Name: specimen preparation, imaging, and analysis protocols for knife-edge scanning microscopy
Uploaded: 2011-12-09T13:00:00
Duration: 10 min 25 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Specimen Preparation, Imaging, and Analysis Protocols for Knife-edge Scanning Microscopy at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا المشروع من قبل المعاهد الوطنية للصحة / NINDS (# 1R01 - NS54252) ، جبهة الخلاص الوطني (# 0905041 ، 0079874 #) ، وبرنامج التكنولوجيا المتقدمة في تكساس (ATP - # 000512-0146 - 2001 ، # ATP - 000512 - 0261 - 2001) ، تكساس A &amp; M مؤسسة أبحاث ، قسم علوم الكمبيوتر والهندسة في جامعة تكساس A &amp; M ، و3Scan. نود أن نشكر برنار ميسا (مايكرو ستار تكنولوجيز) للتشاور والدعم الفني لأجهزة KESM. وقد تم أجزاء كبيرة من تصميم وتنفيذ KESM بواسطة بروس ماك كورميك ، الذي توفي في عام 2007.

1. تحضير العينة : غولجي كوكس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هذا البروتوكول تتابع عن كثب بروتوكول Mayerich وآخرون. 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الماوس C57BL/6J هو تخدير عميق باستخدام التخدير isoflurane نشوق ومقطوعة الرأس ثم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة المخ وضعت في حل تثبيت غولجي كوكس (1 كرومات البوتاسيوم ٪ ، ثاني كرومات البوتاسيوم 1 ٪ ، وكلوريد الزئبق 1 ٪ في الماء منزوع الأيونات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويترك الدماغ في حل غولجي كوكس في الظلام ، في درجة حرارة الغرفة ، لمدة 10 إلى 16 أسبوعا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتشطف في ماء منزوع الأيونات أدمغة بين عشية وضحاها في الظلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غير منغمسين في الدماغ تشطف 5 ٪ محلول هيدروكسيد الأمونيوم في الماء منزوع الأيونات لمدة 7 إلى 10 أيام في الظلام في درجة حرارة الغرفة. وكان هذه المرة إعداد مطولة لضمان تسلل الدماغ بأكمله ، بحيث يعجل سوداء كانت لديه فرصة لتشكيل تماما في الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم شطف الدماغ مرة أخرى في الماء منزوع الأيونات في درجة حرارة الغرفة لمدة 4 ساعات و t50 ٪ و 70 ٪ في الثلاجة (4 درجات مئوية) ، و 85 ٪ ، 95 ٪ (3 تغييرات) ، و 100 ٪ (4-5 تغييرات) في درجة حرارة الغرفة : المجففة من خلال سلسلة متدرجة من الكحول الإيثيلي الدجاجة. ويترك الدماغ في كل حل لمدة 24 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم وضع الدماغ المجففة في الاسيتون (3-4 التغييرات ، كل ليوم واحد) ، يليه خليط araldite - الأسيتون مع araldite إلى الأسيتون نسبة 1:2 ، 1:1 ، 2:1 ، وأخيرا في araldite 100 ٪ (3 تغييرات ، في كل مرة بين عشية وضحاها) ، في الثلاجة (4 درجات مئوية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخيرا ، تم تضمين المعالجة في الدماغ araldite 100 ٪ وتسخينها إلى 60 درجة مئوية لمدة 3 أيام (راجع بروتوكول التضمين في ابوت وسوتيلو 2). إذا هي جزء لا يتجزأ العينات في وايت LR ثم يتم نقل العينات من الحل الأخير الإيثانول بنسبة 100 ٪ خلال ثلاثة تغييرات من حل الابيض LR التي يتم الاحتفاظ بها في كل الثلاجة بين عشية وضحاها ، وهو الإجراء القياسي قبل البلمرة. تتم ثلاثة تغييرات لضمان تسلل الكامل. العينة هو رالدجاجة تحويلها إلى الأبيض LR الطازجة التي يتم بلمرة في حاوية مغلقة عند 60 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، وهو المبلغ المطلوب من الوقت ودرجة الحرارة لالبلمرة المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التين. 1 يظهر الدماغ غولجي كوكس ملطخة مضمن في Araldite. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم هي التي شنت كتلة العينة شفي على المعدن الدائري باستخدام عينة الايبوكسي ، وعلى جانبي كتلة قلص عند الضرورة (انظر الشكل 2). </li></ol> 2. تحضير العينة : نيسل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفأر هو الخدر العميق باستخدام الكيتامين وزيلازين (1.7 ملغ الكيتامين / 0.26 ملغ زيلازين بنسبة 20 جرام من وزن الجسم) ثم حقن intraperitoneally perfused transcardially باستخدام 50 مل من درجة حرارة الغرفة الفوسفات مخزنة المالحة (7.4 درجة الحموضة) ، يليه 250 مل من الغرفة درجة الحرارة 10 ٪ مخزنة محايدة الفورمالين (7.4 درجة الحموضة). وأخيرا مع 3.0 سم مكعب من الحبر الهند مخفف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كامل الجسم مع نضح المياه المالحة وتثبيتي ضروري لمسح الدم من القلب والأوعية الدموية والنظام لإصلاح منظمة الشفافية الدولية<html> ssues. نضح مع الحبر الهند أمر ضروري لملء تماما لنظام الأوعية الدموية القلبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدماغ الناتجة المجففة ثم من خلال سلسلة من الكحول الإيثيلي متدرج (25 ٪ -100 ٪) وجزءا لا يتجزأ من البلاستيك ثم في araldite بعد بروتوكول 1،8-1،9 في أعلاه. إذا LR الأبيض المتوسط ​​التضمين ثم تبعتها في ذلك البروتوكول و1.10 أعلاه. </li></ol> 4. تحضير العينة : الأنواع عامة وهيئات عامة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحالة عامة ، يمكن القيام تثبيت إما مع 10 ٪ محايد مخزنة بارافورمالدهيد الفورمالين أو 4 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أحجام صغيرة للنسيج ، فمن المستحسن نشر بدلا من نضح لتثبيت وتلوين. في حالة الكائنات الحية الصغيرة أو الأجهزة ، يمكن أن يتم تلطيخ أيضا أثناء عملية الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بروتوكول التضمين هو نفس أعلاه ، بالرغم من أنه يمكن خفض مرات لتسلل حل للأجهزة أو الكائنات الحية التي هي أصغر بكثير من دماغ الفأر كله. </li></ol>jove_title &quot;KESM&gt; 5. الإعداد والتصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف المضخة ، بدوره على خشبة المسرح ، بدوره على الكاميرا ، بدوره على منار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع السكين وموضوعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيت حلقة العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس البعد عينة وإنشاء ملف تكوين لتطبيق المرحلة KESM Controller2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء المرحلة KESM Controller2 وتهيئة المسرح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انخفاض سكين / الهدف ، تشغيل المضخة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركز الهدف والكاميرا ، التي تحول مقبض التركيز على تدريب وضبط الحقل البصري للكاميرا وجهة نظر بالنسبة الى حافة السكين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على [الذهاب] لبدء التصوير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انظر التين. 3-8. انظر 9 ، 7 للحصول على التفاصيل التقنية. </li></ol> 6. معالجة الصور وإعداد البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نسخ المعالج القابل للتنفيذ KESM المكدس في مجلد البيانات ضمن المجلد ملف التكوين (00000 ، 00001 ، الخ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل المعالج المكدس KESM لإزالة قطعة أثرية الإضاءة وتطبيع كثافة الخلفية في جميعالصور. أكرر لجميع المجلدات الفرعية البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد البلاط متعددة النطاقات من مجموعة البيانات وتحميلها وإعداد الملفات في الدماغ خادم الويب KESM أطلس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انظر الشكل. 9. </li></ol> 7. بيانات التصور والتحليل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التصور باستخدام أطلس الدماغ KESM. انتقل إلى <a href="http://kesm.cs.tamu.edu">http://kesm.cs.tamu.edu</a> وحدد الأطلس المناسبة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التنقل كما هو الحال في خرائط جوجل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التكبير والتصغير كما هو الحال في خرائط جوجل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للذهاب الى عمق مختلفة ، وتحديد كيفية العميق لتذهب في كل خطوة من القائمة المنسدلة ، ثم انقر على [+] أو بإحدى هاتين العقوبتين -- لزيادة أو نقصان عمق ض []. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط عدد تراكب باستخدام القائمة المنسدلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط الفاصل الزمني تراكب باستخدام القائمة المنسدلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انظر الشكل. 11. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التصور MeVisLab به. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إطلاق MeVisLab. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء مشروع جديد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في ما يلي ، يمكن أن يكون إنشاء وحدات جديدة من قبل تايping في اسم الوحدة النمطية في مربع الأوامر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء وحدة نمطية [Compose3Dfrom2DFiles] ، وانتقل إلى المجلد المطلوب. أدخل سلسلة الملف وانقر في [GetFileList]. تأكد من أن الصور التي اخترتها يمكن وضعها في الذاكرة. فوق [Create3D] لإنشاء وحدة التخزين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء وحدة نمطية [SetWorldMatrix] ، وتعيين &quot;جدول&quot; تحت عنوان &quot;التحويلات الابتدائية&quot; س ، ص ، ض لحجم فوكسل المناسب (0.6 ، 0.7 ، 1.0 لهدف 0.45NA 10X). الرابط [Compose3Dfrom2DFiles] إلى [SetWorldMatrix]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مجموعة مصفوفة والتحويلات تحت عنوان &quot;تكوين مصفوفة&quot; إلى &quot;تجاهل&quot; ، &quot;تجاهل&quot; ، &quot;إلى الأمام&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء وحدة نمطية [Arithmetic1] ، وتعيين &quot;الفعل&quot; إلى &quot;عكس (IMG ماكس)&quot;. الرابط [SetWorldMatrix] إلى [Arithmetic1]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء وحدة نمطية [View3D] وربط [Arithmetic1]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في View3D ، في حين يتم الضغط على زر الفأرة الأيمن ، قم بتحريك الماوس لضبط العتبة. يمكنك المحاصيل المناطق ، وتغيير التوجه (الماوس تتحرك في حين ضغط زر الماوس الأيسر) ، والإضاءة تغيير (حجم renderinز أو MIP) ، تشغيل / إيقاف الخلفية ، الخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انظر الشكل. 10. </li></ol></li></ol> 8. ممثل النتائج : هنا ، نقدم كامل الدماغ البيانات والتفاصيل. التين. 12-15 تظهر كلها في الدماغ الهند الحبر ، غولجي والبيانات نيسل مجموعات 1 و 4 و 3. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig1.jpg" /> الشكل 1. الثابتة ، الملون ، وجزءا لا يتجزأ من مخ الفأر <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig2.jpg" /> الشكل 2. شنت المضمنة عينة مخ ​​الفأر على الحلقة العينة. <img alt="الشكل 3" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig3.jpg" /> الشكل 3 ، والمسح الضوئي حافة السكين مجهر (KESM). وترد صورة للKESM مع مكوناته الرئيسية ملحوظة : (1) سكين الماس عالية السرعة خط تفحص الكاميرا ، (2) الهدف المجهر ، (3) والتجمع ، وميزاء الخفيفة ، (4) جمعية مهندسي البترولcimen دبابات (التصوير غمر المياه) ، (5) ثلاثة محاور الدقة الجوية الحاملة للمرحلة ، (6) منار مجهر الضوء الأبيض ، (7) مضخة المياه (في الظهر) لإزالة الأنسجة مقطوع ، (8) خادم الكمبيوتر لمراقبة المرحلة والحصول على الصور ، (9) قاعدة من الجرانيت ، و (10) جسر الجرانيت. <img alt="الشكل 4" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig4.jpg" /> الشكل 4. مبادئ التصوير من KESM. ويتجلى مبدأ تشغيل KESM. الهدف هو عقد والسكين في مكان ، في حين أن العينات الموضوعة على التحركات مرحلة تحديد المواقع (السهم مع خط الصلبة) في قرار من 20 نانومتر وسرعة سفر 1-5 ، ويحصل على كشط ضد السكين الماس (5 ملم واسعة عن الهدف 10X) ، وتوليد مقطع رقيقة تتدفق على سكين (السهم مع خط الصلبة). ويتم فحص الخط والتصوير القريب جدا من طرف السكين. <img alt="الشكل 5" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig5.jpg" /> الشكل 5. KESM الكاميرا والهدف ضوابط التركيز. <img alt="الشكل 6" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig6.jpg" /> الشكل 6. KESM التجمع سكين والضوابط. <img alt="الرقم 7" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig7.jpg" /> الرقم 7. الأولية التي تركز من خلال منفذ المراقبة. <img alt="الشكل 8" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig8.jpg" /> الرقم 8. KESM المراقب تطبيق المرحلة 2 (الصورة). <img alt="الرقم 9" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig9.jpg" /> الرقم 9. KESM تطبيق المعالج المكدس (الصورة). <img alt="الرقم 10" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig10.jpg" /> الرقم 10. MeVisLab التطبيق (الصورة). <img alt="الرقم 11" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig11.jpg" /><br/&gt; الرقم 11 KESM أطلس الدماغ : واجهة ويب (الصورة). <img alt="الرقم 12" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig12.jpg" /> الرقم 12. KESM الحبر الهند بأكملها في الدماغ البيانات. وتظهر حجم كدسات أميبا KESM البيانات لمجموعة البيانات الأوعية الدموية. (أ) عن قرب من البيانات الأوعية الدموية. عرض ~ 100 ميكرون. (BD) ثلاثة آراء مستوى الأوعية الدموية في الدماغ كله الماوس (subsampled من بيانات عالية الوضوح). ~ 10MM العرض. <img alt="الرقم 13" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig13.jpg" /> الرقم 13. KESM كامل البيانات غولجي مخ الفأر. <img alt="الرقم 14" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig14.jpg" /> الرقم 14. KESM غولجي تفاصيل البيانات. <img alt="الرقم 15" src="/files/ftp_upload/3248/3248fig15.jpg" /> الرقم 15. KESM كامل البيانات نيسل الدماغ. (أ) عن قرب من Nissl البيانات. ~ 300 ام 3. (BD) ثلاثة آراء القياسية للمجلس بكامل هيئته دماغ الفأر البيانات نيسل (subsampled من بيانات عالية الوضوح). مقطع عرضي لعرض رؤية واضحة للهياكل الداخلية.

