Name: experimental generation of carcinoma-associated fibroblasts (cafs) from human mammary fibroblasts
Uploaded: 2011-10-25T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts at JoVE.com

نشكر الدكتور روبرت ألف واينبرغ (معهد وايتهيد للأبحاث الطبية الحيوية في كامبريدج) للحصول على الدعم السخي والإشراف على هذا العمل ، والسيد كيران Mellody (جامعة مانشستر ، مانشستر) للتحرير الحاسمة لهذا المخطوط. وقد أيد هذا المشروع من قبل المملكة المتحدة للبحوث (CR - المملكة المتحدة) منح عدد C147/A6058 (AO)

1. عزل الخلايا الليفية الأولية العادي المثقف الإنسان الثديية وترد الإجراءات التجريبية لعزل المثقف الإنسان العادي الليفية الأولية الثديية في الشكل. 1A. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العازلة تفارق الخلية ?...

<ol>
	<li>Ronnov-Jessen, L., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+by+proxy:+can+the+microenvironment+be+both+the+cause+and+consequence?.">Breast cancer by proxy: can the microenvironment be both the cause and consequence?.</a> Trends Mol. Med. 15, 5-13 (2009).</li><li>Mueller, M. M., Fusenig, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Friends+or+foes+-+bipolar+effects+of+the+tumour+stroma+in+cancer.">Friends or foes - bipolar effects of the tumour stroma in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 4, 839-849 (2004).</li><li>Bhowmick, N. A., Neilson, E. G., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+in+cancer+initiation+and+progression.">Stromal fibroblasts in cancer initiation and progression.</a> Nature. 432, 332-337 (2004).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>De Wever, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tenascin-C+and+SF/HGF+produced+by+myofibroblasts+in+vitro+provide+convergent+pro-invasive+signals+to+human+colon+cancer+cells+through+RhoA+and+Rac.">Tenascin-C and SF/HGF produced by myofibroblasts in vitro provide convergent pro-invasive signals to human colon cancer cells through RhoA and Rac.</a> 18, 1016-1018 (2004).</li><li>Serini, G., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+myofibroblast+activity+and+phenotypic+modulation.">Mechanisms of myofibroblast activity and phenotypic modulation.</a> Exp. Cell. Res. 250, 273-283 (1999).</li><li>Shimoda, M., Mellody, K. T., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinoma-associated+fibroblasts+are+a+rate-limiting+determinant+for+tumour+progression.">Carcinoma-associated fibroblasts are a rate-limiting determinant for tumour progression.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 21, 19-25 (2010).</li><li>Pietras, K., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+interactions+with+the+tumor+stroma.">Hallmarks of cancer: interactions with the tumor stroma.</a> Exp. Cell. Res. 316, 1324-1331 (2010).</li><li>Polyak, K., Haviv, I., Campbell, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-evolution+of+tumor+cells+and+their+microenvironment.">Co-evolution of tumor cells and their microenvironment.</a> Trends in Genetics. 25, 30-38 (2009).</li><li>Franco, O. E., Shaw, A. K., Strand, D. W., Hayward, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+associated+fibroblasts+in+cancer+pathogenesis.">Cancer associated fibroblasts in cancer pathogenesis.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 21, 33-39 (2010).</li><li>Kojima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+TGF-beta+and+stromal+cell-derived+factor-1+(SDF-1)+signaling+drives+the+evolution+of+tumor-promoting+mammary+stromal+myofibroblasts.">Autocrine TGF-beta and stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) signaling drives the evolution of tumor-promoting mammary stromal myofibroblasts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 20009-20014 (2010).</li><li>Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+present+in+invasive+human+breast+carcinomas+promote+tumor+growth+and+angiogenesis+through+elevated+SDF-1/CXCL12+secretion.">Stromal fibroblasts present in invasive human breast carcinomas promote tumor growth and angiogenesis through elevated SDF-1/CXCL12 secretion.</a> Cell. 121, 335-348 (2005).</li></ol>

