Name: isolation and culture of neural crest stem cells from human hair follicles
Uploaded: 2013-04-06T14:00:00
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Ce travail est soutenu par le NIH subvention R01AR054593 et ​​R01AR054593-S1 Xu.

1. Préparation des plaques de culture tissulaire <ol><li> Manteau chaque puits avec suffisamment de Poly-D-Lysine (PDL) pour couvrir le fond du puits. Laisser les plaques à sécher dans la hotte. </li><li> Après les puits sont à sec, rincez avec de l&#39;eau stérile et aspirer. Laisser les plaques à sécher dans la hotte. </li><li> Une fois sec, le manteau avec de la fibronectine (qui a été dissous dans de l&#39;eau Biowhittaker une nuit à 37 ° C, à une concentration de 1 mg dans 6 ml). </li><li> Ajouter à...

<ol>
	<li>Cotsarelis, G., Cheng, S. Z., Dong, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Existence+of+slow-cycling+limbal+epithelial+basal+cells+that+can+be+preferentially+stimulated+to+proliferate:+implications+on+epithelial+stem+cells.">Existence of slow-cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells.</a> Cell. 57, 201-209 (1989).</li><li>Cotsarelis, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-retaining+cells+reside+in+the+bulge+area+of+pilosebaceous+unit:+implications+for+follicular+stem+cells,+hair+cycle,+and+skin+carcinogenesis.">Label-retaining cells reside in the bulge area of pilosebaceous unit: implications for follicular stem cells, hair cycle, and skin carcinogenesis.</a> Cell. 61, 1329-1337 (1990).</li><li>Tanimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+follicle+stem+cells+provide+a+functional+niche+for+melanocyte+stem+cells.">Hair follicle stem cells provide a functional niche for melanocyte stem cells.</a> Cell Stem Cell. 8, 177-187 (2011).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+novel+population+of+multipotent+adult+stem+cells+from+human+hair+follicles.">Isolation of a novel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles.</a> Am. J. Pathol. 168, 1879-1888 (2006).</li><li>Yu, H., Kumar, S. M., Kossenkov, A. V., Showe, L., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+with+neural+crest+characteristics+derived+from+the+bulge+region+of+cultured+human+hair+follicles.">Stem cells with neural crest characteristics derived from the bulge region of cultured human hair follicles.</a> J. Invest. Dermatol. 130, 1227-1236 (2010).</li><li>Wong, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest-derived+cells+with+stem+cell+features+can+be+traced+back+to+multiple+lineages+in+the+adult+skin.">Neural crest-derived cells with stem cell features can be traced back to multiple lineages in the adult skin.</a> J. Cell Biol. 175, 1005-1015 (2006).</li><li>Sieber-Blum, M., Grim, M., Hu, Y. F., Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle.">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li><li>Amoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implanted+hair+follicle+stem+cells+form+Schwann+cells+that+support+repair+of+severed+peripheral+nerves.">Implanted hair follicle stem cells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 17734-17738 (2005).</li><li>Koliatsos, V. E., Xu, L., Yan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell+grafts+as+therapies+for+motor+neuron+disease.">Human stem cell grafts as therapies for motor neuron disease.</a> Expert Opin. Biol. Ther. 8, 137-141 (2008).</li><li>McKenzie, I. A., Biernaskie, J., Toma, J. G., Midha, R., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin-derived+precursors+generate+myelinating+Schwann+cells+for+the+injured+and+dysmyelinated+nervous+system.">Skin-derived precursors generate myelinating Schwann cells for the injured and dysmyelinated nervous system.</a> J. Neurosci. 26, 6651-6660 (2006).</li><li>LeDouarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Neural Crest. , (1999).</li><li>Tumbar, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+epithelial+stem+cell+niche+in+skin.">Defining the epithelial stem cell niche in skin.</a> Science. 303, 359-363 (2004).</li><li>Roh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-potentiality+of+a+new+immortalized+epithelial+stem+cell+line+derived+from+human+hair+follicles.">Multi-potentiality of a new immortalized epithelial stem cell line derived from human hair follicles.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 44, 236-244 (2008).</li></ol>

