</em&gt; دراسة الأوعية الدموية

Angiogenesis is a vital process for normal tissue development and wound healing, but is also associated with a variety of pathological conditions. Using ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

عزل خلايا الفئران صمام غشائي

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...