Name: rnai mediated gene knockdown and transgenesis by microinjection in the necromenic nematode pristionchus pacificus
Uploaded: 2011-10-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus at JoVE.com

المؤلفون ممتنون جدا لسومر RJ وانغ X للحصول على مساعدة microinjection ، فضلا عن التعليقات الثاقبة من المراجعين المجهولين. ويؤيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح SC2GM089602.

1. Transgenesis : إعداد الحمض النووي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المهيمن المشترك الحقن علامة : pRL3 [PPA - PRL - 1 (tu92)] والبلازميد pRL3 هو المهيمن المشترك الحقن علامة لتحديد بصريا أحداث التحول الناجح. هذا البلازميد بترميز لأليل متحولة المهيمنة (tu92...

<ol>
	<li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+Genetics.">Reverse Genetics.</a> Wormbook. , (2006).</li><li>Mello, C. C., Kramer, J. M., Stinchcomb, D., Ambros, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+in+C.+elegans:+extrachromosomal+maintenance+and+integration+of+transforming+sequences.">Efficient gene transfer in C. elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences.</a> EMBO J. 10, 3959-3970 (1991).</li><li>Junio, A. J., Li, X., Massery, H. C., Nolan, T. J., Lamitina, S. T., Sundaram, M. V., Lok, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strongyloides+stercoralis:+cell-+and+tissue-specific+transgene+expression+and+co-transformation+with+vector+constructs+incorporating+a+common+multifunctional+3'+UTR.">Strongyloides stercoralis: cell- and tissue-specific transgene expression and co-transformation with vector constructs incorporating a common multifunctional 3' UTR.</a> Exp. Parasitology. 118, 253-265 (2008).</li><li>Schlager, B., Wang, X., Braach, G., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+of+a+dominant+roller+mutant+and+establishment+of+DNA-mediated+transformation+in+the+nematode+Pristionchus+pacificus.">Molecular cloning of a dominant roller mutant and establishment of DNA-mediated transformation in the nematode Pristionchus pacificus.</a> Genesis. 47, 300-304 (2009).</li><li>Hong, R. L., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pristionchus+pacificus:+a+well-rounded+nematode.">Pristionchus pacificus: a well-rounded nematode.</a> Bioessays. 28, 651-659 (2006).</li><li>Hong, R. L., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemoattraction+in+Pristionchus+nematodes+and+implications+for+insect+recognition.">Chemoattraction in Pristionchus nematodes and implications for insect recognition.</a> Curr. Biol. 16, 2359-2365 (2006).</li><li>Rudel, D., Riebesell, M., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadogenesis+in+Pristionchus+pacificus+and+organ+evolution:+development,+adult+morphology+and+cell-cell+interactions+in+the+hermaphrodite+gonad.">Gonadogenesis in Pristionchus pacificus and organ evolution: development, adult morphology and cell-cell interactions in the hermaphrodite gonad.</a> Dev. Biol. 277, 200-221 (2005).</li><li>Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W. W., Prasher, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+protein+as+a+marker+for+gene+expression.">Green fluorescent protein as a marker for gene expression.</a> Science. 11, 802-805 (1994).</li><li>Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Introduction+to+Worm+Lab:+from+Culturing+Worms+to+Mutagenesis.">An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis.</a> J. Vis. Exp. (47), e2293-e2293 (2011).</li><li>Evans, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+and+Microinjection.">Transformation and Microinjection.</a> Wormbook. , (2006).</li></ol>

