1. Instrumentation 
<ol>
<li>To measure the response of olfactory sensory neurons to photolysis of caged compounds we use a flash lamp in combination with a typical patch-clamp recording system including: a patch-clamp amplifier, a recording electrode and a reference electrode connected to the head-stage of a patch-clamp amplifier, a digitizer, a computer, software for data acquisition, micro-manipulators, an epifluorescence microscope, a perfusion system, an anti-vibration table and a Faraday cage (Figure 2).</li>
<li...

<ol>
	<li>Ellis-Davies, G. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caged+compounds:+photorelease+technology+for+control+of+cellular+chemistry+and+physiology.">Caged compounds: photorelease technology for control of cellular chemistry and physiology.</a> Nat. Methods. 4, 619-628 (2007).</li><li>Pifferi, S., Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+nucleotide-gated+ion+channels+in+sensory+transduction.">Cyclic nucleotide-gated ion channels in sensory transduction.</a> FEBS Lett. 580, 2853-2859 (2006).</li><li>Bozza, T. C., Kauer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant+response+properties+of+convergent+olfactory+receptor+neurons.">Odorant response properties of convergent olfactory receptor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 4560-4569 (1998).</li><li>Hagen, V., Bendig, J., Frings, S., Eckardt, T., Helm, S., Reuter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Efficient+and+Ultrafast+Phototriggers+for+cAMP+and+cGMP+by+Using+Long-Wavelength+UV/Vis-Activation.">Highly Efficient and Ultrafast Phototriggers for cAMP and cGMP by Using Long-Wavelength UV/Vis-Activation.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 40, 1045-1048 (2001).</li><li>Kaplan, J. H., Ellis-Davies, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photolabile+chelators+for+the+rapid+photorelease+of+divalent+cations.">Photolabile chelators for the rapid photorelease of divalent cations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 6571-6575 (1988).</li><li>Rapp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+lamp-based+irradiation+of+caged+compounds.">Flash lamp-based irradiation of caged compounds.</a> Methods. Enzymol. 291, 202-222 (1998).</li><li>Gurney, A. M., Montenegro, I., Queiros, M. A., Daschbach, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+photolysis+of+caged+compounds.">Flash photolysis of caged compounds.</a> Microelectrodes: Theory and Applications. , (1991).</li><li>Lagostena, L., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+recordings+and+photolysis+of+caged+compounds+in+olfactory+sensory+neurons+isolated+from+the+mouse.">Whole-cell recordings and photolysis of caged compounds in olfactory sensory neurons isolated from the mouse.</a> Chem. Senses. 28, 705-716 (2003).</li><li>Boccaccio, A., Lagostena, L., Hagen, V., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+adaptation+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+does+not+require+the+activity+of+phosphodiesterase.">Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase.</a> J. Gen. Physiol. 128, 171-184 (2006).</li><li>Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+development+of+cyclic+nucleotide-gated+and+Ca2++-activated+Cl-+currents+in+isolated+mouse+olfactory+sensory+neurons.">Temporal development of cyclic nucleotide-gated and Ca2+ -activated Cl- currents in isolated mouse olfactory sensory neurons.</a> J. Neurophysiol. 98, 153-160 (2007).</li><li>Sagheddu, C., Boccaccio, A., Dibattista, M., Montani, G., Tirindelli, R., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+concentration+jumps+reveal+dynamic+ion+selectivity+of+calcium-activated+chloride+currents+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+and+TMEM16B-transfected+HEK+293T+cells.">Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16B-transfected HEK 293T cells.</a> J. Physiol. 588, 4189-4204 (2010).</li><li>Balana, B., Taylor, N., Slesinger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutagenesis+and+Functional+Analysis+of+Ion+Channels+Heterologously+Expressed+in+Mammalian+Cells.">Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells.</a> J. Vis. Exp. (44), e2189-e2189 (2010).</li><li>Cygnar, K. D., Stephan, A. B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+Responses+of+Mouse+Olfactory+Sensory+Neurons+Using+the+Air-phase+Electroolfactogram+Recording.">Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording.</a> J. Vis. Exp. (37), e1850-e1850 (2010).</li><li>Bernardinelli, Y., Haeberli, C., Chatton, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+photolysis+using+a+light+emitting+diode:+an+efficient,+compact,+and+affordable+solution.">Flash photolysis using a light emitting diode: an efficient, compact, and affordable solution.</a> Cell. Calcium. 37, 565-572 (2005).</li></ol>