<ol>
	<li>Abbott, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+imaging+of+whole+small+animal+brains+with+the+knife-edge+scanning+microscope.">High-throughput imaging of whole small animal brains with the knife-edge scanning microscope.</a> Neuroscience Meeting Planner. Program No. 504.2, (2008).</li><li>Abbott, L. C., Sotelo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+analysis+of+catecholaminergic+innervation+in+weaver+and+normal+mouse+cerebellar+cortices.">Ultrastructural analysis of catecholaminergic innervation in weaver and normal mouse cerebellar cortices.</a> Journal of Comparative Neurology. 426, 316-329 (2000).</li><li>Choe, Y., Abbott, L. C., Miller, D. E., Han, D., Yang, H. -. F., Chung, J. R., Sung, C., Mayerich, D., Kwon, J., Micheva, K., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiscale+imaging,+analysis,+and+integration+of+mouse+brain+networks.">Multiscale imaging, analysis, and integration of mouse brain networks.</a> Neuroscience Meeting Planner. Program No. 516.3, (2010).</li><li>Choe, Y., Han, D., Huang, P. -. S., Keyser, J., Kwon, J., Mayerich, D., Abbott, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+submicrometer+scans+of+mouse+brain+microstructure:+Neurons+and+vasculatures.">Complete submicrometer scans of mouse brain microstructure: Neurons and vasculatures.</a> Neuroscience Meeting Planner. Program No. 389.10, (2009).</li><li>Choe, Y., Abbott, L. C., Han, D., Huang, P. S., Keyser, J., Kwon, J., Mayerich, D., Melek, Z., McCormick, B. H., Ravi Rao, A., Cecchi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knife-edge+scanning+microscopy:+High-throughput+imaging+and+analysis+of+massive+volumes+of+biological+microstructures.">Knife-edge scanning microscopy: High-throughput imaging and analysis of massive volumes of biological microstructures.</a> High-Throughput Image Reconstruction and Analysis: Intelligent Microscopy Applications. , 11-37 (2008).</li><li>Choe, Y., Abbott, L. C., Ponte, G., Keyser, J., Kwon, J., Mayerich, D., Miller, D., Han, D., Grimaldi, A. M., Fiorito, F., Edelman, D. B., McKinstry, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Charting+out+the+octopus+connectome+at+submicron+resolution+using+the+knife-edge+scanning+microscope.">Charting out the octopus connectome at submicron resolution using the knife-edge scanning microscope.</a> BMC Neuroscience. 11, 136-136 (2010).</li><li>Mayerich, D., Abbott, L. C., McCormick, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knife-edge+scanning+microscopy+for+imaging+and+reconstruction+of+three-dimensional+anatomical+structures+of+the+mouse+brain.">Knife-edge scanning microscopy for imaging and reconstruction of three-dimensional anatomical structures of the mouse brain.</a> Journal of Microscopy. 231, 134-143 (2008).</li><li>Mayerich, D., Kwon, J., Sung, C., Abbott, L. C., Keyser, J., Choe, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+macro-scale+Transmission+Imaging+of+Microvascular+Networks+Using+KESM.">Fast macro-scale Transmission Imaging of Microvascular Networks Using KESM.</a> Biomedical Optics Express. 2, 2888-2896 (2008).</li><li>McCormick, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Brain+Tissue+Scanner.">Development of the Brain Tissue Scanner.</a> Technical Report. , (2002).</li><li>Sporns, O., Tononi, G., K&#246;tter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+connectome:+A+structural+description+of+the+human+brain.">The human connectome: A structural description of the human brain.</a> PLoS Computational Biology. 1, 42-42 (2005).</li></ol>

