Name: fsl constructs: a simple method for modifying cell/virion surfaces with a range of biological markers without affecting their viability
Uploaded: 2011-08-05T15:00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about FSL Constructs: A Simple Method for Modifying Cell/Virion Surfaces with a Range of Biological Markers Without Affecting their Viability at JoVE.com

המחברים מודים דן ובס מ סיגמא אולדריץ להצגת וידאו. אנו מודים גם דון סניף, Evgenii צ&#39;רנישב, סקוט Chesla, אליזבת Hadac, אמנדה הריסון, דמיאן היתקוט, אניקה Hult, צ&#39;ואן צ&#39;ינג-Lan, סוזנה מקינטוש, Sarvani Komarraju, אלנה Korchagina, קרוליין אוליבר, מרטין אולסון, סטיבן פרקר, איגור Rodinov, אלכסנדר Tuzikov, ואלינור וויליאמס לתוצאות שלהם תרומות סינתזה העיצוב, של מבנים FSL וקביעת הפעילות הביולוגית.

<ol>
	<li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy.">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 573-587 (2007).</li><li>Strable, E., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modification+of+viruses+and+virus-like+particles.">Chemical modification of viruses and virus-like particles.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 327, 1-21 (2009).</li><li>Henry, S., Bovin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+synthetic+peptidolipids,+glycolipids+and+other+lipid-linked+structures+to+create+designer+red+cells.">The development of synthetic peptidolipids, glycolipids and other lipid-linked structures to create designer red cells.</a> Transfusion. 48, 194A-194A (2008).</li><li>Frame, T., Carroll, T., Korchagina, E., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+glycolipid+modification+of+red+blood+cell+membranes.">Synthetic glycolipid modification of red blood cell membranes.</a> Transfusion. 47, 876-882 (2007).</li><li>Hult, A. K., Frame, T., Henry, S., Olsson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+evaluation+of+red+blood+cells+transformed+with+variable+amounts+of+synthetic+A+and+B+glycolipids.">Flow cytometry evaluation of red blood cells transformed with variable amounts of synthetic A and B glycolipids.</a> Vox Sang. 95, 180-180 (2008).</li><li>Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+red+blood+cells+for+laboratory+quality+control+use.">Modification of red blood cells for laboratory quality control use.</a> Curr. Opin. Hematol. 16, 467-472 (2009).</li><li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+neutralization+of+anti-A+and+successful+transfusion+of+A+antigen+incompatible+red+cells+in+an+animal+model.">In vivo neutralization of anti-A and successful transfusion of A antigen incompatible red cells in an animal model.</a> Transfusion. , (2011).</li><li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+transfusion+reactions+and+predicting+in+vivo+cell+survival+with+kodecytes.">Modeling transfusion reactions and predicting in vivo cell survival with kodecytes.</a> Transfusion. , (2011).</li><li>Heathcote, D., Carroll, T., Wang, J. J., Flower, R., Rodionov, I., Tuzikov, A., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+antibody+screening+cells,+MUT+Mur+kodecytes,+created+by+attaching+peptides+onto+erythrocytes.">Novel antibody screening cells, MUT+Mur kodecytes, created by attaching peptides onto erythrocytes.</a> Transfusion. 50, 635-641 (2010).</li><li>Hadac, E. M., Federspiel, M. J., Chernyy, E., Tuzikovb, A., Korchagina, E., Bovin, N. V., Russell, S. J., Henry, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescein+and+radiolabeled+Function-Spacer-Lipid+constructs+allow+for+simple+in+vitro+and+in+vivo+bioimaging+of+enveloped+virions.">Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions.</a> J Virol Meth. 10, (2011).</li><li>Blake, D., Lan, A., Love, D., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorophore-kodecytes+-+fluorescent+function-spacer-lipid+(FSL)+modified+cells+for+in+vitro+and+in+vivo+analyses.">Fluorophore-kodecytes - fluorescent function-spacer-lipid (FSL) modified cells for in vitro and in vivo analyses.</a> FEBS J.. 277, 199-199 (2010).</li><li>Harrison, A. L., Olsson, M. L., Brad Jones, R., Ramkumar, S., Sakac, D., Binnington, B., Henry, S., Lingwood, C. A., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+globotriaosylceramide+analogue+inhibits+HIV-1+infection+in+vitro+by+two+mechanisms.">A synthetic globotriaosylceramide analogue inhibits HIV-1 infection in vitro by two mechanisms.</a> Glycobiology. 27, 515-524 (2010).</li><li>Barr, K., Diegel, O., Parker, S., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function-Spacer-Lipid+(FSL)+constructs+enable+inkjet+printing+of+blood+group+antigens.">Function-Spacer-Lipid (FSL) constructs enable inkjet printing of blood group antigens.</a> FEBS J. 277, 235-235 (2010).</li><li>Lan, C. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Modeling inflammatory bowel disease [dissertation]. , (1988).</li></ol>

דבורה א &#39;בלנק סטיבן מ&#39; הנרי העובדים ובעלי המניות של KODE ביוטק מוגבלת בעל פטנט של הטכנולוגיה KODE. דן ובס הוא עובד של סיגמא אולדריץ, אשר מימנה את הייצור של מאמר זה וידאו.