Photolysis פלאש של תרכובות בכלוב בשילוב עם תיקון-clamp ההקלטות היא טכניקה יעילה כדי להשיג קופץ מהירים מקומיים ריכוז מולקולות פעילות פיזיולוגית הן בתוך והן מחוץ לתאים. מספר סוגים של compounds1 בכלוב היה מסונתז, ואת הטכניקה הזאת ניתן ליישם סוגים שונים של תאים, כולל תאים בתרבית להב?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> ציוד </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> מתאם מודול מנורת פלאש כדי מיקרוסקופ </td><td> ראפ אופטו </td><td> FlashCube 70 </td><td></td></tr><tr><td> שולחן האוויר </td><td> TMC </td><td> מיקרו גרם 63-534 </td><td></td></tr><tr><td> Digitizer </td><td> אקסון מכשירים </td><td> Digidata 1322A </td><td></td></tr><tr><td> נתונים רכישת תוכנה </td><td> אקסון מכשירים </td><td> pClamp 8 </td><td></td></tr><tr><td> ניתוח נתונים תוכנה </td><td> WaveMetrics </td><td> איגור </td><td></td></tr><tr><td> מראה מתאם עבור מודול </td><td> ראפ אופטו </td><td> M70/100 </td><td></td></tr><tr><td> מחזיק אלקטרודה </td><td> אקסון מכשירים </td><td> 1-HL-U </td><td></td></tr><tr><td> כלוב פאראדיי של </td><td> מותאמים ללקוח </td><td></td><td></td></tr><tr><td> סנן קוביה </td><td> אולימפוס </td><td> U-MWU </td><td> פילטר עירור הוסר </td></tr><tr><td> מנורת פלאש </td><td> ראפ אופטו </td><td> JML-C2 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים דומון # 55 </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> 14099 </td><td></td></tr><tr><td> זכוכית נימי </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> PG10165-4 </td><td></td></tr><tr><td> בתחתית צלחת זכוכית </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> FD35-100 </td><td></td></tr><tr><td> הפנס </td><td> אולימפוס </td><td> הדגש 3100 </td><td></td></tr><tr><td> הפוך מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> IX70 </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulators </td><td> Luigs &amp; נוימן </td><td> אני SM </td><td></td></tr><tr><td> Micropipette פולר </td><td> Narishige </td><td> PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> צג </td><td> HesaVision </td><td> MTB-01 </td><td></td></tr><tr><td> הצפיפות מסננים ניטרלי </td><td> אומגה אופטי </td><td> משתנה </td><td></td></tr><tr><td> המטרה 100x </td><td> Zeiss </td><td> Fluar 440285 </td><td> או צייס או Olympus </td></tr><tr><td> המטרה 100x </td><td> אולימפוס </td><td> UPLFLN 100XOI2 </td><td> או צייס או אולימפוס </td></tr><tr><td> UV מסנן אופטי shortpass </td><td> ראפ אופטו </td><td> SP400 </td><td></td></tr><tr><td> Patch-clamp מגבר </td><td> אקסון מכשירים </td><td> Axopatch 200B </td><td></td></tr><tr><td> תמונה העצרת דיודה </td><td> ראפ אופטו </td><td> מחשב כף יד </td><td></td></tr><tr><td> מדריך קוורץ אור </td><td> ראפ אופטו </td><td> משתנה </td><td> אנו משתמשים בקוטר 600 מיקרומטר </td></tr><tr><td> חוט כסף </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> AGT1025 </td><td></td></tr><tr><td> כסף הקרקע גלולה </td><td> וורנר מכשירים </td><td> 64-1309 </td><td></td></tr><tr><td> מנורת קסנון קשת </td><td> ראפ אופטו </td><td> XBL-JML </td><td></td></tr></tbody></table> <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> BCMCM-בכלוב cAMP </td><td> BioLog </td><td> B016 </td></tr><tr><td> שור בסרום אלבומין (BSA) </td><td> סיגמא </td><td> A8806 </td></tr><tr><td> CaCl2 תקן 0.1 פתרון M </td><td> Fluka </td><td> 21059 </td></tr><tr><td> Ca Caged: DMNP-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> D6814 </td></tr><tr><td> ציסטאין </td><td> סיגמא </td><td> C9768 </td></tr><tr><td> Concanavalin סוג V (ConA) </td><td> סיגמא </td><td> C7275 </td></tr><tr><td> CsCl </td><td> סיגמא </td><td> C4036 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> סיגמא </td><td> D8418 </td></tr><tr><td> אני DNAse </td><td> סיגמא </td><td> D4527 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> סיגמא </td><td> E9884 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> סיגמא </td><td> E4378 </td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> סיגמא </td><td> G5767 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> סיגמא </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> סיגמא </td><td> P3911 </td></tr><tr><td> KOH </td><td> סיגמא </td><td> P1767 </td></tr><tr><td> Leupeptin </td><td> סיגמא </td><td> L0649 </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> Fluka </td><td> 63020 </td></tr><tr><td> Papain </td><td> סיגמא </td><td> P3125 </td></tr><tr><td> פולי-L-ליזין </td><td> סיגמא </td><td> P1274 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> סיגמא </td><td> S9888 </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> סיגמא </td><td> S5881 </td></tr><tr><td> NaPyruvate </td><td> סיגמא </td><td> P2256 </td></tr></tbody></table>