تم العثور على P. السكان pacificus بالتعاون الوثيق مع مختلف أنواع خنفساء الجعران في جميع أنحاء العالم ، وهو نموذج الخيطية وسيطة بين الذين يعيشون بحرية والديدان الطفيلية. قوة P. pacificus باعتبارها النموذج الحي الناشئة يكمن في دمج خرائط وراثية والمادية التي تشجع ع...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> المنتج : </th><th> كتالوج # : </th><th> المورد : </th></tr><tr><td> DMI3000 حقن المجهر </td><td> DMI3000 </td><td> لايكا </td></tr><tr><td> Microinjector مناور (محرك مباشر) </td><td> Narashige مشتركة BC - 3 الكرة </td><td> Tritech بحوث </td></tr><tr><td> إبرة بولير </td><td> Narashige PC - 10 </td><td> Tritech بحوث </td></tr><tr><td> MicroInjector ™ كل الرقمية المتعددة ضغط النظام </td><td> Narashige MINJ - D </td><td> Tritech بحوث </td></tr><tr><td> GeneElute ™ الحمض النووي الجينوم الثدييات Miniprep كيت </td><td> G1N70 </td><td> سيغما </td></tr><tr><td> pJet استنساخ عدة جت </td><td> K1231 </td><td> Fermentas </td></tr><tr><td> GeneJET البلازميد Miniprep طقم </td><td> K0502 </td><td> Fermentas </td></tr><tr><td> الحمض النووي النظافة والمكثف ™ </td><td> D4005 </td><td> الإنزيم بحوث </td></tr><tr><td> BLOCK - IT ™ رني النسخ ® TOPO طقم </td><td> K3500 K3650 - 01 و 0 -1 </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Difco ™ آجار نوبل </td><td> DF0142 - 15-2 </td><td> فيشر Scientifi </td></tr><tr><td> ميكروسكوب تغطية (1.5 -- 0.16 و 0.19mm سميكة ؛ الحجم : 50 × 45mm) </td><td> 12-554 - F </td><td> فيشر العلمية </td></tr><tr><td> الزجاج الشعيرات الدموية (خيوط) </td><td> 615000 </td><td> نظم AM </td></tr><tr><td> زيت البارافين (الثقيلة) </td><td> O122 - 1 </td><td> فيشر العلمية </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td> P386 - 500 </td><td> فيشر العلمية </td></tr><tr><td> غ هبو 2 4 </td><td> AC20651 - 5000 </td><td> فيشر العلمية </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> BP3581 </td><td> فيشر العلمية </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> M80 - 500 </td><td> فيشر العلمية </td></tr></tbody></table>

rnai mediated gene knockdown and transgenesis by microinjection in the necromenic nematode pristionchus pacificus

على الرغم من أنها غير معقولة على نحو متزايد بالنسبة للكائنات نموذج الناشئة للحصول على تسلسل الجينوم تماما ، وكذلك في العمق وظائف الجينات والتحليلات التعبير تدخل الحمض النووي الريبي وtransgenesis مستقرة. تظل محدودة في كثير من الأنواع بسبب التشريح والبيولوجيا الخلوية خاصة الجزيئية للكائن على سبيل المثال ، خارج من انواع معينة المجموعة التي تضم تاج ايليجانس انواع معينة 3 ، تنتقل ستابلي خطوط المعدلة وراثيا في انواع معينة من غير الأنواع لم يتم الإبلاغ عنها في هذه العائلة خادع (النيماتودا) ، مع استثناء من الأسطوانيات البرازية 4 و 5 Pristionchus pacificus. لتسهيل توسيع دور P. pacificus في دراسة التنمية والتطور ، والسلوك 6-7 ، ونحن هنا تصف الأساليب الحالية لاستخدام microinjection الحيوانات المعدلة وراثيا لجعل والجينات التي نهدم رني. مثل الغدد التناسلية لل <em&gt; C. ايليجانس ومعظم الديدان الأخرى ، والغدد التناسلية من P. pacificus هو syncitial وقادرة على دمج الحمض النووي والحمض النووي الريبي في البويضات عند نقلها بواسطة microinjection المباشر. خلافا جيم ايليجانس لكن مستقرة الميراث التحوير والتعبير الجسدي في P. pacificus يتطلب إضافة الحمض النووي الجيني النفس يتفاعل مع endonucleases مكملة لينتهي من الجينات المحورة المستهدفة وعلامات coinjection 5. إضافة الحمض النووي الجيني الناقل مماثل من شرط للتعبير عن التحوير في 4 و الأسطوانيات البرازية في الخلايا الجرثومية من C. ايليجانس. ومع ذلك ، فإنه ليس من الواضح ما اذا كان شرط محدد الحمض النووي للحيوانات &quot;الجينوم الخاصة لأن P. pacificus سوما فعالة جدا في إسكات غير معقدة متعددة الجينات أو أن نسخة خارج الصبغي صفائف في P. pacificus تتطلب متواليات الجينوم لتجميع kinetochore السليم أثناء الانقسام. الهجرة البطنية من (اثنين المسلحةمزدوجة الرحم) المناسل في المخنثين يزيد من تعقيد القدرة على ضخ كل من الغدد التناسلية في الديدان الفردية 8. علينا أن نظهر أيضا استخدام microinjection ضربة قاضية لمتحولة المهيمنة (الدوارة ، tu92) عن طريق حقن المزدوج تقطعت بهم السبل الحمض النووي الريبي (الرنا المزدوج الجديلة) في الحصول على الغدد التناسلية غير المتداول F 1 النسل. خلافا جيم ايليجانس ، ولكن مثل الديدان الخيطية معظم الدول الأخرى ، P. pacificus PS312 ليس تقبلا لرني النظامية عن طريق التغذية وتمرغ وبالتالي يجب أن تدار من قبل الرنا المزدوج الجديلة microinjection في المناسل syncitial. في هذه الدراسة الحالية ، ونأمل أن تصف العملية microinjection اللازمة لتحويل المؤسسة العامة للتقاعد ، المروج EGL - 4 : : GFP مراسل الانصهار وضربة قاضية الأسطوانة المهيمنة PRL - 1 (tu92) متحولة في بروتوكول بالمعلومات بصريا.

