1. Instrumentation 
<ol>
<li>To measure the response of olfactory sensory neurons to photolysis of caged compounds we use a flash lamp in combination with a typical patch-clamp recording system including: a patch-clamp amplifier, a recording electrode and a reference electrode connected to the head-stage of a patch-clamp amplifier, a digitizer, a computer, software for data acquisition, micro-manipulators, an epifluorescence microscope, a perfusion system, an anti-vibration table and a Faraday cage (Figure 2).</li>
<li...

<ol>
	<li>Ellis-Davies, G. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caged+compounds:+photorelease+technology+for+control+of+cellular+chemistry+and+physiology.">Caged compounds: photorelease technology for control of cellular chemistry and physiology.</a> Nat. Methods. 4, 619-628 (2007).</li><li>Pifferi, S., Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+nucleotide-gated+ion+channels+in+sensory+transduction.">Cyclic nucleotide-gated ion channels in sensory transduction.</a> FEBS Lett. 580, 2853-2859 (2006).</li><li>Bozza, T. C., Kauer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant+response+properties+of+convergent+olfactory+receptor+neurons.">Odorant response properties of convergent olfactory receptor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 4560-4569 (1998).</li><li>Hagen, V., Bendig, J., Frings, S., Eckardt, T., Helm, S., Reuter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Efficient+and+Ultrafast+Phototriggers+for+cAMP+and+cGMP+by+Using+Long-Wavelength+UV/Vis-Activation.">Highly Efficient and Ultrafast Phototriggers for cAMP and cGMP by Using Long-Wavelength UV/Vis-Activation.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 40, 1045-1048 (2001).</li><li>Kaplan, J. H., Ellis-Davies, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photolabile+chelators+for+the+rapid+photorelease+of+divalent+cations.">Photolabile chelators for the rapid photorelease of divalent cations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 6571-6575 (1988).</li><li>Rapp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+lamp-based+irradiation+of+caged+compounds.">Flash lamp-based irradiation of caged compounds.</a> Methods. Enzymol. 291, 202-222 (1998).</li><li>Gurney, A. M., Montenegro, I., Queiros, M. A., Daschbach, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+photolysis+of+caged+compounds.">Flash photolysis of caged compounds.</a> Microelectrodes: Theory and Applications. , (1991).</li><li>Lagostena, L., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+recordings+and+photolysis+of+caged+compounds+in+olfactory+sensory+neurons+isolated+from+the+mouse.">Whole-cell recordings and photolysis of caged compounds in olfactory sensory neurons isolated from the mouse.</a> Chem. Senses. 28, 705-716 (2003).</li><li>Boccaccio, A., Lagostena, L., Hagen, V., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+adaptation+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+does+not+require+the+activity+of+phosphodiesterase.">Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase.</a> J. Gen. Physiol. 128, 171-184 (2006).</li><li>Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+development+of+cyclic+nucleotide-gated+and+Ca2++-activated+Cl-+currents+in+isolated+mouse+olfactory+sensory+neurons.">Temporal development of cyclic nucleotide-gated and Ca2+ -activated Cl- currents in isolated mouse olfactory sensory neurons.</a> J. Neurophysiol. 98, 153-160 (2007).</li><li>Sagheddu, C., Boccaccio, A., Dibattista, M., Montani, G., Tirindelli, R., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+concentration+jumps+reveal+dynamic+ion+selectivity+of+calcium-activated+chloride+currents+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+and+TMEM16B-transfected+HEK+293T+cells.">Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16B-transfected HEK 293T cells.</a> J. Physiol. 588, 4189-4204 (2010).</li><li>Balana, B., Taylor, N., Slesinger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutagenesis+and+Functional+Analysis+of+Ion+Channels+Heterologously+Expressed+in+Mammalian+Cells.">Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells.</a> J. Vis. Exp. (44), e2189-e2189 (2010).</li><li>Cygnar, K. D., Stephan, A. B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+Responses+of+Mouse+Olfactory+Sensory+Neurons+Using+the+Air-phase+Electroolfactogram+Recording.">Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording.</a> J. Vis. Exp. (37), e1850-e1850 (2010).</li><li>Bernardinelli, Y., Haeberli, C., Chatton, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+photolysis+using+a+light+emitting+diode:+an+efficient,+compact,+and+affordable+solution.">Flash photolysis using a light emitting diode: an efficient, compact, and affordable solution.</a> Cell. Calcium. 37, 565-572 (2005).</li></ol>

Флэш фотолиза клетке соединений в сочетании с патч-зажим записи является полезным методом для получения быстрого и местных скачков концентрации физиологически активных молекул внутри и вне клетки. Несколько типов клетке compounds1 были синтезированы, и эта техника может быть применена к ?...