תאים שינוי ו virions עם בונה FSL היא טכניקה פשוטה מאוד חזקים 3-11. כדי לתאר ולהבחין FSL לבנות תאים שונה ו virions מתאי ללא שינוי, הם מכונים kodecytes ו kodevirions בהתאמה 6-10, אך רק כאשר הקבוצה הציגה תפקודית ניתן להראות להיות נוכח על הממברנה שלהם. כאשר kodecytes מיוצרים עם ריכוזים שונים של מבנים FSL, הם יכולים להיות מכונה על ידי ריכוז של הפתרון FSL לבנות השתמשו כדי ליצור אותם, למשל 15 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​kodecytes, או אם אחד או יותר FSL לאחר מכן נעשה שימוש במונח משולב, לדוגמא: A + ביוטין kodecytes 7,8. כאשר תאים שונים כדי להשוות, לרבות סוג תא בתיאור מומלץ, למשל אדום ביוטין תא kodecytes או kodecytes ביוטין רירית הרחם 7,8. למרות תהליך הכניסה היא מאוד חזקה הכניסה (אמנם עם תעריפים שונים) תתרחש על פני טווח טמפרטורה גדול 4-37 ° C ו בתוך דקות עד שעות, כדי להשיג שליטה הכניסה לשחזור קפדנית של זמן מגע, טמפרטורה, ריכוז FSL ( כולל ניסוח diluent), וכן ריכוז במידה פחותה תא נדרשים. עד היום, כל המבנים FSL ניתן להשתמש כדי לשנות את התאים על ידי טכניקה זהה 4-11, אולם צפוי כי בתנאים מסוימים יהיו נוחים יותר זרימת עבודה ו / או בדרישות הטיפול האופטימלי של התאים / virions להיות שונה . הריכוז המדויק FSL כדי להשיג את האפקט הרצוי צריך להיקבע על ידי המשתמש 4. FSL כתוצאה לבנות תאים שונה / virions בדרך כלל ניתן להשתמש באותו אופן כמו תא virion ללא שינוי / במערכות ביולוגיות או אנליטי 4-11. כמו בונה FSL יהיה לאט elute ממשטחי שונה כאשר במגע עם בתמיסות 7,8, או להיות נצרך על ידי תאים פעילים 11, נושאים אלה יש לקחת בחשבון ביחס לרמת האות או פעילות שהושגו על פני תקופות זמן. Kodecytes יכול להיות קבוע (למשל glutaraldehyde / פורמלין) לאחר הכניסה בתנאי מקבע אינו מכיל שומנים משחררי ממיסים את הקבוצה פונקציונלי תואם מקבע. תאים קבוע לחילופין יכול להיות שונה עם בונה FSL. בנוסף לשינוי של משטחי תאים virion בונה FSL יכול גם להיות חדורים ישירות למחזור הדם של חיות מעבדה גרימת שינוי vivo של תאים במחזור 7 ו לעכב 12 וירוסים, רעלים, 12 ונוגדנים 7. בונה FLS יש גם שימש לקשט ליפוזומים והוא יכול להיות מודפס על גבי משטחי נייר 13, שם הם לשתק, ולאחר מכן יכול לשמש מבחני אבחון. היכולת לשנות בקלות תאים חיים עם מגוון הולך וגדל של בונה FSL צריך להוכיח להיות מחקר שימושי כלי פיתוח לחקר הביולוגיה פני התא.

<img src="/files/ftp_upload/3289/3289table1.jpg" alt="טבלה 1" /> טבלה 1. זמין מסחרית בונה FSL המתואר במאמר זה.

fsl constructs: a simple method for modifying cell/virion surfaces with a range of biological markers without affecting their viability

