Name: experimental generation of carcinoma-associated fibroblasts (cafs) from human mammary fibroblasts
Uploaded: 2011-10-25T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts at JoVE.com

Dr Robert A. Weinberg (Whitehead Biyomedikal Araştırma, Cambridge Enstitüsü) Biz, bu iş ve bu yazının kritik düzenleme için Sayın Kieran Mellody (Manchester Üniversitesi, Manchester) cömert destek ve denetim için teşekkür ederim. Bu proje Research UK (CR-UK) hibe sayısı C147/A6058 (AO) tarafından desteklenen

1. Primer kültürlerinde insan normal meme fibroblastlar izolasyonu Şekil izole primer kültürlerinde insan normal meme fibroblastlar için deneysel prosedürleri özetlenmiştir. 1A. <ol><li> Dulbecco&#39;nun Modifiye Kartal Kullanıcı Orta (DMEM) gibi daha önce 12 açıklanan hücre disosiasyon tampon,% 10 fetal buzağı serumu (FCS), penisilin-streptomisin (200 üniteler / ml), kollajenaz tip I (1 mg / ml) ve hiyalüronidaz (hazırlayın 125 ünite / ml). </li><li> Meme ...

<ol>
	<li>Ronnov-Jessen, L., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+by+proxy:+can+the+microenvironment+be+both+the+cause+and+consequence?.">Breast cancer by proxy: can the microenvironment be both the cause and consequence?.</a> Trends Mol. Med. 15, 5-13 (2009).</li><li>Mueller, M. M., Fusenig, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Friends+or+foes+-+bipolar+effects+of+the+tumour+stroma+in+cancer.">Friends or foes - bipolar effects of the tumour stroma in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 4, 839-849 (2004).</li><li>Bhowmick, N. A., Neilson, E. G., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+in+cancer+initiation+and+progression.">Stromal fibroblasts in cancer initiation and progression.</a> Nature. 432, 332-337 (2004).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>De Wever, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tenascin-C+and+SF/HGF+produced+by+myofibroblasts+in+vitro+provide+convergent+pro-invasive+signals+to+human+colon+cancer+cells+through+RhoA+and+Rac.">Tenascin-C and SF/HGF produced by myofibroblasts in vitro provide convergent pro-invasive signals to human colon cancer cells through RhoA and Rac.</a> 18, 1016-1018 (2004).</li><li>Serini, G., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+myofibroblast+activity+and+phenotypic+modulation.">Mechanisms of myofibroblast activity and phenotypic modulation.</a> Exp. Cell. Res. 250, 273-283 (1999).</li><li>Shimoda, M., Mellody, K. T., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinoma-associated+fibroblasts+are+a+rate-limiting+determinant+for+tumour+progression.">Carcinoma-associated fibroblasts are a rate-limiting determinant for tumour progression.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 21, 19-25 (2010).</li><li>Pietras, K., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+interactions+with+the+tumor+stroma.">Hallmarks of cancer: interactions with the tumor stroma.</a> Exp. Cell. Res. 316, 1324-1331 (2010).</li><li>Polyak, K., Haviv, I., Campbell, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-evolution+of+tumor+cells+and+their+microenvironment.">Co-evolution of tumor cells and their microenvironment.</a> Trends in Genetics. 25, 30-38 (2009).</li><li>Franco, O. E., Shaw, A. K., Strand, D. W., Hayward, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+associated+fibroblasts+in+cancer+pathogenesis.">Cancer associated fibroblasts in cancer pathogenesis.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 21, 33-39 (2010).</li><li>Kojima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+TGF-beta+and+stromal+cell-derived+factor-1+(SDF-1)+signaling+drives+the+evolution+of+tumor-promoting+mammary+stromal+myofibroblasts.">Autocrine TGF-beta and stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) signaling drives the evolution of tumor-promoting mammary stromal myofibroblasts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 20009-20014 (2010).</li><li>Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+present+in+invasive+human+breast+carcinomas+promote+tumor+growth+and+angiogenesis+through+elevated+SDF-1/CXCL12+secretion.">Stromal fibroblasts present in invasive human breast carcinomas promote tumor growth and angiogenesis through elevated SDF-1/CXCL12 secretion.</a> Cell. 121, 335-348 (2005).</li></ol>

CAFs bu hücre tipi kendi içinde bir meydan okuma karakterizasyonu hale arasından CAF-spesifik belirteçler ve heterojenlik eksikliği görülmektedir. In vitro olarak incelenmesi CAFs, ayrıca bu hücrelerin senesce ve uzun bir süre için kültüre prolifere ek bir komplikasyon engel olmuştur. Retroviral hTERT cDNA inşa kullanarak birincil CAFs doğrudan ölümsüzleştirmek için önceki girişimi başarısız oldu. Bu nedenle, bu hücrelerin tümör arttırıcı özellikleri daha fazla araştırmak içi...