flash photolysis of caged compounds in the cilia of olfactory sensory  neurons

Photolysis של תרכובות בכלוב מאפשר ייצור של עליות מהירה מקומי בריכוז של חומרים פעילים מבחינה פיזיולוגית שונים 1. תרכובות בכלובים הם מולקולות עשה פעילות פיזיולוגית של כלוב כימי ניתן לשבור על ידי הבזק של אור אולטרה סגול. כאן, אנו מראים כיצד ניתן להשיג תיקון-clamp הקלטות בשילוב עם photolysis של תרכובות בכלוב לחקר התמרה חוש הריח של העכבר ניתק עצב ההרחה חושית. תהליך התמרה חוש הריח (איור 1) מתקיים cilia של נוירונים חושי הריח, שם odorant קשירה לקולטנים מובילה כדי להגדיל את המחנה שנפתח מחזורית נוקלאוטיד-מגודרת (CNG) בערוצים 2. כניסה Ca בערוצים מפעילה CNG Ca המופעל ערוצי Cl. אנחנו מראים איך לנתק את הנוירונים מפני אפיתל ההרחה העכבר 3 ואיך להפעיל ערוצי CNG או CA-מופעל על ידי תעלות Cl photolysis המחנה בכלוב 4 או בכלוב Ca 5 &lt;/ Sup&gt;. אנו משתמשים מנורת פלאש 6,7 ליישם גלי אולטרה לאזור ריסי אל uncage cAMP או Ca תוך תיקון-clamp הקלטות ננקטים כדי למדוד את הזרם בתצורה מתח מהדק כל תא 8-11.

Watch this Scientific Journal Video about Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons at JoVE.com

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Photolysis של תרכובות בכלוב מאפשר ייצור של עליות מהירה מקומי בריכוז של חומרים פעילים מבחינה פיזיולוגית שונים. כאן, אנו מראים כיצד ניתן להשיג תיקון-clamp הקלטות בשילוב עם photolysis המחנה בכלוב או בכלוב Ca לחקר התמרה חוש הריח של העכבר ניתק עצב ההרחה חושית.

פלאש Photolysis של תרכובות כלואה צילה של עצב סנסורי חוש הריח

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

ניתוח התגובות של נוירונים עכבר חוש הריח חושי באמצעות הקלטה אוויר שלב Electroolfactogram

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-הדמיה של טרנסלוקציה של PKC Sf9 תאים בנוירונים Aplysia חושי

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Lentivirus בתיווך ויזואליזציה מניפולציה גנטית של עצב סנסורי חוש הריח In vivo</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

תאית הקלטה, חושי שדה מיפוי, ונוירונים שזוהו Culturing בעלוקה, Medicinalis Hirudo</i

The freshwater leech, Hirudo medicinalis, is a versatile model organism that has been used to address scientific questions in the fields of ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

הר immunolabeling השלם של חוש הריח קולטן נוירונים<em&gt; דרוזופילה</em&gt; אנטנה

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

הר תיוג כל צילה במערכת חוש הריח העיקרית של עכברים

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

הקלטה מחוררת תיקון מהדק של עכבר עצב סנסורי חוש הריח בneuroepithelium שלמים: ניתוח פונקציונלי של נוירונים הבעת קולטן odorant מזוהה

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

הדמיה חיה של צילה Ependymal בחדרים לרוחב של מוח העכבר

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

התנהגויות חוש הריח assayed ידי מעקב ממוחשב של<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתוך אולפקטומטר ארבעה-רביע

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

הכנה פיזיולוגית של תאי שיער מן Sacculus של הבוקסר האמריקאי (<em&gt; רנא catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...