<table border="1"><tbody><tr><th> Оборудование </th><th> Компания </th><th> Номер по каталогу </th><th> Комментарии </th></tr><tr><td> Адаптер модуля лампы-вспышки с микроскопом </td><td> Рапп Оптоэлектронные </td><td> FlashCube 70 </td><td></td></tr><tr><td> Воздух стол </td><td> TMC </td><td> МИКРО-г 63-534 </td><td></td></tr><tr><td> Digitizer </td><td> Axon инструменты </td><td> DIGIDATA 1322A </td><td></td></tr><tr><td> ПО для сбора данных </td><td> Axon инструменты </td><td> pClamp 8 </td><td></td></tr><tr><td> Анализ данных программного обеспечения </td><td> WaveMetrics </td><td> Игорь </td><td></td></tr><tr><td> Зеркало для модуль адаптера </td><td> Рапп Оптоэлектронные </td><td> M70/100 </td><td></td></tr><tr><td> Держатель электрода </td><td> Axon инструменты </td><td> 1-HL-U </td><td></td></tr><tr><td> Фарадея клетке </td><td> На заказ </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Фильтры куб </td><td> Олимп </td><td> U-MWU </td><td> Возбуждение фильтр удален </td></tr><tr><td> Импульсная лампа </td><td> Рапп Оптоэлектронные </td><td> JML-C2 </td><td></td></tr><tr><td> Пинцет Дюмон # 55 </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 14099 </td><td></td></tr><tr><td> Стекло капилляров </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> PG10165-4 </td><td></td></tr><tr><td> Блюдо с прозрачным дном </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> FD35-100 </td><td></td></tr><tr><td> Осветитель </td><td> Олимп </td><td> Выделите 3100 </td><td></td></tr><tr><td> Инвертационный микроскоп </td><td> Олимп </td><td> IX70 </td><td></td></tr><tr><td> Микроманипуляторы </td><td> Luigs и Неймана </td><td> С. М. Я </td><td></td></tr><tr><td> Микропипетки Puller </td><td> Narishige </td><td> PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> Монитор </td><td> HesaVision </td><td> МТБ-01 </td><td></td></tr><tr><td> Фильтры нейтральной плотности </td><td> Омега Оптические </td><td> меняется </td><td></td></tr><tr><td> Цель 100X </td><td> Zeiss </td><td> Fluar 440285 </td><td> Либо Zeiss или Olympuы </td></tr><tr><td> Цель 100X </td><td> Олимп </td><td> UPLFLN 100XOI2 </td><td> Либо Zeiss или Olympus </td></tr><tr><td> Оптический фильтр УФ shortpass </td><td> Рапп Оптоэлектронные </td><td> SP400 </td><td></td></tr><tr><td> Патч-зажим усилителя </td><td> Axon инструменты </td><td> Axopatch 200B </td><td></td></tr><tr><td> Фотодиод Ассамблеи </td><td> Рапп Оптоэлектронные </td><td> КПК </td><td></td></tr><tr><td> Кварцевый световод </td><td> Рапп Оптоэлектронные </td><td> меняется </td><td> Мы используем 600 мкм в диаметре </td></tr><tr><td> Серебряная проволока </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> AGT1025 </td><td></td></tr><tr><td> Серебряная земля гранул </td><td> Warner инструменты </td><td> 64-1309 </td><td></td></tr><tr><td> Ксеноновая дуговая лампа </td><td> Рапп Оптоэлектронные </td><td> XBL-JML </td><td></td></tr></tbody></table> <table border="1"><tbody><tr><th> Реагент </th><th> Компания </th><th> Номер по каталогу </th></tr><tr><td> BCMCM-клетке цАМФ </td><td> Биолог </td><td> B016 </td></tr><tr><td> Бычий сывороточный альбумин (BSA) </td><td> Сигма </td><td> A8806 </td></tr><tr><td> CaCl2 стандартный раствор 0,1 М </td><td> Fluka </td><td> 21059 </td></tr><tr><td> Caged Ca: DMNP-ЭДТА </td><td> Invitrogen </td><td> D6814 </td></tr><tr><td> Цистеин </td><td> Сигма </td><td> C9768 </td></tr><tr><td> Конканавалин типа V (ConA) </td><td> Сигма </td><td> C7275 </td></tr><tr><td> CsCl </td><td> Сигма </td><td> C4036 </td></tr><tr><td> ДМСО </td><td> Сигма </td><td> D8418 </td></tr><tr><td> Я ДНКазы </td><td> Сигма </td><td> D4527 </td></tr><tr><td> ЭДТА </td><td> Сигма </td><td> E9884 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> Сигма </td><td> E4378 </td></tr><tr><td> Глюкоза </td><td> Сигма </td><td> G5767 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Сигма </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Сигма </td><td> P3911 </td></tr><tr><td> КОН </td><td> Сигма </td><td> P1767 </td></tr><tr><td> Leupeptin </td><td> Сигма </td><td> L0649 </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> Fluka </td><td> 63020 </td></tr><tr><td> Папаин </td><td> Сигма </td><td> P3125 </td></tr><tr><td> Poly-L-лизин </td><td> Сигма </td><td> P1274 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Сигма </td><td> S9888 </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Сигма </td><td> S5881 </td></tr><tr><td> NaPyruvate </td><td> Сигма </td><td> P2256 </td></tr></tbody></table>

