Name: efficient derivation of human neuronal progenitors and neurons from pluripotent human embryonic stem cells with small molecule induction
Uploaded: 2011-10-28T13:00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction at JoVE.com

XHP foi apoiado pelo National Institute of Health (NIH) doações do National Institute on Aging (NIHK01AG024496) e A Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health e Desenvolvimento Humano (NIHR21HD056530).

1. Solução e Mídia Preparação <ol><li> Solução de revestimento de gelatina: 0,1% (w / v) de gelatina em DDH 2 O, autoclavado e armazenar a 4 ° C. </li><li> Matrigel soluções de revestimento. Solução estoque: lento degelo Matrigel (10 ml) a 4 ° C durante a noite, adicionar 10 ml gelada DMEM ou DMEM/F12, misture bem e alíquota de 1 ml / tubo sob capô de cultura de tecidos esterilizados, armazenar a -20 ° C. Solução de trabalho: descongele lenta 1 ml alíquota Matrigel a 4 ° C por 1-2 horas a transferência, a 14 ml ou refrigerados DMEM DMEM/F12 e misture bem debaixo capa de cultura de tecidos esterilizados imediatamente antes de revestimento. </li><li> Solução de revestimento laminina humana: diluir 1 ml de solução de laminina humana (0,5 mg / ml em Tris Buffered NaCl, armazenar a -80 ° C, degelo lento a 4 ° C por 1-2 horas) com gelado DMEM ou DMEM/F12 para 12,5 ml de solução de trabalho (40 mcg / ml) por baixo capota de cultura de tecidos esterilizados imediatamente antes de revestimento. </li><li> Soluções estoque de fator de crescimento (500-1000x): dissolver o fator de crescimento de 10 mg/ Ml em tampão esterilizado (0,5% BSA, 1,0 mM DTT, glicerol 10%, 1XPBS) e armazenar como 50-100 mL / tubo de alíquotas a -80 ° C. </li><li> All-trans-ácido retinóico solução de trabalho (1000X): 10 mM em DMSO, armazenar em alíquotas a -80 ° C. </li><li> Media células estaminais embrionárias humanas: DMEM/F12 ou KO-DMEM (80%), KO substituição de soro (20%), L-alanil-L-gln ou L-gln (2 mM), MEM aminoácidos não essenciais (MNAA, 1X), e β-mercaptoetanol (100 mM), filtrado e armazenar a 4 ° C, suplementado com 20 ng / ml bFGF antes de usar. Ou substituição de &quot;knock out (KO) a substituição do soro&quot; com componentes definidos: DMEM/F12 ou KO-DMEM (100%), L-alanil-L-gln ou L-gln (2 mM), MNAA (1X), MEM essenciais aminoácidos (MEAA, 1X), e β-mercaptoetanol (100 mM), filtrado e armazenar a 4 ° C, suplementado com bFGF (20 ng / ml), a insulina humana (20 mcg / ml), ácido ascórbico (50 mg / ml), humana ativina A (50 ng / ml), albumina humana Albumax / (10 mg / ml), e transferrina humana (8 mcg / ml) antes de usar. </li><li> NSC mídia: DMEM/F12 (100%), N-2 supplement (1X), heparina (8 mcg / ml). </li></ol> 2. Revestimento placa <ol><li> Placas de revestimento com gelatina: adicionar 2,5 ml / poço de solução de gelatina a 6 placas bem e incubar durante a noite em uma incubadora de 37 ° C umidificado. </li><li> Placas de revestimento com laminina: frio de gelatina revestidos e remover placas de gelatina, adicione 2,5 ml / solução de revestimento bem Matrigel ou humano laminina trabalhando para pré-gelatinizado refrigerados 6-bem placas e incubar a 4 ° C durante a noite. </li></ol> 3. Passaging e propagação hESCs indiferenciado sob condições definidas <ol><li> Permitir colônias CTEh crescer até 5-7 dias de idade, e ter placa de cultura CTEh para microscópio de dissecação (pré-aquecido dissecar palco para 37 ° C) por baixo de dissecação capô esterilizados. </li><li> Selecione colônias CTEh a ser dividido. Morfologicamente, essas colônias devem ter&gt; 75% hESCs indiferenciada (pequenas células compactas), geralmente um pouco opaco (não-brancos empilhados células não diferenciadas células claras) com borda definida underneath o microscópio de dissecação. Cuidadosamente delinear as colônias selecionadas e remover camada de fibroblastos diferenciados em torno da colônia e todas as partes diferenciadas (se houver) da colônia com a borda da P2 ponteira estéril ou puxado capilar de vidro. (Por favor note, hESCs pluripotentes estão em uma fase transitória, sofrem diferenciação espontânea, mesmo em condições óptimas, apesar