Watch this Scientific Journal Video about RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus at JoVE.com

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

في الكائنات النموذج ، ويمكن التلاعب transgenesis ظائف الجينات في حين يمكن رني ضربة قاضية نصوص محددة مرنا 1-2. هذا البروتوكول يهدف لتوضيح التقنيات اللازمة لإدخال الحمض النووي التي تنتقل ستابلي وعابرة RNA المزدوج تقطعت بهم السبل في الخيطية necromenic<em&gt; Pristionchus pacificus</em&gt; للدراسات في البيولوجيا التطورية والإنمائية ، والسلوكية.

وساطة رني ضربة قاضية بواسطة الجينات وTransgenesis Microinjection في نيماتودا Necromenic Pristionchus pacificus</em

Although it is increasingly affordable for emerging model organisms to obtain completely sequenced genomes, further in-depth gene function and expression ...

Research

JoVE Journal

Biology

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

رني المترجمة خارج الرحم والتعبير الجيني في المستنزف الطبية

In this video, we show the use of a pneumatic capillary gun for the accurate biolistic delivery of reagents into live tissue. We use the procedure to ...

Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function

Microinjection الجنين اسماك الزرد إلى تحليل وظائف الجينات

One of the advantages of studying zebrafish is the ease and speed of manipulating protein levels in the embryo.  Morpholinos, which are synthetic ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

باستخدام خلية مكافحة الآلي لتبسيط دراسات التعبير الجيني : ضربة قاضية سيرنا من IL - 4 التعبير الجيني في الخلايا التابعة Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

البكتيرية تسليم المستجيبات رني : Transkingdom رني

RNA interference (RNAi) represents a high effective mechanism for specific inhibition of mRNA expression. Besides its potential as a powerful laboratory ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

تفعيل موت الخلايا المبرمج من قبل Microinjection هيولي من السيتوكروم ج</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral بوساطة خلال ضربة قاضية السابقين فيفو تكون الكريات الحمر في الإنسان خلايا الجذعية المكونة للدم

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton

الأجرعية بوساطة الفيروسات إسكات الجينات المستحثة الفحص في القطن

Cotton (Gossypium hirsutum) is one of the most important crops worldwide. Considerable efforts have been made on molecular breeding of new varieties.  The ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

رني ضربة قاضية بوساطة الجينات و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; فحص إدرار البول في الإناث البالغات<em&gt; الزاعجة المصرية</em&gt; البعوض

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Genome-wide Gene Deletions in Streptococcus sanguinis by High Throughput PCR

Genome-wide Gene Deletions in Streptococcus sanguinis by High Throughput PCR

حذوفات الجينات في الجينوم على نطاق<em&gt; العقدية الدم</em&gt; من جانب PCR إنتاجية عالية

Transposon  mutagenesis and single-gene deletion are two methods applied in genome-wide  gene knockout in bacteria 1,2. Although transposon mutagenesis is ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

باستخدام الحمض النووي الريبي التي تتوسط استراتيجية التغذية التدخل للكشف عن الجينات المسؤولة عن تنظيم حجم الجسم في نيماتودا<em&gt; C. ايليجانس</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...