Name: application of a mouse ligated peyer&#x2019;s patch intestinal loop assay to evaluate bacterial uptake by m cells
Uploaded: 2011-12-17T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of a Mouse Ligated PeyerÃ¢â‚¬â„¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить всех членов ЕИБ для развития этой техники. Работа выполнена при частичной поддержке гранта-в-помощь для научных исследований в приоритетных областях &quot;Мембрана Трафик&quot; (HO), и &quot;Матрица инфекционных явлений&quot; (KH), молодых ученых (С. Ф. и KH), а также научных исследований (HO ), а также научных исследований в инновационных областях &quot;Внутриклеточное логистика&quot; (HO), от Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии.

1. Подготовка бактериальных клеток <ol><li> Подряд глицерина заполненный люминесцентные бактерии (например, GFP выражения S. Typhimurium) на LB агар пластины, содержащей 100 мкг / мл ампициллина. </li><li> Культура одну колонию из LB агар на ночь в 2 мл новая среда LB. </li><li> Добавить 0,5 мл бактериальной к?...

<ol>
	<li>Fagarasan, S., Honjo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+IgA+synthesis:+regulation+of+front-line+body+defences.">Intestinal IgA synthesis: regulation of front-line body defences.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 63-72 (2003).</li><li>Hapfelmeier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+microbial+colonization+of+germ-free+mice+reveals+the+dynamics+of+IgA+immune+responses.">Reversible microbial colonization of germ-free mice reveals the dynamics of IgA immune responses.</a> Science. 328, 1705-1709 (2010).</li><li>Owen, R. L., Jones, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+specialization+within+human+Peyer's+patches:+an+ultrastructural+study+of+intestinal+lymphoid+follicles.">Epithelial cell specialization within human Peyer's patches: an ultrastructural study of intestinal lymphoid follicles.</a> Gastroenterology. 66, 189-203 (1974).</li><li>Neutra, M. R., Mantis, N. J., Kraehenbuhl, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaboration+of+epithelial+cells+with+organized+mucosal+lymphoid+tissues.">Collaboration of epithelial cells with organized mucosal lymphoid tissues.</a> Nat. Immunol. 2, 1004-1009 (2001).</li><li>Hase, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+through+glycoprotein+2+of+FimH(+)+bacteria+by+M+cells+initiates+mucosal+immune+response.">Uptake through glycoprotein 2 of FimH(+) bacteria by M cells initiates mucosal immune response.</a> Nature. 462, 226-230 (2009).</li><li>Punyashthiti, K., Finkelstein, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteropathogenicity+of+Escherichia+coli.+I.+Evaluation+of+mouse+intestinal+loops.">Enteropathogenicity of Escherichia coli. I. Evaluation of mouse intestinal loops.</a> Infect. Immun. 4, 473-478 (1971).</li><li>Owen, R. L., Pierce, N. F., Apple, R. T., Cray, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M+cell+transport+of+Vibrio+cholerae+from+the+intestinal+lumen+into+Peyer's+patches:+a+mechanism+for+antigen+sampling+and+for+microbial+transepithelial+migration.">M cell transport of Vibrio cholerae from the intestinal lumen into Peyer's patches: a mechanism for antigen sampling and for microbial transepithelial migration.</a> J. Infect. Dis. 153, 1108-1118 (1986).</li><li>Owen, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M+cells--entryways+of+opportunity+for+enteropathogens.">M cells--entryways of opportunity for enteropathogens.</a> J. Exp. Med. 180, 7-9 (1994).</li><li>Clark, M. A., Hirst, B. H., Jepson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-cell+surface+beta1+integrin+expression+and+invasin-mediated+targeting+of+Yersinia+pseudotuberculosis+to+mouse+Peyer's+patch+M+cells.">M-cell surface beta1 integrin expression and invasin-mediated targeting of Yersinia pseudotuberculosis to mouse Peyer's patch M cells.</a> Infect. Immun. 66, 1237-1243 (1998).</li><li>Jensen, V. B., Harty, J. T., Jones, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+the+invasive+pathogens+Salmonella+typhimurium,+Listeria+monocytogenes,+and+Shigella+flexneri+with+M+cells+and+murine+Peyer's+patches.">Interactions of the invasive pathogens Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, and Shigella flexneri with M cells and murine Peyer's patches.</a> Infect. Immun. 66, 3758-3766 (1998).</li><li>Nagai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Peyer's+patches+in+the+induction+of+Helicobacter+pylori-induced+gastritis.">Role of Peyer's patches in the induction of Helicobacter pylori-induced gastritis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 8971-8976 (2007).</li></ol>

<html> Инкубационный период патча лигируют Пейера с бактериальной суспензии, как правило, в течение 1 часа наблюдать бактериальный включения в клетках M. В случае 4 часа инкубации, бактерии часто обнаруживаются в зоне Т-клеток патчей Пейера. Как испаряются изофлуран анестезии ингаляционны?...