flash photolysis of caged compounds in the cilia of olfactory sensory  neurons

Фотолиз клетке соединений позволяет получать быстрое и локализованные увеличение концентрации различных физиологически активных соединений 1. Клетке соединений молекулы, физиологически неактивных по химической клетки, которые могут быть нарушены вспышки ультрафиолетового света. Здесь мы покажем, как получить патч-зажим записи в сочетании с фотолиза клетке соединений для изучения обонятельной трансдукции в диссоциированных мыши обонятельной сенсорных нейронов. Процесс обонятельной трансдукции (рис. 1) имеет место в ресничками обонятельных сенсорных нейронов, где одоранта связывания с рецепторами приводит к повышению цАМФ, который открывает циклических нуклеотидов закрытого (СПГ) каналы 2. Са запись с помощью СПГ каналов активирует Са-активированных каналов Cl. Мы покажем, как отделить нейроны от мыши обонятельный эпителий 3 и инструкции по активации СПГ каналов или Ca-Cl активированного каналы фотолиза клетке цАМФ 4 или клетку Са 5 &lt;/ SUP&gt;. Мы используем лампы-вспышки 6,7 применять ультрафиолетовые вспышки для цилиарной региона выпускать из клетки цАМФ или Са в то время как патч-зажим записи взяты для измерения тока в цельноклеточной напряжения зажим конфигурации 8-11.

Watch this Scientific Journal Video about Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons at JoVE.com

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Фотолиз клетке соединений позволяет получать быстрое и локализованные увеличение концентрации различных физиологически активных соединений. Здесь мы покажем, как получить патч-зажим записи в сочетании с фотолиза клетках или в клетках цАМФ Ca для изучения обонятельной трансдукции в диссоциированных мыши обонятельной сенсорных нейронов.

Флэш Фотолиз клетке соединений в ресничек Обонятельные сенсорные нейроны

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

Анализ Ответы Мышь обонятельной сенсорных нейронов Использование воздушного фазы Electroolfactogram Запись

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-изображений PKC транслокации в Sf9 клеток и в Aplysia сенсорных нейронов

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Лентивирус-опосредованной генетических манипуляций и визуализация Обонятельные сенсорные нейроны В естественных условиях</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

Внутриклеточной регистрации, Сенсорная поле карт, а также культивирование Выявленные Нейроны в Лича, Hirudo MEDICINALIS</i

The freshwater leech, Hirudo medicinalis, is a versatile model organism that has been used to address scientific questions in the fields of ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Всего Гора иммунного обонятельных рецепторов нейронов в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Антенны

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

Всего горе Маркировка ресничек в Главном обонятельной системе мышей

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Перфорированные патч-зажим записи из мышей Обонятельные сенсорные нейроны в неповрежденном нейроэпителии: Функциональный анализ нейронов выражая идентифицированного одоранта рецептор

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Живая съемка в эпендимных ресничек боковых желудочков головного мозга мыши

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

Обонятельные Поведения, испытываемых Computer Отслеживание<em&gt; Drosophila</em&gt; В четырехквадрантном одориметра

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Физиологический Получение волосковых клеток из саккулюс американского Bullfrog (<em&gt; Рана catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...