de preferida, é difícil para as células verificar teses são 100% indiferenciado sob microscópio de dissecação,&gt; 75% indiferenciados são geralmente considerados como o ponto de passagem. A células diferenciadas normalmente não sementes e continuar a crescer, eliminados no processo de passaging) </li><li> Remover a velha mídia contendo flutuante destacada células diferenciadas por aspiração. Lavar com media hESC (sem bFGF) uma vez. Adicionar 3 ml / media CTEh bem fresco contendo 20 ng / ml bFGF. </li><li> Cortar as colônias CTEh indiferenciado em pequenos pedaços, e retire com ponteira estéril ou vidro puxado capilar.</li><li> Piscina a mídia que contém peças colônia separada juntos em um tubo de 50 ml. Lave a placa uma vez com 1 ml / media CTEh bem contendo 20 ng / ml bFGF e piscina juntos. </li><li> Aspirar o Matrigel ou solução laminina humana, desde as placas revestidas fresco. Alíquota de 4 ml / poço media CTEh contendo peças colônia para uma placa de seis poços. Suavemente transferir a placa para incubadora, sem agitação e permitir semente peças colônia durante a noite sem perturbar em um umidificado 37 ° C incubadora com uma atmosfera de 5% de CO 2. </li></ol> 4. Indução neural da hESCs em Sistema Cultura Definido com ácido retinóico <ol><li> No dia 3 após a semeadura, remover a maior parte velha mídia de cada poço da placa e deixe a mídia o suficiente para permitir colônias CTEh a ser submersa (nunca permitir hESCs a secar). Substituir com 4 ml / media CTEh bem fresco contendo 20 ng / ml e 10 mM bFGF ácido retinóico. </li><li> Substituir a velha mídia com a mídia CTEh fresco contendo 20 ng / ml e bFGF10 mM de ácido retinóico em dias alternados, e permitir que as colônias neural induzida CTEh crescer para dia 7 ou 8. Todas as células dentro da colônia vai sofrer alterações morfologia de grandes células diferenciadas que continuarão a se multiplicar. As colônias irão aumentar de tamanho para cobrir a placa de dia 7 ou 8, e as células começam a se acumular em algumas áreas das colônias. </li></ol> 5. Continuando Diferenciação Neuronal em Cultura Suspensão <ol><li> Tome placa CTEh cultura para dissecar microscópio (pré-aquecido dissecar palco para 37 ° C) por baixo de dissecação capô esterilizados. Cuidadosamente delinear as colônias e remover camada de fibroblastos ao redor da colônia (células diferenciadas migraram para fora da colônia) com a borda da ponta da pipeta estéril ou P2 puxado capilar de vidro. </li><li> Remover a velha mídia contendo flutuante células de fibroblastos destacado por aspiração. Lavar com media hESC (sem bFGF) uma vez. Adicionar 3 ml / media CTEh bem fresco (sem bFGF). </li><li> Cut the-neural icolônias CTEh nduced em pequenos pedaços, e retire com ponteira estéril ou puxado capilar de vidro. </li><li> Piscina a mídia que contém peças colônia separada juntos em um tubo de 50 ml. Lave a placa uma vez com 1 ml / media CTEh bem (sem bFGF) e piscina juntos. </li><li> Alíquota de 4 ml / poço media sem soro CTEh contendo peças colônia para uma placa de fixação 6-ultralow bem e incubar em um 37 ° C incubadora umidificada para permitir flutuante aglomerados celulares (neuroblastos) para formar por 4-5 dias. </li></ol> 6. Maturação Fenótipo neuronal em Cultura Adhesive <ol><li> Piscina a mídia que contém neuroblastos flutuando juntos em um tubo de 50 ml. Centrifugar a 1400 rpm por 5 min. Aspirar a velha mídia, tanto quanto você pode e adicionar uma quantidade igual de novo NSC mídia contendo VEGF (20 ng / ml), NT-3 (10 ng / ml), e BDNF (10 ng / ml). </li><li> Pipeta cima e para baixo para misturar neuroblastos flutuante e alíquota de 4 ml / poço a 6-lamelas. Os neuroblastos também pode ser sieded em um laminina / colágeno (Matrigel) ou humana laminina polimerizada 3-dimensional da matriz nos meios de comunicação sem soro contendo NSC VEGF (20 ng / ml), NT-3 (10 ng / ml), e BDNF (10 ng / ml) . Transferir os pratos para a 37 ° C incubadora umidificada para permitir neuroblastos para anexar durante a noite. </li><li> Substituir NSC mídia contendo VEGF (20 ng / ml), NT-3 (10 ng / ml), e BDNF (10 ng / ml) em dias