Name: isolation and culture of neural crest stem cells from human hair follicles
Uploaded: 2013-04-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles at JoVE.com

ويدعم هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01AR054593 وR01AR054593-S1 لشو.

1. إعداد لوحات زراعة الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معطف كل بئر بما فيه الكفاية مع بولي D-يسين (PDL) لتغطية الجزء السفلي من البئر. السماح لوحات ليجف في غطاء محرك السيارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الآبار جافة، وشطف مع الماء المعقم، ونضح. ال?...

<ol>
	<li>Cotsarelis, G., Cheng, S. Z., Dong, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Existence+of+slow-cycling+limbal+epithelial+basal+cells+that+can+be+preferentially+stimulated+to+proliferate:+implications+on+epithelial+stem+cells.">Existence of slow-cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells.</a> Cell. 57, 201-209 (1989).</li><li>Cotsarelis, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-retaining+cells+reside+in+the+bulge+area+of+pilosebaceous+unit:+implications+for+follicular+stem+cells,+hair+cycle,+and+skin+carcinogenesis.">Label-retaining cells reside in the bulge area of pilosebaceous unit: implications for follicular stem cells, hair cycle, and skin carcinogenesis.</a> Cell. 61, 1329-1337 (1990).</li><li>Tanimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+follicle+stem+cells+provide+a+functional+niche+for+melanocyte+stem+cells.">Hair follicle stem cells provide a functional niche for melanocyte stem cells.</a> Cell Stem Cell. 8, 177-187 (2011).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+novel+population+of+multipotent+adult+stem+cells+from+human+hair+follicles.">Isolation of a novel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles.</a> Am. J. Pathol. 168, 1879-1888 (2006).</li><li>Yu, H., Kumar, S. M., Kossenkov, A. V., Showe, L., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+with+neural+crest+characteristics+derived+from+the+bulge+region+of+cultured+human+hair+follicles.">Stem cells with neural crest characteristics derived from the bulge region of cultured human hair follicles.</a> J. Invest. Dermatol. 130, 1227-1236 (2010).</li><li>Wong, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest-derived+cells+with+stem+cell+features+can+be+traced+back+to+multiple+lineages+in+the+adult+skin.">Neural crest-derived cells with stem cell features can be traced back to multiple lineages in the adult skin.</a> J. Cell Biol. 175, 1005-1015 (2006).</li><li>Sieber-Blum, M., Grim, M., Hu, Y. F., Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle.">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li><li>Amoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implanted+hair+follicle+stem+cells+form+Schwann+cells+that+support+repair+of+severed+peripheral+nerves.">Implanted hair follicle stem cells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 17734-17738 (2005).</li><li>Koliatsos, V. E., Xu, L., Yan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell+grafts+as+therapies+for+motor+neuron+disease.">Human stem cell grafts as therapies for motor neuron disease.</a> Expert Opin. Biol. Ther. 8, 137-141 (2008).</li><li>McKenzie, I. A., Biernaskie, J., Toma, J. G., Midha, R., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin-derived+precursors+generate+myelinating+Schwann+cells+for+the+injured+and+dysmyelinated+nervous+system.">Skin-derived precursors generate myelinating Schwann cells for the injured and dysmyelinated nervous system.</a> J. Neurosci. 26, 6651-6660 (2006).</li><li>LeDouarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Neural Crest. , (1999).</li><li>Tumbar, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+epithelial+stem+cell+niche+in+skin.">Defining the epithelial stem cell niche in skin.</a> Science. 303, 359-363 (2004).</li><li>Roh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-potentiality+of+a+new+immortalized+epithelial+stem+cell+line+derived+from+human+hair+follicles.">Multi-potentiality of a new immortalized epithelial stem cell line derived from human hair follicles.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 44, 236-244 (2008).</li></ol>

الخلية العزلة والثقافة الأساليب المذكورة هي استنساخه وقوية. ونحن قد ولدت NCSCs من عشرات الأفراد عبر مجموعة واسعة العمر. على الرغم من أنه من الأفضل معالجة الأنسجة مباشرة بعد الحصاد الأنسجة، وجدنا أن الأنسجة يمكن تخزينها بأمان فروة الرأس في وسائل الإعلام على الجليد لنقل...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>11965-092</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM/F12</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>11330-32</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heat-inactivated FBS</td>
 <td>Hyclone</td>
 <td>SH30071.03</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>B27 supplement</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17504044</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>N2 supplement</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17502048</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>bFGF</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>PHG0026</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EGF</td>
 <td>R&amp;D system</td>
 <td>236-EG-01M</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>IGF-I</td>
 <td>R&amp;D system</td>
 <td>291-G1-050</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.05% Trypsin/EDTA</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>25300-054</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dispase</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17105041</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin-Streptomycin</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>15070063</td>
 </tr>
 </tbody> 
</table>
Table 1.