Les méthodes d&#39;isolement et de culture de cellules décrites sont reproductibles et robuste. Nous avons généré SNCLC parmi des dizaines de personnes à travers une large tranche d&#39;âge. Bien qu&#39;il soit préférable de traiter le tissu juste après la récolte des tissus, nous avons constaté que les tissus du cuir chevelu peuvent être stockés en toute sécurité dans les médias sur la glace pour le transport du jour au lendemain avec un impact minimal sur la viabilité cellulaire. <p class="jove_c...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>11965-092</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM/F12</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>11330-32</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heat-inactivated FBS</td>
 <td>Hyclone</td>
 <td>SH30071.03</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>B27 supplement</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17504044</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>N2 supplement</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17502048</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>bFGF</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>PHG0026</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EGF</td>
 <td>R&amp;D system</td>
 <td>236-EG-01M</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>IGF-I</td>
 <td>R&amp;D system</td>
 <td>291-G1-050</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.05% Trypsin/EDTA</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>25300-054</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dispase</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17105041</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin-Streptomycin</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>15070063</td>
 </tr>
 </tbody> 
</table>
Table 1.

isolation and culture of neural crest stem cells from human hair follicles

Les follicules pileux subissent une croissance continue et le cycle de cheveux est un processus bien contrôlé impliquant la prolifération des cellules souches et la quiétude. Renflement de cheveux est un créneau bien caractérisé pour les cellules souches adultes 1. Ce segment de la gaine épithéliale externe contient un certain nombre de différents types de cellules souches, notamment les cellules souches épithéliales 2, les cellules souches de mélanocytes 3 ​​et crête neurale comme les cellules souches 4-7. Les follicules pileux sont une source accessible et riche pour les différents types de cellules souches humaines. Nous et d&#39;autres avons isolé des cellules souches neurales de crête (SNCLC) de follicules pileux humains fœtaux et adultes 4,5. Ces cellules souches humaines sont des cellules de retenue de l&#39;étiquette et qui sont capables de s&#39;auto-renouveler par division cellulaire asymétrique in vitro. Ils expriment des marqueurs de cellules neurales immatures mais pas de crête marqueurs de différenciation. Notre étude a montré que le profil d&#39;expression qu&#39;ils partagent le même profil d&#39;expression génique similaire avec murin peau immature création de neuronescellules st. Ils présentent multipotence clonale qui peuvent donner lieu à des lignées de cellules myogéniques, mélanocytaire et neuronale après in vitro de culture cellulaire clonale unique. Les cellules différenciées non seulement acquérir la lignée des marqueurs spécifiques, mais aussi la démonstration de fonctions appropriées dans des conditions ex vivo. En outre, ces SNCLC montrer le potentiel de différenciation vers lignées mésenchymateuses. Différenciées des cellules neuronales peuvent persister dans le cerveau de souris et de conserver les marqueurs de différenciation neuronale. Il a été montré que les dérivés SNCLC follicule pileux peut aider à la repousse nerveuse, et ils améliorent la fonction motrice chez les souris transplantées avec des cellules souches à la suite de ces lésions de la moelle épinière sectionnant 8. En outre, les nerfs périphériques ont été réparés avec des greffes de cellules souches 9, et l&#39;implantation de cellules précurseurs provenant de la peau adjacente à écraser les nerfs sciatiques a abouti à la remyélinisation 10. Par conséquent, les follicules pileux de la peau / SNCLC dérivés ont déjà montré des résultats prometteurs pour rthérapie egenerative dans des modèles précliniques. Reprogrammation de cellules somatiques à des souches pluripotentes (iPS) a montré un énorme potentiel pour la médecine régénérative. Cependant, il ya encore beaucoup de problèmes avec les cellules iPS, en particulier l&#39;effet à long terme de l&#39;oncogène / virus intégration et tumorigénicité potentielle de cellules souches pluripotentes n&#39;ont pas été traitées de manière adéquate. Il existe encore de nombreux obstacles à surmonter avant que les cellules iPS peuvent être utilisés pour la médecine régénérative. Alors que les cellules souches adultes sont connus pour être en sécurité et ils ont été utilisés en clinique depuis de nombreuses années, comme la greffe de moelle osseuse. Beaucoup de patients ont déjà bénéficié de ce traitement. Autologues de cellules souches adultes sont toujours les cellules préférées pour la transplantation. Par conséquent, les cellules facilement accessibles et extensible souches adultes dans la peau de l&#39;homme / les follicules pileux sont une source précieuse pour la médecine régénérative.

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Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Cet article présente un protocole robuste pour l&#39;isolement et la culture des cellules souches neurales de crête des follicules pileux humains.

Isolement et culture des cellules souches neurales Crête des follicules pileux humains

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