Name: experimental generation of carcinoma-associated fibroblasts (cafs) from human mammary fibroblasts
Uploaded: 2011-10-25T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts at JoVE.com

אנו מודים לד&quot;ר רוברט א &#39;ויינברג (וייטהד מכון Biomedical Research, קיימברידג&#39;) תמיכה פיקוח נדיב של עבודה זו ומר Kieran Mellody (אוניברסיטת מנצ&#39;סטר, מנצ&#39;סטר) לעריכה ביקורתית של כתב היד הזה. פרויקט זה נתמך על ידי מחקר בבריטניה (CR-בריטניה) מספר מענק C147/A6058 (AO)

1. בידוד ראשוני fibroblasts אדם מתורבת החלב הרגיל הפרוצדורות לבידוד ראשוני fibroblasts תרבותי אנושי החלב הרגיל מתוארים באיור. 1A. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את החיץ תא דיסוציאציה, כפי שתואר קודם לכן 12: בינוני ה...

<ol>
	<li>Ronnov-Jessen, L., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+by+proxy:+can+the+microenvironment+be+both+the+cause+and+consequence?.">Breast cancer by proxy: can the microenvironment be both the cause and consequence?.</a> Trends Mol. Med. 15, 5-13 (2009).</li><li>Mueller, M. M., Fusenig, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Friends+or+foes+-+bipolar+effects+of+the+tumour+stroma+in+cancer.">Friends or foes - bipolar effects of the tumour stroma in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 4, 839-849 (2004).</li><li>Bhowmick, N. A., Neilson, E. G., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+in+cancer+initiation+and+progression.">Stromal fibroblasts in cancer initiation and progression.</a> Nature. 432, 332-337 (2004).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>De Wever, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tenascin-C+and+SF/HGF+produced+by+myofibroblasts+in+vitro+provide+convergent+pro-invasive+signals+to+human+colon+cancer+cells+through+RhoA+and+Rac.">Tenascin-C and SF/HGF produced by myofibroblasts in vitro provide convergent pro-invasive signals to human colon cancer cells through RhoA and Rac.</a> 18, 1016-1018 (2004).</li><li>Serini, G., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+myofibroblast+activity+and+phenotypic+modulation.">Mechanisms of myofibroblast activity and phenotypic modulation.</a> Exp. Cell. Res. 250, 273-283 (1999).</li><li>Shimoda, M., Mellody, K. T., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinoma-associated+fibroblasts+are+a+rate-limiting+determinant+for+tumour+progression.">Carcinoma-associated fibroblasts are a rate-limiting determinant for tumour progression.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 21, 19-25 (2010).</li><li>Pietras, K., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+interactions+with+the+tumor+stroma.">Hallmarks of cancer: interactions with the tumor stroma.</a> Exp. Cell. Res. 316, 1324-1331 (2010).</li><li>Polyak, K., Haviv, I., Campbell, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-evolution+of+tumor+cells+and+their+microenvironment.">Co-evolution of tumor cells and their microenvironment.</a> Trends in Genetics. 25, 30-38 (2009).</li><li>Franco, O. E., Shaw, A. K., Strand, D. W., Hayward, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+associated+fibroblasts+in+cancer+pathogenesis.">Cancer associated fibroblasts in cancer pathogenesis.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 21, 33-39 (2010).</li><li>Kojima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+TGF-beta+and+stromal+cell-derived+factor-1+(SDF-1)+signaling+drives+the+evolution+of+tumor-promoting+mammary+stromal+myofibroblasts.">Autocrine TGF-beta and stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) signaling drives the evolution of tumor-promoting mammary stromal myofibroblasts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 20009-20014 (2010).</li><li>Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+present+in+invasive+human+breast+carcinomas+promote+tumor+growth+and+angiogenesis+through+elevated+SDF-1/CXCL12+secretion.">Stromal fibroblasts present in invasive human breast carcinomas promote tumor growth and angiogenesis through elevated SDF-1/CXCL12 secretion.</a> Cell. 121, 335-348 (2005).</li></ol>