<table border="1"><tr><td> Malzeme Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorum </td></tr><tr><td> DMEM </td><td></td><td> Invitrogen </td><td> 61965-026 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal buzağı serumu </td><td></td><td> Gibco </td><td> 10270 </td><td></td></tr><tr><td> Penisilin-streptomisin </td><td></td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz tip I </td><td></td><td> Sigma </td><td> C0130-1G </td><td></td></tr><tr><td> hiyalüronidaz </td><td></td><td> Sigma </td><td> H4272 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentin (V9) antikoru </td><td></td><td> Novocastra Laboratuvarları </td><td> NCL-L- Vim-V9 </td><td></td></tr><tr><td> Tenaskin C (BC-8) antikor </td><td></td><td></td><td></td><td> bir hediye Dr. <strong&gt; Luciano Zardi </td></tr><tr><td> α-SMA-Cy3 (1A4) antikoru </td><td></td><td> Sigma </td><td> C6198 </td><td></td></tr><tr><td> Prolil-4-hidroksilaz </td><td></td><td> Dako </td><td> M0877 </td><td></td></tr><tr><td> (5B5) antikoru </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kollajen tip1 1A antikor </td><td></td><td> Sigma </td><td> HPA011795 </td><td></td></tr><tr><td> Pan-sitokeratin antikor </td><td></td><td> Sigma </td><td> C5992 </td><td></td></tr><tr><td> Fibronektin antikor </td><td></td><td> BD Biosciences </td><td> 610077 </td><td></td></tr><tr><td> S100A4/FSP-1 (fibroblast- spesifik protein 1) antikoru </td><td></td><td> Dako </td><td> A5114 </td><td></td></tr><tr><td> Fibroblast yüzey proteini (Klon 1B10) antikoru </td><td></td><td> Abcam </td><td> ab11333 </td><td></td> &lt;/ Tr&gt; <tr><td> MSCV-IRES-GFP inşa </td><td></td><td></td><td></td><td> Yazarlar İsteği </td></tr><tr><td> pBabe-puro inşa </td><td></td><td></td><td></td><td> Satın alma Addgene gelen </td></tr><tr><td> Puromycin </td><td></td><td> Sigma </td><td> P8833 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td></td><td> Sigma </td><td> D9564 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml konik tüp </td><td></td><td> Corning </td><td> 430766 </td><td></td></tr><tr><td> Çıplak fare </td><td></td><td> Taconic </td><td> NCRNU-F </td><td> Bayan NCR Nude </td></tr><tr><td> C3H/10T1/2 hücreleri </td><td></td><td> ATCC </td><td></td><td> CCL-226 </td></tr></table>

experimental generation of carcinoma-associated fibroblasts (cafs) from human mammary fibroblasts