היכולת לשנות / לדמיין משטחים ביולוגיים, ולאחר מכן ללמוד את התא שונה / virion במגוון במבחנה בסביבות vivo חיונית להשגת תובנה נוספת לתוך הפונקציה של מולקולות ספציפיות או את הישות כולה. מחקרים של שינוי פני השטח ביולוגיים מוגבלים בדרך כלל הנדסה גנטית של האורגניזם או את הקובץ המצורף קוולנטיים של moieties כימית 1,2 שטח פני התא. אולם אלה טכניקות מסורתיות לחשוף את התא המגיבים כימיים, או שהם דורשים מניפולציה משמעותי כדי להשיג את התוצאה הרצויה, מה שהופך אותם מסורבל, והם עשויים גם להשפיע על הכדאיות בשוגג / הפונקציונליות של התא שונה. שיטה פשוטה מזיק לשנות את פני השטח של התאים נדרשת. לאחרונה טכנולוגיה חדשה, טכנולוגיה KODE הציגה מגוון של מבנים הרומן המורכב משלושה מרכיבים: קבוצה ראש פונקציונלי (F), spacer (S) וזנב השומנים (L) ידועים כמו פונקציה ליפידים-Spacer או FSL constructs3. Spacer (S) נבחרה לספק לבנות כלומר מסיסות במים, עדיין יהיה ספונטני ביציבות לשלב קרום. FSL לבנות moieties תפקודית (F) עד כה כוללים מגוון של saccharides כולל קבוצה הקשורות דם הגורמים, חומצות sialic, סוכרים hyaluronan, fluorophores, ביוטין, radiolabels, וכן מגוון של פפטידים 3-12. בונה FSL שימשו עוברים, זרע שינוי, דג הזברה, לתאי האפיתל / רירית הרחם, כדוריות דם אדומות, ו virions ליצור בקרות איכות מערכות ולוחות אבחון, לשנות הדבקה תא / אינטראקציה / הפרדה / immobilization, ועל במבחנה vivo הדמיה של תאים / virions 3-12. התהליך של שינוי תאים / virions הוא גנרי ופשוט ביותר. ההליך הנפוץ ביותר הוא הדגירה של תאים (בתקשורת חינם שומנים בדם) עם פתרון עבור FSL בונה במשך 1-2 שעות ב 37 ° C 40-10. במהלך הדגירה FSL המבנים באופן ספונטני לשלב הממברנה, והתהליך הושלם. כביסה היא אופציונלית. תאים שונה על ידי בונה FSL ידועים כמו kodecytes 6-9, בעוד virions הם kodevirions 10. FSL בונה כמו חליטות ישיר kodecytes / kodevirions נעשה שימוש במודלים של בעלי חיים ניסיוניים 7,8,10. כל kodecytes / kodevirions להופיע כדי לשמור על חיוניות הרגיל שלהם ואת הפונקציונליות תוך השגת את הפונקציה החדשה של מחצית F 7,8,10,11. השילוב של dispersibility בתקשורת ביולוגית, התאגדות ספונטנית לתוך קרום התא, וכן רעילות נמוכה נראית לעין, שעושה FSL בונה כלי מחקר חשוב למחקר של תאים virions.

Watch this Scientific Journal Video about FSL Constructs: A Simple Method for Modifying Cell/Virion Surfaces with a Range of Biological Markers Without Affecting their Viability at JoVE.com

FSL Constructs: A Simple Method for Modifying Cell/Virion Surfaces with a Range of Biological Markers Without Affecting their Viability

פונקציה-Spacer-ליפידים (FSL) בונה לאפשר את תכונות פני השטח של תאים חיים virions להיות שונה ללא אובדן חיוניות. השיטה דורשת מגע פשוט רק פתרון לבנות FSL עם תא / virion ושילוב משטח יציב ספונטנית מתרחשת.

FSL בונה: שיטה פשוטה שינוי Cell / Virion משטחים עם מגוון רחב של סמנים ביולוגיים מבלי להשפיע ליכולת הקיום שלהם

The ability to modify/visualize biological surfaces, and then study the modified cell/virion in a range of in vitro and in vivo environments is essential ...

Research

JoVE Journal

Biology

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing: שיטה פשוטה genotyping מדויק

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes

יישום של C. elegans Assay ניוון Neuron דופמין עבור אימות של מחלת פרקינסון גנים אפשריים

Improvements to the diagnosis and treatment of Parkinson's disease (PD) are dependent upon knowledge about susceptibility factors that render populations ...

Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs

המצאה של Myogenic בונה רקמות מהונדסות

Despite the fact that electronic pacemakers are life-saving medical devices, their long-term performance in pediatric patients can be problematic owing to ...

A Lectin HPLC Method to Enrich Selectively-glycosylated Peptides from Complex Biological Samples

שיטה לקטינים HPLC להעשיר פפטידים סלקטיבי-glycosylated מ דגימות ביולוגיות מורכבות

Glycans are an important class of post-translational modifications. Typically found on secreted and extracellular molecules, glycan structures signal the ...

Visualizing Single-molecule DNA Replication with Fluorescence Microscopy

חזותי יחיד מולקולת הדנ&quot;א שכפול עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי

We describe a simple fluorescence microscopy-based real-time method for observing DNA replication at the single-molecule level. A circular, forked DNA ...

Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems

סינתזה כיול nanoprobes זרחני עבור הדמיה חמצן במערכות ביולוגיות

Oxygen measurement by phosphorescence quenching [1, 2] consists of the following steps: 1) the probe is delivered into the medium of interest (e.g. blood ...

Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

Lineage תיוג של תאים דג הזברה עם לייזר Uncagable והעמסת dextran

A central problem in developmental biology is to deduce the origin of the myriad cell types present in vertebrates as they arise from undifferentiated ...

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

שיטה פשוטה הדמיה ארבידופסיס מותיר שימוש Perfluorodecalin כנושאת הדמיה Infiltrative

The problem of acquiring high-resolution images deep into biological samples is widely acknowledged1. In air-filled tissue such as the spongy mesophyll of ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

פרוטוקול פשוט לחילוץ Hemocytes מזחלי Wild

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

Recombineering Homologous Recombination Constructs in Drosophila

Recombineering Homologous Recombination Constructs in Drosophila

Recombineering הומולוגי רקומבינציה בבונה<em&gt; דרוזופילה</em

The continued development of techniques for fast, large-scale manipulation of endogenous gene loci will broaden the use of Drosophila melanogaster as a ...