חוסר CAF הסמנים הספציפיים ורמת ההטרוגניות נצפתה בקרב CAFs להפוך את אפיון מסוג זה תא אתגר בפני עצמו. CAFs לימוד במבחנה יש גם התעכבה בשל סיבוך נוסף כי תאים אלו מזדקנים להפסיק מתרבים כאשר בתרבית במשך תקופה ארוכה. הניסיון הקודם שלנו ישירות להנציח CAFs ראשוני באמצעות לבנות re...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> חומר שם </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערה </td></tr><tr><td> DMEM </td><td></td><td> Invitrogen </td><td> 61965-026 </td><td></td></tr><tr><td> עגל עוברית בסרום </td><td></td><td> GIBCO </td><td> 10270 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין, סטרפטומיצין </td><td></td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase סוג אני </td><td></td><td> סיגמא </td><td> C0130-1G </td><td></td></tr><tr><td> hyaluronidase </td><td></td><td> סיגמא </td><td> H4272 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentin (V9) נוגדן </td><td></td><td> Novocastra מעבדות </td><td> NCL-L- VIM-V9 </td><td></td></tr><tr><td> Tenascin C (BC-8) נוגדן </td><td></td><td></td><td></td><td> מתנה ד&quot;ר <strong&gt; לוצ&#39;יאנו Zardi </td></tr><tr><td> α-SMA-Cy3 (1A4) נוגדן </td><td></td><td> סיגמא </td><td> C6198 </td><td></td></tr><tr><td> Prolyl-4-hydroxylase </td><td></td><td> Dako </td><td> M0877 </td><td></td></tr><tr><td> (5B5) נוגדן </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> קולגן Type1 נוגדן 1A </td><td></td><td> סיגמא </td><td> HPA011795 </td><td></td></tr><tr><td> פאן cytokeratin נוגדן </td><td></td><td> סיגמא </td><td> C5992 </td><td></td></tr><tr><td> פיברונקטין נוגדן </td><td></td><td> BD Biosciences </td><td> 610077 </td><td></td></tr><tr><td> S100A4/FSP-1 (פיברובלסטים, חלבון ספציפי-1) נוגדן </td><td></td><td> Dako </td><td> A5114 </td><td></td></tr><tr><td> משטח פיברובלסטים חלבון (שיבוט 1B10) נוגדן </td><td></td><td> Abcam </td><td> ab11333 </td><td></td> &lt;/ Tr&gt; <tr><td> MSCV-IRES-GFP לבנות </td><td></td><td></td><td></td><td> בקשה מחברי </td></tr><tr><td> pBabe-פורו לבנות </td><td></td><td></td><td></td><td> לרכוש מ Addgene </td></tr><tr><td> Puromycin </td><td></td><td> סיגמא </td><td> P8833 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td></td><td> סיגמא </td><td> D9564 </td><td></td></tr><tr><td> 15 מ&quot;ל צינור חרוטי </td><td></td><td> קורנינג </td><td> 430766 </td><td></td></tr><tr><td> עירום עכבר </td><td></td><td> Taconic </td><td> NCRNU-F </td><td> נקבה NCR בעירום </td></tr><tr><td> C3H/10T1/2 תאים </td><td></td><td> ATCC </td><td></td><td> CCL-226 </td></tr></table>

experimental generation of carcinoma-associated fibroblasts (cafs) from human mammary fibroblasts