Karsinomlar neoplastik hücreler ve &#39;stroma&#39; olarak anılan bir kanser olmayan gözü oluşan karmaşık dokulardır. Stroma ekstrasellüler matriks (ECM) ve mezenkimal hücreler, fibroblastlar, miyofibroblastlar endotel hücreleri, perisitlerden ve 1-3 lökosit de dahil olmak üzere , çeşitli oluşur. Tümör ile ilişkili stroma komşu karsinom hücreleri tarafından yayımlanan önemli parakrin sinyaller duyarlı. Hastalık süreci boyunca, stroma genellikle miyofibroblastlar büyük numaraları da dahil olmak üzere, karsinom ile ilişkili fibroblastlar (CAFs) tarafından doldurulur olur. Bu hücreler in vitro kültürü için daha önce birçok farklı insan karsinomların tipleri çıkarılan edilmiştir. CAFs bir ICSI&#39;nin α-düz kas aktin up-regülasyon (α-SMA) ifade 4,5 ile ayırt edilebilir. Bu hücreler miyofibroblastlar c ile benzer özellikleri paylaşan bir işaretidir &#39;aktif fibroblastlar&#39;ommonly yaralı ve fibrotik dokuların 6 gözlenmiştir. Bu miyofibroblastik CAF alt kümesinin varlığı son derece yüksek dereceli maligniteler ile ilgili ve yoksul hastaların prognozları ile ilişkilidir. Birçok laboratuar, kendi de dahil olmak üzere CAFs karsinom hücreleri ile bağışık yetmezliği olan farelere enjekte tumourigenesis 7-10 önemli ölçüde teşvik yeteneğine sahip olduğunu göstermiştir. Ancak karsinom hastaları hazırlanan CAFs,, sık sık devam eden deney boyunca kullanım yaygınlığı sınırlayıcı kültürünün yayılma sırasında yaşlanması tabi. Bu zorluğun üstesinden gelmek için, biz coimplantation meme tümörü xenograft modeli kullanılarak, deneysel insan meme fibroblastlar ölümsüzleştirdi meme insan CAF hücre hatları (exp-CAFs) oluşturmak için yeni bir teknik geliştirdi. Azalma mammoplasty doku elde exp CAFs, ebeveyn insan meme fibroblastlar, üretmek için, ilk immortalihTERT, telomeraz holoenzyme katalitik subunit ve ifade GFP ve bir puromycin direnç geninin için tasarlanmış sed. Bu hücreler aktive ras onkogen (MCF-7-ras hücreleri) bir fare xenograft ifade MCF-7 insan meme kanseri hücreleri ile coimplanted. In vivo bir inkübasyon döneminden sonra, başlangıçta enjekte insan meme fibroblastlar, onların puromycin direnci 11 temelinde tümör xenografts çıkarıldı . Biz bir miyofibroblastik fenotip benimseyerek, yerleşik insan meme fibroblastlar farklılaşmış olduğu görülmektedir ve tümör progresyonu sırasında tümör destekleyici özellikleri satın aldı. Önemlisi, bu hücrelerin, exp-CAFs olarak tanımlanan yakından hastaların disseke meme karsinomları izole CAFs tümör teşvik miyofibroblastik fenotip taklit. Bu nedenle tümör xenograft türetilen exp CAFs, insan breas CAFs biyolojisini çalışmak için etkili bir modelt karsinomlar. Açıklanan protokol aynı zamanda, insan karsinomları diğer türleri türetilen çeşitli CAF popülasyonları ve tanımlamak için uzatılabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts at JoVE.com

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Karsinom ile ilişkili fibroblastlar (CAFs) tümör stroma içinde mevcut miyofibroblastlar zengin, tümör progresyonu sürüş önemli bir rol oynamaktadır. Biz deneysel insan meme fibroblastlar CAFs üretmek için bir coimplantation tümör xengraft modeli geliştirdi. Protokolü tumourigenesis teşvik etmek için bir yeteneği kazandırmak CAF miyofibroblastlar kurmak anlatılmaktadır.

İnsan Meme Fibroblastlar Karsinom İlişkili Fibroblastlar Deneysel Nesil (CAFs)

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Bir Kök Hücre Nakli In vitro Simüle İskemi / Reperfüzyon Modeli

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

İnsan internal meme arter (İMA) Transplantasyon ve Stent: In-Stent Restenozis Geliştirme Eğitim Bir İnsan Modeli

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

İlköğretim İnsan Fibroblastlar türetilmesi için Cilt Punch Biyopsi Eksplantın Kültür

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

Parkinson Hastalığı Alanında Mitokondriyal Fenotiplerinin İzleme İlköğretim İnsan Fibroblast Kullanımı

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Experimental Human Pneumococcal Carriage

Deneysel İnsan Pnömokok Taşıma

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Taze Cerrahi Örneklerden İzolasyon ve İnsan Ventriküler kardiyomiyositlerin Fonksiyonel Karakterizasyonu

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Moleküler Kolorektal Kanser Hücrelerinin bir 3-Boyutlu Modeli İnvaziv tümör mikro Profili ve<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fibroblastlar

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model İnsan Meme Hormon Eylem Eğitim için

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Kantitatif gerçek zamanlı PCR ile fare meme tümör modellerinde akciğer metastazı Değerlendirilmesi

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

Cilt Mikro-Greftler Üretimi için Yeni Bir Ayrıştırma Yöntemi sonra doku karakterizasyonu

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...