Name: isolation and culture of neural crest stem cells from human hair follicles
Uploaded: 2013-04-06T14:00:00
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1. 조직 문화 플레이트의 작성 <ol><li> 코트는 각이 잘 폴리-D-리신 (PDL)이 우물의 바닥을 커버 할 수있을만큼. 플레이트는 후드에서 건조하도록 허용합니다. </li><li> 우물이 건조 후, 멸균 물을 헹구고, 대기음. 플레이트는 후드에서 건조하도록 허용합니다. </li><li> 때 fibronectin과 건조, 코트 (6 ML 1 밀리그램의 농도에서 37 ° C에서 하룻밤 biowhittaker 물에 용해 된 것). </li><li> NCSC 매체를 추가합니다 [95 M...

<ol>
	<li>Cotsarelis, G., Cheng, S. Z., Dong, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Existence+of+slow-cycling+limbal+epithelial+basal+cells+that+can+be+preferentially+stimulated+to+proliferate:+implications+on+epithelial+stem+cells.">Existence of slow-cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells.</a> Cell. 57, 201-209 (1989).</li><li>Cotsarelis, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-retaining+cells+reside+in+the+bulge+area+of+pilosebaceous+unit:+implications+for+follicular+stem+cells,+hair+cycle,+and+skin+carcinogenesis.">Label-retaining cells reside in the bulge area of pilosebaceous unit: implications for follicular stem cells, hair cycle, and skin carcinogenesis.</a> Cell. 61, 1329-1337 (1990).</li><li>Tanimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+follicle+stem+cells+provide+a+functional+niche+for+melanocyte+stem+cells.">Hair follicle stem cells provide a functional niche for melanocyte stem cells.</a> Cell Stem Cell. 8, 177-187 (2011).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+novel+population+of+multipotent+adult+stem+cells+from+human+hair+follicles.">Isolation of a novel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles.</a> Am. J. Pathol. 168, 1879-1888 (2006).</li><li>Yu, H., Kumar, S. M., Kossenkov, A. V., Showe, L., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+with+neural+crest+characteristics+derived+from+the+bulge+region+of+cultured+human+hair+follicles.">Stem cells with neural crest characteristics derived from the bulge region of cultured human hair follicles.</a> J. Invest. Dermatol. 130, 1227-1236 (2010).</li><li>Wong, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest-derived+cells+with+stem+cell+features+can+be+traced+back+to+multiple+lineages+in+the+adult+skin.">Neural crest-derived cells with stem cell features can be traced back to multiple lineages in the adult skin.</a> J. Cell Biol. 175, 1005-1015 (2006).</li><li>Sieber-Blum, M., Grim, M., Hu, Y. F., Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle.">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li><li>Amoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implanted+hair+follicle+stem+cells+form+Schwann+cells+that+support+repair+of+severed+peripheral+nerves.">Implanted hair follicle stem cells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 17734-17738 (2005).</li><li>Koliatsos, V. E., Xu, L., Yan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell+grafts+as+therapies+for+motor+neuron+disease.">Human stem cell grafts as therapies for motor neuron disease.</a> Expert Opin. Biol. Ther. 8, 137-141 (2008).</li><li>McKenzie, I. A., Biernaskie, J., Toma, J. G., Midha, R., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin-derived+precursors+generate+myelinating+Schwann+cells+for+the+injured+and+dysmyelinated+nervous+system.">Skin-derived precursors generate myelinating Schwann cells for the injured and dysmyelinated nervous system.</a> J. Neurosci. 26, 6651-6660 (2006).</li><li>LeDouarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Neural Crest. , (1999).</li><li>Tumbar, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+epithelial+stem+cell+niche+in+skin.">Defining the epithelial stem cell niche in skin.</a> Science. 303, 359-363 (2004).</li><li>Roh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-potentiality+of+a+new+immortalized+epithelial+stem+cell+line+derived+from+human+hair+follicles.">Multi-potentiality of a new immortalized epithelial stem cell line derived from human hair follicles.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 44, 236-244 (2008).</li></ol>