קרצינומות הם רקמות מורכבות מורכבת של תאים neoplastic ו תא שאינם סרטניים המכונה &quot;stroma&quot;. Stroma מורכב תאי מטריקס (ECM) ועוד מגוון של תאים mesenchymal, כולל fibroblasts, myofibroblasts, לתאי אנדותל, pericytes ו לויקוציטים 1-3. Stroma הגידול הקשורים מגיב לאותות אוטוקריני משמעותי שפורסמו על ידי תאים קרצינומה השכנות. במהלך תהליך המחלה, stroma לעתים קרובות הופך מאוכלס קרצינומה הקשורים fibroblasts (CAFs) כולל מספר גדול של myofibroblasts. תאים אלה בעבר מופק הרבה סוגים שונים של קרצינומות האדם לתרבות במבחנה שלהם. Subpopulation של CAFs הוא להבחין באמצעות רגולציה-up שלהם אקטין α-שריר חלק (α-SMA) ביטוי 4,5. תאים אלה הם סימן ההיכר של &#39;fibroblasts מופעל&#39; החולקים מאפיינים דומים עם myofibroblasts גצפו ommonly ברקמות פצועים fibrotic 6. הנוכחות של משנה זו CAF myofibroblastic קשורה מאוד בדרגה גבוהה ו ממאירות הקשורות התחזיות עניים חולים. מעבדות רבות, כולל שלנו, הראו כי CAFs, כאשר הוזרקו תאים סרטן לעכברים immunodeficient, המסוגלים באופן משמעותי לקידום tumourigenesis 7-10. CAFs מוכן מחולים קרצינומה עם זאת, לעיתים קרובות עוברים הזדקנות במהלך התפשטות תרבות להגביל את השימוש בהם פשיטות ברחבי ניסויים מתמשך. כדי להתגבר על קושי זה, פיתחנו שיטה חדשנית כדי להפיק בניסוי הנציח קווי האדם החלב CAF תא (exp-CAFs) מ fibroblasts החלב האנושי, באמצעות השד coimplantation הגידול מודל xenograft. על מנת ליצור exp-CAFs, הורים fibroblasts החלב אדם, המתקבל הרקמה מאמופלסטית ירידה, היו הראשונים immortalised עם hTERT, למקטע הקטליטית של holoenzyme telomerase, ומתוכננים להביע GFP ו גן התנגדות puromycin. תאים אלה היו coimplanted עם MCF-7 אנושי קרצינומה של תאים בשד הבעת האונקוגן ras מופעל (MCF-7-ras תאים) לתוך xenograft עכבר. לאחר תקופת דגירה in vivo, fibroblasts המוזרק בתחילה החלב אדם חולצו מן xenografts הגידול על בסיס התנגדות puromycin שלהם 11. ראינו כי fibroblasts תושב החלב האדם מובחן, אימוץ פנוטיפ myofibroblastic ורכש הגידול בקידום נכסים במהלך התקדמות הגידול. חשוב לציין, התאים האלה, כהגדרתו exp-CAFs, מקרוב לחקות את הפנוטיפ הגידול קידום myofibroblastic של CAFs מבודד קרצינומות השד גזור מחולים. Xenograft הנגזרות הגידול שלנו exp-CAFs ולכן לספק מודל יעיל ללמוד את הביולוגיה של CAFs ב breas אדםלא קרצינומות. הפרוטוקול המתואר יכול להיות גם המורחבת להפקת ואפיון אוכלוסיות שונות CAF נגזר סוגים אחרים של קרצינומות האדם.

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts at JoVE.com

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

קרצינומה הקשורים fibroblasts (CAFs) עשיר myofibroblasts להציג בתוך stroma הגידול, לשחק תפקיד מרכזי נהיגה התקדמות הגידול. פיתחנו מודל הגידול coimplantation xengraft עבור ניסיוני להפקת CAFs מן fibroblasts החלב האנושי. הפרוטוקול מתאר כיצד להקים myofibroblasts CAF כי תרכוש את היכולת לקדם tumourigenesis.

הדור ניסויית של קרצינומה-Associated Fibroblasts (CAFs) מ Fibroblasts החלב אנוש

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

גזע השתלת תאים ב במבחנה דגם סימולציה איסכמיה / reperfusion

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

האדם הפנימי החלב (הר&quot;י) עורק השתלת סטנט: דגם האדם ללמוד פיתוח restenosis ב-סטנט

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

תרבות explant עור אגרוף ביופסיה לגזירה של fibroblasts אדם היסודי

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

השימוש בפיברובלסטים אנושיים ראשוניים לניטור פנוטיפים מיטוכונדריאלי בתחום מחלת פרקינסון

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Experimental Human Pneumococcal Carriage

תובלת pneumococcal אנוש ניסויית

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

בידוד ואפיון פונקציונלי של אדם חדרית שריר לב מדוגמאות כירורגי טריות

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

מולקולרי פרופיל של microenvironment הגידול פולש במודל 3 ממדים של תאי סרטן המעי הגס ו<em&gt; Ex vivo</em&gt; פיברובלסטים

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

<em&gt; Ex vivo</em&gt; דגם לחקר הורמוני פעולה בשד האדם

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

הערכה של ריאות גרורה במודלי גידול עכבר החלב על ידי בזמן אמת כמותי PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

אפיון רקמות לאחר שיטה חדשה חלוקה לעור מיקרו שתלי הדור

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...