alternados. Extensas redes de neurite, tendo células neuronais e células pigmentadas começarão a aparecer dentro de 2 semanas de cultivo contínuo e aumentar em número com o tempo, e poderia ser sustentado por mais de 3 meses. </li></ol> 7. Resultados representativos: Ácido retinóico (AR) é prestado suficiente para induzir hESCs mantido no sistema de cultura definida para a transição de pluripotência exclusivamente a um fenótipo neuroectodérmico (Fig. 2A). Após a exposição de hESCs indiferenciada à AR, todas as células dentro da colônia vai sofrer alterações a morfologiagrandes células diferenciadas que deixam expressar pluripotência associada a marcadores, como indicado por Oct-4, e começar a expressar vários neuroectoderma associados marcadores, como HNK1, AP2 e TrkC (Fig. 2B). Estas células grandes diferenciada continuarão a se multiplicar e as colônias irão aumentar de tamanho, procedendo-se espontaneamente para expressar o marcador precoce neuronal β-tubulina III (Fig. 2B). O marcador mais maduro neuronal Mapa-2 começará a aparecer em áreas das colônias, onde as células se acumularam (Fig. 2B). Coincidente com a aparência das células neuroectodérmico e diferenciação neuronal, o fator de transcrição específicos neuronal Nurr1, implicado na diferenciação neuronal dopaminérgica e ativação da tirosina hidroxilase (TH) gene 16, vai translocar para o núcleo (Fig. 2B). Depois de separado, o hESCs RA-tratados formarão flutuante aglomerados celulares (neuroblastos) em um culto de suspensãoure para continuar o processo de diferenciação neural. Após a remoção de bFGF e depois permitir a neuroblastos para anexar a uma placa de cultura de tecidos ou semeadas em um polimerizado laminina / colágeno 3-dimensional da matriz em um meio isento de soro definido, β-III-tubulina e Mapa-2-expressando, neurite de rolamento de células e células pigmentadas começarão a aparecer com um aumento drástico em termos de eficiência, em comparação com diferenciação multi-linhagem espontânea de hESCs sem tratamento sobre o mesmo período de tempo, e poderia ser sustentado por mais de três meses (Fig. 2C). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3273/3273fig1.jpg" /> Figura 1 Um esquema de bem-controlados de indução eficiente de células-tronco pluripotentes humanas exclusivamente a uma linhagem particular clinicamente relevante pelo simples fornecimento de pequenas moléculas. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3273/3273fig2.jpg" /> Figura 2 <stroácido&gt; ng retinóico induz especificação linhagem neural e progressão neuronal direta de pluripotência sob condições definidas. (A) Esquema mostrando a linha do tempo de protocolo de dirigido diferenciação neuronal de hESCs. (B) Após a exposição de hESCs indiferenciada ao ácido retinóico (AR), sob o sistema de cultura definido, grande diferenciados Oct-4 (vermelho) células negativas dentro da colônia começaram a surgir, em comparação com o mock-tratados (DMSO) hESCs como o controle . RA-induzida diferenciada células Oct-4-negativos começaram a expressar HNK-1 (vermelho), AP2 (vermelho), TrkC (verde), e depois β-tubulina III (vermelho), consistente com a diferenciação neuroectodérmico cedo. Estas células continuou a amadurecer, em última análise expressando o marcador neuronal Mapa-2 (verde), geralmente em áreas onde as células começaram a se acumular. Coincidente com a aparência das células neuroectodérmico e diferenciação neuronal, o fator de transcrição específicos neuronal Nurr1 (verde), implicados nadiferenciação neuronal dopaminérgica e ativação da tirosina hidroxilase (TH) gene, translocada para o núcleo. Todas as células são mostrados por DAPI coloração de seus núcleos (azul). (C) induz a diferenciação de tratamento RA em direção a uma linhagem neuronal com alta eficiência, avaliada pela extensa rede de neuritos-bearing células que expressam β-tubulina III (vermelho) e Map-2 (verde, mostrado em uma matriz 3-dimensionais). Setas indicam células pigmentadas típico daqueles no SNC. Todas as células são mostrados por DAPI coloração de seus núcleos (azul) na inserções. Barras de escala: 0,1 mm.