تود هوفمان هو مع 3Scan ، وهي شركة تجارية التي تقوم بتصنيع وتسويق التكنولوجيا KESM (الولايات المتحدة للبراءات 6744572 #).

وKESM يسمح لمسح submicrometer المستوى من كميات كبيرة من العينات البيولوجية (~ 1 سم 3). اخذت الخ هذا النوع من حجم كاف لعقد كامل الأجهزة الحيوانات الصغيرة ، مثل العقل والرئتين والقلب والكلى ، وصور من هذه الأجهزة يمكن أن توفر معلومات كمية لم يسبق لها مثيل حول التنظيم الهيكلي لهذه الأجهزة ، وتمكن من النمذجة الحاسوبية الفنية المختلفة جوانب من هذه الأجهزة ، بما في ذلك ديناميات الدوائر والشبكة ، والخصائص الكهربائية ، وديناميات السوائل وتدفق الهواء ، وديناميكية العضلات. ومن المتوقع أن بروتوكول إعداد العينات وبروتوكول ما بعد تحليل مفصل في هذه المقالة لمساعدة المجموعات البحثية خارج لسهولة الوصول إلى KESM والبيانات الناتجة عن ذلك. فإن بروتوكول العملية KESM مساعدة هؤلاء الباحثين الخارجيين لتقدير الفوائد والقيود المفروضة على هذه الطريقة تصوير فريدة من نوعها.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/3248">Specimen Preparation, Imaging, and Analysis Protocols for Knife-edge Scanning Microscopy</a>. Important modifications were made to the Nissl staining protocol.

A correction was made to <a href="http://http://www.jove.com/video/3248">Specimen Preparation, Imaging, and Analysis Protocols for Knife-edge Scanning Microscopy</a>. Important modifications were made to the Nissl staining protocol.

Erratum: Specimen Preparation, Imaging, and Analysis Protocols for Knife-edge Scanning Microscopy

specimen preparation, imaging, and analysis protocols for knife-edge scanning microscopy

وقد مكنت الاكتشافات الكبيرة في الإنتاجية العالية ، وارتفاع القرار ، وتقنيات الفحص المجهري 3D اقتناء كميات كبيرة من البيانات في القرار submicrometer تشريحي عصبي. واحد من الصكوك الأولى من نوعها تنتج في الدماغ كله على نطاق البيانات هي مجهر مسح السكين الحافة (KESM) 7 ، 5 ، 9 ، المتقدمة واستضافت في مختبر المؤلفين. وقد استخدمت KESM إلى الباب والعقول كلها في صورة الفأر submicrometer القرار ، وكشف عن التفاصيل المعقدة للشبكات العصبية (غولجي) 1 ، 4 ، 8 ، وشبكات الأوعية الدموية (الهند الحبر) 1 و 4 و الخلية توزيع الجسم (نيسل) 3 . ولا يقتصر استخدام الفأرة لKESM ولا الدماغ. لقد نجحنا في تصوير الدماغ الأخطبوط 6 ، الرئة الماوس ، والدماغ الفئران. نحن نعمل حاليا على كامل أجنة أسماك الزرد. ويمكن مثل هذه البيانات تسهم إسهاما كبيرا في البحوث connectomics 10 ؛ لدوران الأوعية الدقيقة والبحوث الدورة الدموية ، والتجسيم للبحث عن طريق ال Øقرع ملف. الدقيق الأرضية الحقيقة في هذه المقالة ، فإننا سوف تصف خط الأنابيب ، بما في ذلك إعداد العينات (إصلاح ، وتلطيخ ، وتضمينها) ، KESM التكوين والإعداد ، والتصوير sectioning مع KESM ، ومعالجة الصور ، وإعداد البيانات ، والبيانات والتصور والتحليل. وسوف يكون التركيز على إعداد العينات والتصور / تحليل البيانات التي تم الحصول عليها KESM. نتوقع بروتوكول المفصلة التي قدمت في هذه المقالة للمساعدة في توسيع فرص الحصول على KESM وزيادة الاستفادة منه.