isolation and culture of neural crest stem cells from human hair follicles

نمو بصيلات الشعر الخضوع لمدى الحياة ودورة الشعر هو عملية تنطوي على رقابة جيدة تكاثر الخلايا الجذعية والسكون. انتفاخ الشعر هو عبارة عن كوة جيدة تتميز عن الخلايا الجذعية البالغة 1. هذا الجزء من غمد الجذر الخارجي يحتوي على عدد من أنواع مختلفة من الخلايا الجذعية، بما في ذلك الخلايا الجذعية الظهارية 2، الخلايا الجذعية الخلايا الصباغية 3 و قمة العصبية مثل الخلايا الجذعية 4-7. بصيلات الشعر تمثل مصدرا غنيا للوصول وبالنسبة لأنواع مختلفة من الخلايا الجذعية البشرية. عزلت نحن وغيرنا الخلايا الجذعية العصبية قمة (NCSCs) من بصيلات الشعر الإنسان الجنين والكبار 4،5. هذه الخلايا الجذعية البشرية هي التسمية الاحتفاظ الخلايا وتكون قادرة على التجديد الذاتي من خلال انقسام الخلايا غير المتماثلة في المختبر. يعبرون عن خلية غير ناضجة قمة العصبية ولكن ليس علامات علامات التمايز. وأظهرت دراستنا التنميط التعبير مفادها أنهما يتقاسمان نمط التعبير الجيني مماثلة مع الفئران غير ناضجة لجنة المساواة العرقية الجلد العصبيسانت الخلايا. يعرضون multipotency نسيلي التي يمكن أن تؤدي إلى خلية الأنساب عضلي، الصباغية، والخلايا العصبية في المختبر بعد نسيلي الثقافة خلية واحدة. الخلايا المتمايزة لا يكتسب فقط نسب محددة ولكن أيضا علامات تظهر وظائف مناسبة في ظروف فيفو السابقين. وبالإضافة إلى ذلك، تظهر هذه NCSCs المحتملة التمايز نحو الأنساب الوسيطة. يمكن الخلايا العصبية في الدماغ لا تزال قائمة متباينة الماوس والاحتفاظ علامات التمايز العصبية. فقد تبين أن الشعر جريب المستمدة NCSCs إعادة نمو الأعصاب يمكن أن تساعد، وأنها تحسن وظيفة السيارات في الفئران مع زرع هذه الخلايا الجذعية بعد إصابة الحبل الشوكي transecting 8. وعلاوة على ذلك، تم إصلاح الأعصاب الطرفية مع ترقيع الخلايا الجذعية 9، وغرس الخلايا المشتقة من السلائف الجلد المجاور لسحق الأعصاب الوركي أدى إلى عودة الميالين 10. ولذلك، فقد أظهرت جريب الشعر / البشرة NCSCs المستمدة بالفعل نتائج واعدة للبحثegenerative العلاج في نماذج قبل السريرية. وقد أظهرت الجسدية الخلايا إعادة برمجة الخلايا المحفزة التي يسببها ل(آي بي إس) الجذعية إمكانات هائلة للطب التجديدي. ومع ذلك، هناك العديد من القضايا لا تزال مع خلايا الجذع، وخاصة تأثير على المدى الطويل من الجين الورمي / فيروس التكامل وtumorigenicity المحتملة للخلايا الجذعية المحفزة لم تعالج على نحو كاف. لا تزال هناك الكثير من العقبات التي يتعين التغلب عليها قبل أن تتمكن من استخدام خلايا الجذع للطب التجديدي. بينما من المعروف أن الخلايا الجذعية البالغة لتكون آمنة واستخدمت فيها سريريا لسنوات عديدة، مثل زرع نخاع العظام. وقد استفاد العديد من المرضى بالفعل من العلاج. ذاتي الخلايا الجذعية البالغة لا تزال الخلايا المفضل للزرع. ولذلك، فإن الجذعية البالغة يمكن الوصول إليها بسهولة وقابلة للتوسيع الخلايا في بصيلات الجلد / شعر الإنسان تعد مصدرا قيما للطب التجديدي.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles at JoVE.com

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

تقدم هذه المقالة قوية لبروتوكول العزلة وثقافة العصبية من الخلايا الجذعية قمة بصيلات الشعر البشري.

العزلة وثقافة العصبية الخلايا الجذعية من بصيلات الشعر كريست الإنسان

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

إنتاج استخراج الجنين الفرخ لزراعة الخلايا الجذعية العصبية الفئران كريست

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

العصبية تشكيل مستعمرة الفحص الخلوي : إن الفحص تميز بحسن نية الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا العصبية السلف

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

جيل من الخلايا الجذعية العصبية من الأنسجة الجنينية البشرية المهملة القشرية

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

العزلة والثقافة من خلايا الإنسان حليمات كمئية طعم

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

العزلة والثقافة من خلايا الفئران العصبية الجنينية: بروتوكول سريعة

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

وهناك طريقة توسيع المركب-ينطبق على مجاميع من العصبية الجذعية البشرية والخلايا المشتقة من الخلايا السلف الجذعية المحفزة أو الجنين أنسجة المخ

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

خالية من التغذية اشتقاق الخلايا العصبية كريست السلف من افرة القوة البشرية الخلايا الجذعية

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...