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Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+somatic+cells+to+pluripotency+with+defined+factors.">Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors.</a> Nature. 451, 141-146 (2008).</li></ol>

Os autores declaram interesses conflitantes. XHP é o fundador da Xcelthera. XHP e EYS têm propriedades intelectuais relacionadas com hESCs.

Um dos grandes desafios tanto para estudos de desenvolvimento e tradução clínica tem sido a forma de canalizar o potencial de diferenciação gama de células-tronco pluripotentes humanas a um fenótipo desejado de forma eficiente e previsível. Apesar de tais células podem se diferenciar espontaneamente in vitro em células de todas as camadas germinativas, passando por uma fase agregado multi-linhagem, apenas uma pequena fração de células perseguir um 1,4 linhagem dada. Naqueles agregados CTEh derivados, o aparecimento simultâneo de uma quantidade substancial de amplamente divergentes tipos de células indesejadas que podem residir em três folhetos embrionários, muitas vezes faz com que o surgimento de fenótipos desejados não só ineficiente, mas incontroláveis ​​e não confiável também. Embora linhagens cardíaco e neural foram derivados em relatórios anteriores, no entanto, a ineficiência na geração de células especializadas, por meio de germes camada de indução de células pluripotentes e alto risco de tumorigenicidade seguintes transplantation têm impedido de nova tradução clínica. As linhas CTEh inicialmente foram obtidos e mantidos em co-cultura com crescimento de fibroblastos de rato preso embrionárias (MEFs) 4. Apesar de alimentador humanas diversas, alimentador-livre, e sistemas de cultura quimicamente formuladas têm sido desenvolvidos para hESCs 11-13, os elementos necessários e suficientes para sustentar a auto-renovação das células pluripotentes humanas permanecem sem solução. Estas células de alimentação exógena e reagentes biológicos ajudam a manter o crescimento estável a longo prazo de hESCs indiferenciada, enquanto máscara a capacidade das células pluripotentes a responderem aos sinais de desenvolvimento. Manter hESCs indiferenciado em um sistema de cultura definida biológicos livre que permite a expansão fiel e diferenciação direta controlável é uma das chaves para a sua utilidade terapêutica e potenciais. RA não foi suficiente para induzir a diferenciação neuronal de hESCs indiferenciada mantido sob Condit anteriormente relatadosíons contendo células de alimentação exógena. Embora linhagens neural aparecer em um estágio relativamente inicial na diferenciação CTEh, tratando CTEh diferenciadas multi-linhagem agregados (corpos embrióides) com AR apenas um ligeiro aumento do baixo rendimento dos neurônios 1, 14, 15. A fim de alcançar uniformemente conversão de células pluripotentes estaminais humanas a uma linhagem especial, empregamos um sistema de cultura definido capaz de segurar a proliferação de hESCs indiferenciado para identificar as condições para o bem-controlados de indução eficiente de hESCs pluripotentes exclusivamente para uma determinada linhagem clinicamente relevante pelo simples fornecimento de pequenas moléculas (Fig. 1, fig. 2). Futuros estudos revelarão moléculas controle genéticas e epigenéticas no desenvolvimento do SNC humano como alternativas, que podem pavimentar o caminho para o controle de molécula pequena mediada direta e modulação do destino pluripotentes CTEh quando derivar linhagens clinicamente relevantes para terapias regenerativas. RA sem tratamento, 1-5HESCs% serão submetidos a diferenciação espontânea em neurônios 1, 14, 15. Com o tratamento RA, temos sido capazes de gerar&gt; 95% embrionárias progenitores neurais e de neurônios a partir de hESCs mantido sob uma cultura define em um processo que pode emular o desenvolvimento embrionário humano 14. Recentemente, conhecido destino neural-determinação genes têm sido usados ​​para transdifferentiate fibroblastos de rato adulto em progenitores neurais e neurônios com uma baixa eficiência variando 0,5-8% 17, 18. No entanto, as células somáticas reprogramadas têm sido historicamente associada com a expressão do gene anormal e senescência acelerada com utilidade terapêutica prejudicada 19-21. Finalmente, o protocolo que estabelecemos aqui é limitado a hESCs pluripotentes derivadas da massa celular interna (ICM) ou epiblasto do blastocisto humano 4, não se aplicar a outras células pluripotentes, incluindo animais originou-CES, CES derivadas de anteriores mórula (oito células) em estágio embriões 22, e ArtifAs células reprogramadas icially 23.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comments (opcional) </th></tr><tr><td> Gelatina </td><td> Sigma </td><td> G1890 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD biociência </td><td> 356231 </td><td> Fator de crescimento reduzida </td></tr><tr><td> Laminina humana </td><td> Sigma </td><td> L6274 </td><td></td></tr><tr><td> all-trans-ácido retinóico </td><td> Sigma </td><td> R2625 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 10565018 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 31053036 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM-KO </td><td> Invitrogen </td><td> 10829018 </td><td></td></tr><tr><td> Knock-out substituição de soro </td><td> Invitrogen </td><td> 10828028 </td><td></td></tr><tr><td> MEM solução aminoácido não essencial (MNAA, 100X) </td><td> Invitrogen </td><td> 11140050 </td><td></td></tr><tr><td> MEM ummino solução ácidos (MEAA, 100X) </td><td> Invitrogen </td><td> 11130050 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoetanol </td><td> Invitrogen </td><td> 21985023 </td><td></td></tr><tr><td> Albumax </td><td> Invitrogen </td><td> 11020021 </td><td></td></tr><tr><td> Ácido ascórbico </td><td> Sigma </td><td> A4403 </td><td></td></tr><tr><td> Transferrina humana </td><td> Sigma </td><td> T8158 </td><td></td></tr><tr><td> Humana bFGF </td><td> PeproTech </td><td> AF-100-18B </td><td></td></tr><tr><td> Insulina humana </td><td> Invitrogen </td><td> 12585014 </td><td></td></tr><tr><td> Humana ativina A </td><td> PeproTech </td><td> 120-14E </td><td></td></tr><tr><td> Humana BDNF </td><td> PeproTech </td><td> AF-450-02 </td><td></td></tr><tr><td> Humano VEGF </td><td> PeproTech </td><td> AF-100-20 </td><td></td></tr><tr><td> Humana NT-3 </td><td> PeproTech </td><td> 450-03 </td><td></td></tr><tr><td> Heparina </td&gt; <td> Sigma </td><td> H5284 </td><td></td></tr><tr><td> N-2 suplemento (100X) </td><td> Invitrogen </td><td> 17502048 </td><td></td></tr><tr><td> 6-bem placa de fixação ultralow </td><td> Corning </td><td> 3471 </td><td></td></tr><tr><td> 6 bem-placa </td><td> Corning </td><td> 3516 </td><td></td></tr></tbody></table>