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер по каталогу </th><th> Комментарии (необязательно) </th></tr><tr><td> LB-агар Ампициллин 100 </td><td> SIGMA </td><td> L5667 </td><td></td></tr><tr><td> Cy3 моно-реактивного Dye обновления </td><td> GE Healthcare </td><td> PA23001 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 350 карбоновые кислоты, сукцинимидил эфир </td><td> Invitrogen </td><td> A10168 </td><td></td></tr><tr><td> Ингаляционный наркоз аппарат </td><td> Синано Seisakusho </td><td> SN-487 </td><td></td></tr><tr><td> Фиксация и Пермеабилизации Решение </td><td> BD </td><td> 554722 </td><td></td></tr><tr><td> Антивирус мыши Гликопротеина 2 антитело </td><td> MBL </td><td>D278-3 </td><td> 200-кратного разбавления (5μg/ml) </td></tr><tr><td> Коза Anti-IgG крысы, Р (аЬ &#39;) 2-фрагмент конкретный </td><td> Джексон ImmunoResearch </td><td> 112-505-006 </td><td> 200-кратного разбавления (20μg/ml) </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 633 Фаллоидином </td><td> Молекулярные зонды </td><td> A22284 </td><td> 50-кратное разбавление </td></tr><tr><td> Конфокальной лазерной растровый микроскоп </td><td> Leica Microsystems </td><td> DMIRE2 </td><td></td></tr><tr><td> DeltaVision Восстановление деконволюция микроскоп </td><td> Прикладная Precision </td><td> Основные DeltaVision </td><td></td></tr></tbody></table>

application of a mouse ligated peyer&#x2019;s patch intestinal loop assay to evaluate bacterial uptake by m cells

Внутри нашего кишечнике обитает огромное количество синантропных бактерий. Поверхности слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта постоянно подвергаются им, а иногда и к патогенам. Кишкой лимфоидной ткани (GALT) играют ключевую роль для индукции иммунного ответа слизистой оболочки к этим микробам 1, 2. Чтобы инициировать иммунный ответ слизистой оболочки, слизистой оболочки антигены должны быть перевезены из просвета кишечника через эпителиальный барьер в организованных лимфоидных фолликулов, такие как патчи Пейера. Этот антиген трансцитоза опосредовано специализированные эпителиальные клетки M 3, 4. М клетки атипичных эпителиальных клеток, которые активно фагоцитируют макромолекул и микробов. В отличие от дендритные клетки (ДК) и макрофаги, которые ориентированы на антигены в лизосомы для деградации, М клетки главным образом transcytose внутренним антигенам. Это энергичные трансцитоза макромолекулярных через ячейки M обеспечивает антиген к основной организованной лимфоидных фолликуловг, как полагают, необходимо для начала антиген-специфического иммунного ответа слизистой оболочки. Однако молекулярные механизмы, использующие этот антиген поглощение клетками М известно мало. Ранее мы уже сообщали, что гликопротеин 2 (GP2), особенно выраженные на апикальной мембране плазмы М клетки среди энтероцитов, служит рецептором для transcytotic подмножество синантропных и патогенных энтеробактерий, в том числе кишечной палочки и сальмонеллы enterica серовар Typhimurium (S. Typhimurium ), признав FimH, компонента типа я пили на бактериальные наружной мембраны 5. Здесь мы представляем метод применения патча мыши Пейера кишечного анализа цикла для оценки бактериальной поглощение клетками M. Этот метод является улучшенной версией мыши кишечная петля анализа описанных выше 6, 7. Улучшение точек таковы: 1. Изофлюрана был использован в качестве анестетика. 2. Примерно в 1 см лигируют кишечного включая циклПатч ING Пейера была создана. 3. Бактерии рассмотрен клетки М были помечены флуоресцентно флуоресценции реагента маркировки или гиперэкспрессией флуоресцентного белка, такие как зеленый флуоресцентный белок (GFP). 4. М клеток фолликула связанных эпителия покрытие патч Пейера были обнаружены целые монтажа immunostainig с анти антитела GP2. 5. Флуоресцентные бактериальных трансцитоза клетками М наблюдались с помощью конфокальной микроскопического анализа. Патч мыши Пейера кишечного анализа цикла может дать ответ какую комменсальной или патогенных бактерий трансцитоз клетками М, и может привести нам понять молекулярный механизм, как стимулировать иммунную систему слизистой оболочки через ячейки M.

Watch this Scientific Journal Video about Application of a Mouse Ligated PeyerÃ¢â‚¬â„¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells at JoVE.com

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

М клеток в специализированные фолликула связанных эпителия покрытие Пейеровы бляшки играют важную роль для слизистой иммунологического в кишечнике-лимфоидной ткани. Здесь мы описали метод оценки бактериального трансцитоза клетками М<em&gt; В естественных условиях</em&gt;. Этот метод предоставляет способ понять М-клеток в иммунной системе.

Применение Мышь лигируют Патч Пейера Кишечные Пробирной Loop для оценки бактериальной поглощение М клетки

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Использование люциферазы в Изображение Бактериальные инфекции у мышей

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Invasion of Human Cells by a Bacterial Pathogen

Вторжение клеток человека от бактериальных патогенов

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be ...

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

In Vitro Пробирной бактериальной адгезии на эпителиальных клетках млекопитающих

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

A Visual Assay to Monitor T6SS-mediated Bacterial Competition

Визуальный анализов для мониторинга T6SS-опосредованной Бактериальные конкурса

Type VI secretion systems (T6SSs) are molecular  nanomachines allowing Gram-negative bacteria to transport and inject proteins  into a wide variety of ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Mesenteric лимфатический проток канюлированного крысиной модели: Приложение к оценке кишечных лимфатической транспорта лекарства

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Application of Long-term cultured Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Применение Долгосрочный культивируют Интерферон-γ фермент-связанного Immunospot анализе для оценки эффекторных и памяти T-клеточные ответы у крупного рогатого скота

Effector and memory T cells are generated through developmental programing of na&#239;ve cells following antigen recognition. If the infection is ...

Detecting Cortex Fragments During Bacterial Spore Germination

Обнаружение Cortex Фрагменты Во время бактериальный прорастание спор

The process of endospore germination in Clostridium difficile, and other Clostridia, increasingly is being found to differ from the model spore-forming ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

Использование моноцитов монослоя анализе для оценки Fcγ рецептор-опосредованного Фагоцитоз

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

Иммунофлуоресцентный анализ образования гранулята после бактериальной выделения клеток млекопитающих

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

Роман в Vitro раны исцеления Assay для оценки миграции клеток

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...