설명 셀 절연과 문화 방법은 재현하고 강력한 있습니다. 우리는 폭 넓은 연령대에 걸쳐 개인의 수십에서 NCSCs를 생성했습니다. 그것은 바로 조직의 수확 후 조직을 처리하는 것이 좋습니다 있지만, 우리는 두피의 조직이 안전하게 세포 생존에 미치는 영향을 최소화 하루 아침에 교통 얼음의 미디어에 저장할 수 있습니다 것으로 나타났습니다. 이 항생제로 두피 조직을 치료?...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>11965-092</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM/F12</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>11330-32</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heat-inactivated FBS</td>
 <td>Hyclone</td>
 <td>SH30071.03</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>B27 supplement</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17504044</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>N2 supplement</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17502048</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>bFGF</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>PHG0026</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EGF</td>
 <td>R&amp;D system</td>
 <td>236-EG-01M</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>IGF-I</td>
 <td>R&amp;D system</td>
 <td>291-G1-050</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.05% Trypsin/EDTA</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>25300-054</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dispase</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>17105041</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin-Streptomycin</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>15070063</td>
 </tr>
 </tbody> 
</table>
Table 1.

isolation and culture of neural crest stem cells from human hair follicles

모낭은 평생 성장을 받아야과 헤어 사이클은 줄기 세포 증식 및 정지를 포함 잘 제어 과정입니다. 헤어 팽창은 성인의 줄기 세포 1에 대한 잘 특징 틈새 시장입니다. 바깥 쪽 루트 피복의이 부분은 ​​상피 줄기 세포 2, melanocyte 줄기 세포 3 4-7 줄기 세포와 같은 신경 문장을 포함한 줄기 세포의 다른 유형의 번호를 포함하고 있습니다. 모낭은 인간 줄기 세포의 다른 유형에 대한 접근과 풍부한 소스를 나타냅니다. 우리와 다른 사람들은 4,5 인간의 태아 및 성인 모낭에서 신경 문장의 줄기 세포를 (NCSCs) 분리했습니다. 이러한 인간의 줄기 세포는 라벨 - 유지 전지이며, 체외에서 비대칭 세포 분열을 통해 자기 갱신 할 수 있습니다. 그들은이지나 신경 크레스트 세포 마커가 아닌 차별화 마커를 표현한다. 우리 식 프로파일 연구들은 손쥐 피부에 미숙 한 신경 cre와 유사한 유전자 발현 패턴을 공유했다성 세포. 그들은 체외 clonal 하나의 세포 배양에 후, myogenic melanocytic, 그리고 neuronal 세포 lineages을 야기 할 수 있습니다 clonal multipotency을 나타냅니다. 차별화 된 세포는 계보 (Lineage) - 특정 마커를 취득뿐만 아니라 전 생체 조건에 적합한 기능을 보여줍니다 없습니다. 또한 이러한 NCSCs는 중간 엽 lineages 대한 차별화의 잠재력을 보여줍니다. 차별화 된 neuronal 세포는 마우스의 뇌에 계속하고 neuronal 차별화 마커를 유지 할 수 있습니다. 그것은 머리가 NCSCs 신경 regrowth을 할 수 있습니다 파생 고치, 그리고 그들이 끊어 버렸네 척추 부상 8 다음이 줄기 세포를 이식 마우스에 모터 기능을 향상시키는 것이 보여왔다. 또한, 주변 신경은 줄기 세포 이식은 9, 눌린 좌골 신경에 인접 해 피부 파생 전구체 세포의 주입과 수리 된 remyelination 10 결과입니다. 따라서 헤어 대과 / 피부 파생 NCSCs은 이미 연구에 대한 긍정적 인 결과를 보여 주었다잠복기 모델 egenerative 치료. 유도 만능 줄기 (IPS) 셀에 재 프로그램 체세포는 재생 의료에 대한 엄청난 잠재력을 보여 주었다. 그러나, 특히 IPS 세포, 종양 유전자 / 바이러스 통합 만능 줄기 세포의 잠재적 tumorigenicity의 장기적 효과 아직 많은 문제를 적절하게 해결되지 않은이 있습니다. IPS 세포는 재생 의료에 사용하기 전에 극복 할 많은 장애물은 여전히​​ 있습니다. 성인 줄기 세포는 안전한 것으로 알려져 있으며, 그들은 같은 골수 이식 등 많은 년에 임상 적으로 사용되었습니다 반면. 대부분의 환자는 이미 치료의 혜택을했습니다. Autologous 성인 줄기 세포는 아직 이식에 대한 선호 세포입니다. 따라서, 인간의 피부 / 머리카락 모낭에 쉽게 액세스 할 수 있으며 확장이 성인 줄기 세포는 재생 의료에 대한 가치있는 소스입니다.

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Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

이 문서는 인간의 모낭에서 신경 문장의 줄기 세포의 분리와 문화에 대한 강력한 프로토콜을 제공합니다.

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