efficient derivation of human neuronal progenitors and neurons from pluripotent human embryonic stem cells with small molecule induction

Há uma grande necessidade insatisfeita para uma fonte de células clinicamente adequado humana neuronal para reparo ou regeneração do sistema nervoso central, danificada (CNS) a estrutura e os circuitos na indústria de hoje de saúde. Terapias baseadas em células uma grande promessa para restaurar o tecido nervoso e perdeu a função de doenças do SNC. No entanto, as terapias celulares com base no SNC derivados células-tronco neurais têm encontrado restrição da oferta e dificuldade de uso na prática clínica devido à sua capacidade de expansão limitada da cultura e plasticidade falhando após extensa 03/01 passaging. Apesar de alguns resultados positivos, o CNS-derivadas de células-tronco neurais (hNSCs) parecem exercer seus efeitos terapêuticos principalmente por sua não-neuronal através de progênies tróficos produção e moléculas neuroprotetor para resgatar as células endógenas 1-3. Alternativamente, pluripotentes células estaminais embrionárias humanas (hESCs) curas oferecer para uma ampla gama de distúrbios neurológicos por supplying a diversidade de tipos humanos de células neuronais no SNC em desenvolvimento para a regeneração 1,4-7. No entanto, como canalizar o potencial de diferenciação gama de hESCs pluripotentes de forma eficiente e previsível para um fenótipo desejado tem sido um grande desafio tanto para estudo de desenvolvimento e tradução clínica. Abordagens convencionais dependem de multi-linhagem inclinação de células pluripotentes através da diferenciação espontânea germe de camada, resultando em ineficiência e incontrolável linhagem compromisso, que é muitas vezes seguido de heterogeneidade fenotípica e instabilidade, portanto, um risco elevado de tumorigenicidade 7-10. Além disso, indefinido estrangeiros / animal suplementos biológicos e / ou alimentadores que tenham sido tipicamente usadas para o isolamento, expansão e diferenciação de hESCs pode fazer uso direto de tais células especializadas enxertos em pacientes problemáticos 11-13. Para superar esses obstáculos, temos resolvido os elementos de um sistema de cultura definidas necessárias e suficientes para sustaining o pluripotence epiblasto de hESCs, servindo como uma plataforma para a derivação de novo de hESCs clinicamente adequado e eficaz direcionando hESCs tais uniformemente para linhagens clinicamente relevante por pequenas moléculas 14 (consulte um esquema na figura 1.). Ácido retinóico (AR) não induz a diferenciação neuronal de hESCs indiferenciada mantidos em alimentadores de 1, 14. E, ao contrário CES mouse, tratando CTEh diferenciadas corpos embrióides (EBs) só aumenta um pouco o baixo rendimento dos neurônios 1, 14, 15. No entanto, após a triagem de uma variedade de pequenas moléculas e fatores de crescimento, verificou-se que tais condições definidas prestados ácido retinóico (RA) suficiente para induzir a especificação de neuroectoderma direta de hESCs pluripotentes que mais progrediu para neuroblastos que gerou humana progenitores neurais e neurônios na SNC em desenvolvimento com alta eficiência (Fig. 2). Nós definimos as condições para a indução de neuroexplosões diretas de hESCs pluripotentes sem uma intervenção multi-estágio corpo linhagem embrióides, permitindo bem controlados derivação eficiente de uma grande oferta de células neuronais humanas em todo o espectro de estágios de desenvolvimento para a célula-base terapêutica.