لوحظ عدم وجود علامات محددة CAF ومستوى التجانس بين مقاهي تقديم توصيف هذا نوع من الخلايا يمثل تحديا في حد ذاته. كما تم في المختبر دراسة مقاهي يعوقه تعقيد إضافي على أن هذه الخلايا المتكاثرة senesce ووقف عند تربيتها لفترة طويلة. وكانت محاولة سابقة لدينا تخلد مباشرة مقاهي ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم المادة </td><td> نوع </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليق </td></tr><tr><td> DMEM </td><td></td><td> Invitrogen </td><td> 61965-026 </td><td></td></tr><tr><td> الجنين مصل العجل </td><td></td><td> GIBCO </td><td> 10270 </td><td></td></tr><tr><td> البنسلين ، الستربتومايسين </td><td></td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> كولاجيناز النوع الأول </td><td></td><td> سيغما </td><td> C0130 - 1G </td><td></td></tr><tr><td> هيالورونيداز </td><td></td><td> سيغما </td><td> H4272 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentin (V9) الأضداد </td><td></td><td> Novocastra مختبرات </td><td> NCL - L - VIM - V9 </td><td></td></tr><tr><td> Tenascin C (BC - 8) الأضداد </td><td></td><td></td><td></td><td> هدية من الدكتور <stroنانوغرام&gt; لوتشيانو Zardi </td></tr><tr><td> α - SMA - Cy3 (1A4) الأضداد </td><td></td><td> سيغما </td><td> C6198 </td><td></td></tr><tr><td> Prolyl - 4 - هيدروكسيلاز </td><td></td><td> داكو </td><td> M0877 </td><td></td></tr><tr><td> (5B5) الأضداد </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> الكولاجين الضد type1 1A </td><td></td><td> سيغما </td><td> HPA011795 </td><td></td></tr><tr><td> لعموم cytokeratin الأضداد </td><td></td><td> سيغما </td><td> C5992 </td><td></td></tr><tr><td> فبرونيكتين الأضداد </td><td></td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 610077 </td><td></td></tr><tr><td> S100A4/FSP-1 (الليفية ، بروتين معين - 1) الأضداد </td><td></td><td> داكو </td><td> A5114 </td><td></td></tr><tr><td> الليفية سطح البروتين (استنساخ 1B10) الأضداد </td><td></td><td> Abcam </td><td> ab11333 </td><td></td> &lt;/ TR&gt; <tr><td> MSCV - IRES - GFP بناء </td><td></td><td></td><td></td><td> الطلب إلى المؤلفين </td></tr><tr><td> pBabe - بورو بناء </td><td></td><td></td><td></td><td> شراء من Addgene </td></tr><tr><td> بوروميسين </td><td></td><td> سيغما </td><td> P8833 </td><td></td></tr><tr><td> دابي </td><td></td><td> سيغما </td><td> D9564 </td><td></td></tr><tr><td> 15 مل أنبوب المخروطية </td><td></td><td> كورنينج </td><td> 430766 </td><td></td></tr><tr><td> فأر عار </td><td></td><td> Taconic </td><td> NCRNU - F </td><td> الإناث NCR عارية </td></tr><tr><td> C3H/10T1/2 الخلايا </td><td></td><td> ATCC </td><td></td><td> CCL - 226 </td></tr></table>

experimental generation of carcinoma-associated fibroblasts (cafs) from human mammary fibroblasts

