Name: application of a mouse ligated peyer&#x2019;s patch intestinal loop assay to evaluate bacterial uptake by m cells
Uploaded: 2011-12-17T14:00:00
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저자는이 기술을 개발하기위한 모든 EIB 회원 감사드립니다. 이 연구는 우선 지역 &quot;막 트래픽&quot;(호) 및 &quot;감염성 현상 매트릭스&quot;(KH), 젊은 과학자 (SF와 KH) 및 학술 연구 (호에 대한 과학 연구 보조금에 의해 부분적으로 지원되었다 혁신 분야 교육부, 문화, 스포츠, 과학 및 일본의 기술에서 &quot;세포내 물류&quot;(호)에), 그리고 과학 연구.

1. 세균성 세포의 준비 <ol><li> 줄무늬의 글리세롤는 LB에 (예 : GFP 표현 S. Typhimurium)에 형광 박테리아를 꽉찬 100 μg / 암피실린의 ML이 포함된 한천 플레이트. </li><li> 새로운 LB 매체 2 ML에서 하룻밤 LB 한천 배지에서 문화는 하나의 식민지. </li><li> 600 NM에서 1.0의 광학 밀도에 도달할 때까지 새로운 LB 매체와 부화 4.5 ML에 세균성 문화의 0.5 ML을 추가합니다. </li><li> 원심 분리하여 세포를 수확 세?...

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	<li>Fagarasan, S., Honjo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+IgA+synthesis:+regulation+of+front-line+body+defences.">Intestinal IgA synthesis: regulation of front-line body defences.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 63-72 (2003).</li><li>Hapfelmeier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+microbial+colonization+of+germ-free+mice+reveals+the+dynamics+of+IgA+immune+responses.">Reversible microbial colonization of germ-free mice reveals the dynamics of IgA immune responses.</a> Science. 328, 1705-1709 (2010).</li><li>Owen, R. L., Jones, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+specialization+within+human+Peyer's+patches:+an+ultrastructural+study+of+intestinal+lymphoid+follicles.">Epithelial cell specialization within human Peyer's patches: an ultrastructural study of intestinal lymphoid follicles.</a> Gastroenterology. 66, 189-203 (1974).</li><li>Neutra, M. R., Mantis, N. J., Kraehenbuhl, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaboration+of+epithelial+cells+with+organized+mucosal+lymphoid+tissues.">Collaboration of epithelial cells with organized mucosal lymphoid tissues.</a> Nat. Immunol. 2, 1004-1009 (2001).</li><li>Hase, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+through+glycoprotein+2+of+FimH(+)+bacteria+by+M+cells+initiates+mucosal+immune+response.">Uptake through glycoprotein 2 of FimH(+) bacteria by M cells initiates mucosal immune response.</a> Nature. 462, 226-230 (2009).</li><li>Punyashthiti, K., Finkelstein, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteropathogenicity+of+Escherichia+coli.+I.+Evaluation+of+mouse+intestinal+loops.">Enteropathogenicity of Escherichia coli. I. Evaluation of mouse intestinal loops.</a> Infect. Immun. 4, 473-478 (1971).</li><li>Owen, R. L., Pierce, N. F., Apple, R. T., Cray, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M+cell+transport+of+Vibrio+cholerae+from+the+intestinal+lumen+into+Peyer's+patches:+a+mechanism+for+antigen+sampling+and+for+microbial+transepithelial+migration.">M cell transport of Vibrio cholerae from the intestinal lumen into Peyer's patches: a mechanism for antigen sampling and for microbial transepithelial migration.</a> J. Infect. Dis. 153, 1108-1118 (1986).</li><li>Owen, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M+cells--entryways+of+opportunity+for+enteropathogens.">M cells--entryways of opportunity for enteropathogens.</a> J. Exp. Med. 180, 7-9 (1994).</li><li>Clark, M. A., Hirst, B. H., Jepson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-cell+surface+beta1+integrin+expression+and+invasin-mediated+targeting+of+Yersinia+pseudotuberculosis+to+mouse+Peyer's+patch+M+cells.">M-cell surface beta1 integrin expression and invasin-mediated targeting of Yersinia pseudotuberculosis to mouse Peyer's patch M cells.</a> Infect. Immun. 66, 1237-1243 (1998).</li><li>Jensen, V. B., Harty, J. T., Jones, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+the+invasive+pathogens+Salmonella+typhimurium,+Listeria+monocytogenes,+and+Shigella+flexneri+with+M+cells+and+murine+Peyer's+patches.">Interactions of the invasive pathogens Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, and Shigella flexneri with M cells and murine Peyer's patches.</a> Infect. Immun. 66, 3758-3766 (1998).</li><li>Nagai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Peyer's+patches+in+the+induction+of+Helicobacter+pylori-induced+gastritis.">Role of Peyer's patches in the induction of Helicobacter pylori-induced gastritis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 8971-8976 (2007).</li></ol>