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Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Nós estabelecemos um protocolo para indução de neuroblastos direta de pluripotentes células estaminais embrionárias humanas mantidas sob condições definidas com pequenas moléculas, que permite a derivação de uma grande oferta de recursos humanos progenitores neurais e células neuronais tipos no desenvolvimento neural do SNC para reparação.

Derivação eficiente dos recursos humanos Progenitores Neuronal e Neurônios de pluripotentes células estaminais embrionárias humanas com a indução de moléculas pequenas

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

Labeling DiOLISTIC de Neurônios de roedores e não-humanos fatias do cérebro do primata

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Neurociência

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

A especificação de telencefálicos neurónios glutamatérgicos de células-tronco pluripotentes humanas

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Derivação sem alimentador de células da crista neural progenitoras pluripotentes humanas de células-tronco

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

Dirigido neurônios dopaminérgicos Diferenciação de Células-Tronco pluripotentes humanas

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversão de pilhas de haste pluripotentes induzidas humanas (iPSCs) em neurônios de motor espinal e craniano funcionais usando vetores de PiggyBac

We describe here a method to obtain functional spinal and cranial motor neurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Direct conversion into ...

Neuronal Differentiation from Mouse Embryonic Stem Cells In vitro

Diferenciação neuronal de células-tronco embrionárias do rato in vitro

The neural differentiation of mouse embryonic stem cells (mESCs) is a potential tool for elucidating the key mechanisms involved in neurogenesis and ...

Derivation, Expansion, Cryopreservation and Characterization of Brain Microvascular Endothelial Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Derivação, Expansão, Criopreservação e Caracterização de Células Endoteliais Microvasculares Cerebrais de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas Humanas

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) can be differentiated from human induced pluripotent stem cells (iPSCs) to develop ex vivo cellular models ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Transplante Sub-Retiniano de Tecido Retiniano Derivado de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Modelo Animal de Grande Porte Felino

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

Generation of Human Neurons and Oligodendrocytes from Pluripotent Stem Cells for Modeling Neuron-Oligodendrocyte Interactions

Geração de neurônios humanos e oligodendrócitos a partir de células-tronco pluripotentes para modelagem de interações neurônio-oligodendrócitos

In Alzheimer&#8217;s disease (AD) and other neurodegenerative disorders, oligodendroglial failure is a common early pathological feature, but how it ...

Human Microglia-like Cells: Differentiation from Induced Pluripotent Stem Cells and In Vitro Live-cell Phagocytosis Assay using Human Synaptosomes

Human Microglia-like Cells: Differentiation from Induced Pluripotent Stem Cells and In Vitro Live-cell Phagocytosis Assay using Human Synaptosomes

Células Semelhantes à Microglia Humana: Diferenciação de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas e Ensaio de Fagocitose de Células Vivas In Vitro usando Sinaptossomos Humanos

Microglia are the resident immune cells of myeloid origin that maintain homeostasis in the brain microenvironment and have become a key player in multiple ...