وسرطان الأنسجة معقدة تتألف من خلايا الأورام وحجرة غير سرطانية المشار إليها باسم &quot;سدى&quot;. ستروما يتكون من المصفوفة خارج الخلية (ECM) ومجموعة متنوعة من خلايا اللحمة المتوسطة ، بما في ذلك الخلايا الليفية ، myofibroblasts ، والخلايا البطانية ، pericytes والكريات البيض 1-3. ستروما المرتبطة الورم يستجيب للإشارات الصادرة عن نظير الصماوي كبيرة سرطان الخلايا المجاورة. أثناء عملية المرض ، وغالبا ما يصبح سدى يسكنها سرطان المرتبطة الليفية (مقاهي) بما في ذلك أعداد كبيرة من myofibroblasts. وقد سبق هذه الخلايا المستخرجة من أنواع عديدة ومختلفة من السرطانات البشرية لثقافتهم في المختبر. A subpopulation من مقاهي تكون مميزة من خلال التنظيم تصل بهم من الأكتين العضلات على نحو سلس α (α - SMA) 4،5 التعبير. هذه الخلايا هي السمة المميزة ل&#39;الليفية تنشيط&quot; التي تشترك مع خصائص مشابهة ج myofibroblastsولاحظ ommonly في أنسجة المصابين ومتليفة 6. يرتبط ارتباطا وثيقا وجود هذا فرعية CAF myofibroblastic إلى الدرجة العالية والأورام الخبيثة المرتبطة التكهنات الفقراء في المرضى. وقد أظهرت العديد من المختبرات ، بما في ذلك منطقتنا ، أن مقاهي ، عندما تم حقنها بخلايا سرطان العوز المناعي في الفئران ، وقادرة على تعزيز كبير tumourigenesis 70-10. مقاهي من مرضى سرطان المعدة ، ومع ذلك ، تخضع في كثير من الأحيان الشيخوخة خلال نشر الثقافة في الحد من اتساع نطاق استخدامها في جميع أنحاء التجريب المستمر. للتغلب على هذه الصعوبة ، قمنا بتطوير تقنية جديدة لتوليد تجريبيا خلد الإنسان الخلية الثديية CAF خطوط (إكسب - مقاهي) من الخلايا الليفية الثديية البشرية ، وذلك باستخدام نموذج ورم الثدي coimplantation طعم أجنبي. كانت أول immortali من أجل توليد إكسب ، مقاهي ، والأبوية الليفية الثديية الإنسان ، تم الحصول عليها من الحد من الأنسجة رأب الثدي ،الحوار الاقتصادي الاستراتيجي مع hTERT ، والوحيدات الحفاز للعميم الإنزيم تيلوميراز ، وهندستها لGFP التعبير عن الجينات المقاومة وبوروميسين. وكانت هذه الخلايا coimplanted مع MCF - 7 خلايا سرطان الثدي التعبير عن الجين الورمي رأس تنشيط (MCF - 7 - رأس الخلايا) في طعم أجنبي الماوس. بعد فترة حضانة المرض في الجسم الحي ، تم استخراج الخلايا الليفية حقن في البداية الثديية البشرية من xenografts الورم على أساس المقاومة بوروميسين بهم 11. لاحظنا أن الخلايا الليفية المقيمين الثديية البشرية ومتباينة ، واعتماد النمط الظاهري myofibroblastic والمكتسبة للورم تعزيز الخصائص أثناء تطور الورم. الأهم من ذلك ، هذه الخلايا ، على النحو المحدد إكسب ، مقاهي ، تحاكي عن كثب النمط الظاهري للورم تعزيز myofibroblastic من مقاهي سرطان الثدي المعزولة من تشريح من المرضى. لدينا ورم طعم أجنبي المستمدة إكسب - مقاهي بالتالي توفير نموذج فعال لدراسة بيولوجيا في مقاهي breas الإنسانسرطان ر. ويمكن أيضا وصف البروتوكول يجوز تمديدها لتوليد وتوصيف مختلف السكان CAF المستمدة من أنواع أخرى من السرطانات البشرية.

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts at JoVE.com

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

سرطان المرتبطة الليفية (مقاهي) غنية myofibroblasts الحالية داخل الورم سدى ، ولعب دورا رئيسيا في دفع عجلة تطور الورم. قمنا بتطوير نموذج xengraft الورم coimplantation تجريبيا لتوليد الخلايا الليفية من مقاهي الثديية البشرية. بروتوكول يصف كيفية تأسيس myofibroblasts CAF أن اكتساب القدرة على تعزيز tumourigenesis.

الجيل التجريبية للسرطان ، المرتبطين بها الخلايا الليفية (مقاهي) من الخلايا الليفية الثديية البشرية

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

زرع الخلايا الجذعية في في المختبر مقلد نقص التروية / إعادة إشباع الخلايا النموذجي

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

الداخلية الثديية البشرية الشريان (IMA) وزرع الدعامات: نموذج الإنسان لدراسة تطوير داخل الدعامة عودة التضيق

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

الجلد لكمة خزعة الثقافة ازدراع لاشتقاق الخلايا الليفية الإنسان الابتدائية

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

استخدام الخلايا الليفية الإنسان الأساسية لرصد نمط ظاهري الميتوكوندريا في مجال مرض باركنسون

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Experimental Human Pneumococcal Carriage

التجريبية النقل المكورات الرئوية الإنسان

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

عزل وتوصيف وظيفي من الإنسان البطيني العضلية من العينات الجراحية الطازجة

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

التنميط الجزيئي للالمكروية ورم الغازية في نموذج 3 الأبعاد للخلايا سرطان القولون والمستقيم و<em&gt; خارج الحي</em&gt; الخلايا الليفية

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

تقييم الرئة الانبثاث في ماوس الثديية ورم المجموعات بواسطة الكمي في الوقت الحقيقي PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

توصيف الأنسجة بعد طريقة جديدة تصنيفها فيما يتعلق الجلد الصغرى الطعوم الجيل

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...