Watch this Scientific Journal Video about Specimen Preparation, Imaging, and Analysis Protocols for Knife-edge Scanning Microscopy at JoVE.com

Specimen Preparation, Imaging, and Analysis Protocols for Knife-edge Scanning Microscopy

وصفت عملية التحضير الكامل من عينة المخ لتصوير المسلسل sectioning باستخدام مجهر المسح حد السكين ، لتصور وتحليل البيانات. ويجري حاليا استخدام هذه التقنية للحصول على بيانات مخ الفأر ، ولكنه ينطبق على الأجهزة الأخرى ، وأنواع أخرى.

تحضير العينة ، والتصوير ، وتحليل بروتوكولات لالميكروسكوب الضوئي سكين الحافة

Major advances in high-throughput, high-resolution, 3D microscopy techniques have enabled the acquisition of large volumes of neuroanatomical data at ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

ثلاثي الأبعاد البصرية الميكروسكوب الضوئي الاستبانة

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy

الشلل البكتيرية للتصوير بواسطة الفحص المجهري القوة الذرية

AFM is a high-resolution (nm scale) imaging tool that mechanically probes a surface.  It has the ability to image cells and biomolecules, in a liquid ...

Video-rate Scanning Confocal Microscopy and Microendoscopy

فيديو معدل الميكروسكوب متحد البؤر المسح الضوئي وMicroendoscopy

Confocal microscopy has become an invaluable tool in biology and the biomedical sciences, enabling rapid, high-sensitivity, and high-resolution optical ...

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

إنشاء تدرجات لاصق وقابل للذوبان للهجرة الخليوي مع التصوير مضان المجهري

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

عالية الدقة تحليل الزمانية المكانية من مستقبلات حيوية من قبل جزيء واحدة الإسفار الميكروسكوب

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

Preparation of Mica Supported Lipid Bilayers for High Resolution Optical Microscopy Imaging

إعداد ميكا المدعومة الدهون طبقات ثنائية لارتفاع القرار المجهر الضوئي التصوير

Supported lipid bilayers (SLBs) are widely used as a model for studying membrane properties (phase separation, clustering, dynamics) and its interaction ...

Hybrid &#181;CT-FMT imaging and image analysis

Hybrid Ãƒâ€šÃ‚ÂµCT-FMT imaging and image analysis

الهجين التصوير μCT-FMT وتحليل الصور

Fluorescence-mediated tomography (FMT) enables longitudinal and quantitative determination of the fluorescence distribution in vivo and can be used to ...

Atomic Force Microscopy Imaging and Force Spectroscopy of Supported Lipid Bilayers

قوة الذرية المجهر التصوير وقوة التحليل الطيفي لدعم الدهن طبقات ثنائية

Atomic force microscopy (AFM) is a versatile, high-resolution imaging technique that allows visualization of biological membranes. It has sufficient ...

Correlative Light Electron Microscopy (CLEM) for Tracking and Imaging Viral Protein Associated Structures in Cryo-immobilized Cells

Correlative Light Electron Microscopy CLEM for Tracking and Imaging Viral Protein Associated Structures in Cryo-immobilized Cells

المجهر الإلكتروني الارتباطية الخفيفة (كليم) لتتبع وتصوير البروتينات الفيروسية المرتبطة الهياكل في الخلايا المعطل تداولها البرد

Due to its high resolution, electron microscopy (EM) is an indispensable tool for virologists. However, one of the main difficulties when analyzing ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

تصور تشكيل الالتصاق في الخلايا من خلال متقدم الغزل مجهرية Fluorescence انعكاس الداخلية القرص--المجموع

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...