<html> 세균 현탁액과 출혈도 잡았 Peyer의 패치의 부화 시간은 M 세포에 박테리아 정관을 준수하기 위해 1 시간을 위해 일반적이다. 4 시간 보육의 경우, 박테리아가 자주 Peyer의 패치의 T 세포 영역에 감지됩니다. 증발 isoflurane 흡입 마취는 마우스가 안정적으로 지킬 수로서, 세균 현탁액과 출혈도 잡았 Peyer의 패치의 배양 시간은 Peyer의 패치에 T - 세포 영역으로 이동 박테리아를 관찰 확장 가능합니다...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> LB 한천 암피실린 - 100 </td><td> 시그마 </td><td> L5667 </td><td></td></tr><tr><td> Cy3 모노 반응 염색약 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> PA23001 </td><td></td></tr><tr><td> 알렉사 형석 350 카르복실산, succinimidyl 에스테르 </td><td> Invitrogen </td><td> A10168 </td><td></td></tr><tr><td> 흡입 마취 기구 </td><td> 시나 제작소 </td><td> SN - 487 </td><td></td></tr><tr><td> 고정 및 Permeabilization 용액 </td><td> BD </td><td> 554,722 </td><td></td></tr><tr><td> 안티 마우스 당단백질이 항독소 </td><td> MBL </td><td>D278 - 3 </td><td> 200 배 희석 (5μg/ml) </td></tr><tr><td> 염소 방지 쥐 IgG, F (AB &#39;) 2 조각 구체적인 </td><td> 잭슨 ImmunoResearch </td><td> 112-505-006 </td><td> 200 배 희석 (20μg/ml) </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 633 Phalloidin </td><td> 분자 프로브 </td><td> A22284 </td><td> 50 배 희석 </td></tr><tr><td> 공촛점 레이저 현미경 스캐닝 </td><td> Leica 마이크로 시스템즈 </td><td> DMIRE2 </td><td></td></tr><tr><td> DeltaVision 복구 deconvolution 현미경 </td><td> 응용 정밀 </td><td> DeltaVision 코어 </td><td></td></tr></tbody></table>

application of a mouse ligated peyer&#x2019;s patch intestinal loop assay to evaluate bacterial uptake by m cells

우리의 창자의 안쪽은 공생 박테리아의 거대한 숫자 살고 있습니다. 위장관의 점막 표면은 지속적으로 그들과 때때로 병원균에 노출됩니다. 인내심을 관련 림프 조직 (갈트)는 이러한 미생물 1, 2에 대한 점막 면역 반응의 유도에 중요한 역할을한다. 점막 면역 반응을 시작하려면, 점막 항원이 같은 Peyer의 패치로 구성 림프 모공에 상피 장벽을 가로질러 내장 루멘에서 이송해야합니다. 이 항원 transcytosis는 전문 상피 세포 M 3, 4에 의해 중재됩니다. M 세포가 적극적으로 macromolecules과 미생물을 phagocytose 비정형 상피 세포 있습니다. 돌기 세포 (DCS)와 macrophages, 저하에 대한 lysosomes에 대상 항원과는 달리, M 세포는 주로 내면 항원을 transcytose. M 세포를 통해이 활발한 macromolecular의 transcytosis는 기본 구성 림프 모공에 항원을 제공합니다D는 항원에 특정한 점막 면역 반응을 시작을위한 필수적인 것으로 생각됩니다. 그러나, M 세포하여 항원 이해를 촉진 분자 메커니즘은 대부분 알 수 있습니다. 우리는 이전에 특별히 enterocytes 간의 M 세포의 꼭대기의 플라즈마 막에 표현 당단백질 2 (Gp2)는, 대장균과 살모넬라균 enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium을 포함하여 공생과 enterobacteria 병원성의 하위 집합에 대한 transcytotic 수용체로 역할을보고있다 ), FimH, 내가 세균성 외부 멤브레인 5 pili 유형의 구성 요소를 인식하여. 여기, 우리는 M 세포에 의해 박테리아 이해를 평가하기 위해 마우스 Peyer의 패치 장 루프 분석의 응용 프로그램에 대한 방법을 제시한다. 이 방법은 이전에 6, 7 장의 설명 마우스 루프 분석의 향상된 버전입니다. 개선된 점은 다음과 같습니다 : 1. Isoflurane은 마취제로 사용되었다. 2. 약 1cm 출혈도 잡았 장 루프 includING Peyer의 패치를 설치했습니다. 3. M 세포에 의해 촬영 박테리아는 찬란 형광 라벨 시약이나 녹색 형광 단백질 (GFP) 같은 형광 단백질 overexpressing로 분류되었습니다. 4. Peyer의 패치를 덮고 뿌리 - 관련 상피의 M 세포는 안티 Gp2 항체와 전체 마운트 immunostainig에 의해 발견되었다. 5. M 세포에 의해 형광 박테리아 transcytosis은 공촛점 현미경 분석에 의해 관찰되었다. 마우스 Peyer의 패치 장 루프 분석은 답변을 공급 수 어떤 종류의 공생 또는 M 세포에 의해 transcytosed 병원성 세균 및 M 세포를 통해 점막 면역 체계를 자극하는 방법의 분자 메커니즘을 이해로 우리를 이끌 수 있습니다.

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Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Peyer의 패치를 다루는 전문 뿌리 - 관련 상피의 M 세포는 창자 - 관련 림프 조직에서 점막 immunosurveillance을위한 중요한 역할을한다. 여기 우리는 M 세포에 의해 세균 transcytosis에 대한 평가 방법을 설명<em&gt; 생체내에</em&gt;. 이 방법은 면역 시스템에 M - 세포 기능을 이해하는 방법을 제공합니다.

마우스의 응용은 M 세포에 의해 박테리아 이해를 평가하는 Peyer의 패치 장 루프 분석 출혈도 잡았

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

마우스의 이미지 세균 감염에 루시페라제를 사용하여

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

연구

면역학 및 감염병학

Invasion of Human Cells by a Bacterial Pathogen

세균성 병원체에 의해 인간의 세포의 침략

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be ...

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포유류의 상피 세포에 박테리아의 접착 시험 관내 분석

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

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Type VI secretion systems (T6SSs) are molecular  nanomachines allowing Gram-negative bacteria to transport and inject proteins  into a wide variety of ...

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Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Application of Long-term cultured Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

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The process of endospore germination in Clostridium difficile, and other Clostridia, increasingly is being found to differ from the model spore-forming ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

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A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

상처 치유 분석 결과 셀 마이그레이션 평가 하는 새로운 체 외에

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...