Name: rna isolation of pseudomonas aeruginosa colonizing the murine gastrointestinal tract
Uploaded: 2011-09-28T12:00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract at JoVE.com

Detta arbete har finansierats av National Institutes of Health bidrag AI62983 (AYK), AI22535 (GPB).

1. Murina Modell av P. aeruginosa GI Colonization och spridning <ol><li> C3H/HeN möss (6-8 v. gammal, kvinna, Harlan) behandlas med perorala antibiotika för att tömma kommensala flora och därefter mono-koloniserad med PA som tidigare beskrivits 4. </li></ol> 2. Skörd Murine cecal luminala Innehåll <ol><li> Doppa en rengjord rostfritt stål murbruk i ett flytande kväve bad. </li><li> Euthanize möss med koldioxid kvävning. </li><li> Säkert musen kadaver på en frigolit ombord och dusch med 95% etanol. Gör en mittlinjen längsgående snitt genom huden från bröstbenet till mellangården. Reflektera hud och bukhinna avslöja bukhålan. </li><li> Resect hela blindtarmen. Håll blindtarmen med pincett under den rostfria murbruk. Klippa båda ändarna av blindtarmen med dissektion sax. </li><li> Sätt in en P1000 pipettspets fylld med 1 ml cecal flushate buffert (10 mM TrisHCl, 1 mM EDTA och 200 mM NaCl) 5 i proximala änden av blindtarmen. Spola cecal flushate buffert och cecal luminala innehållet i den rostfria murbruk. 1 ml cecal flushate buffert kommer att vara tillräcklig för att spola alla cecal innehåll. Cecal flushate innehållet fryser omedelbart efter att komma i kontakt med murbruk. </li><li> Slipa cecal flushate innehåll med en steril mortelstöt. </li><li> Placera marken frusen cecal luminala innehållet i ett 50 ml polypropylen koniska röret nedsänkt i en torr is / etanol bad. </li><li> Upprepa steg 2.2 till 2.7 för varje ytterligare mus. </li><li> Förvaras vid -80 ° C. </li></ol> 3. Bakteriell RNA Isolering <ol><li> Värm 1 volym (baserat på slutlig volym på två cecal luminala innehåll, ca 3 ml) av syra fenol / kloroform (5:1, v / v) i en 50 ml Oak Ridge centrifugrör med locket säkras i parafilm i en 65 ° C vattenbad. </li><li> Koka 0,5 volym lyseringsbuffert (2% SDS, 16 mM EDTA och 200 mM NaCl) 6 finns i en 50 ml polypropylen koniska röret i 5 minuter. </li><li> Tillsätt kokande lyseringsbuffert att cecal luminala innehåll. Homogenisera. Koka i 5 minuter med periodisk vortexa. </li><li> Lägg till 100 ° C cecal Innehållet / lysering provet till 65 ° C syra fenol / kloroform i Oak Ridge centrifugrör. Seal keps med parafilm. </li><li> Inkubera vid 65 ° C i 10 minuter med periodisk vortexa (varje 2 minuter). </li><li> Centrifugera provet vid 2500 g vid 4 ° i 15 minuter. </li><li> Töm vattenfasen (undviker någon av de vita gränssnittet) till ett nytt 50 ml Oak Ridge centrifugen. Volymen i vattenfasen kommer att vara cirka 50% av den totala volymen cecal innehåll, lyseringsbuffert och syra fenol / kloroform. Tillsätt en motsvarande volym av syra fenol / kloroform. </li><li> Seal keps med parafilm och blanda väl genom att vortexa med hög hastighet. </li><li> Centrifugera provet vid 2500 g vid 4 ° i 15 minuter. </li><li> Upprepa steg från 3,7 till 3,9 tills det inte finns något synligt vitt gränssnitt mellan vattenfasen och den organiska fasen. </li><li> Töm vattenfasen till en ny 50 ml Oak Ridge centrifugen. Tillsätt en motsvarande volym av kloroform / Isoamyl alkohol (24:1, v / v). </li><li> Täta locket och blanda väl genom att vortexa. </li><li> Centrifugera provet vid 2500 g vid 4 ° i 15 minuter. Ta bort vattenfasen (volymen kommer att vara cirka 50% av den totala reaktionen volym) till 15 ml polypropylen koniska rör och tillsätt en lika stor volym av isopropanol. </li><li> Inkubera vid -20 ° i minst 2 timmar eller över natten. </li><li> Centrifugera provet vid 2500 g vid 4 ° i 45 minuter. En gel-liknande pellets kommer att ligga på botten av röret. Avlägsna supernatanten. </li><li> Tvätta pelleten med 1 ml iskall 70% etanol. Vortex. Centrifugera provet vid vid 10000 g vid 4 ° i 5 minuter. </li><li> Avlägsna supernatanten och vänd röret att låta pellets torka i rumstemperatur i 10 minuter. </li><li> Resuspendera RNA pelleten i 200 ìl RNase-fritt vatten. </li></ol> 4. DNas Behandling (Turbo DNA-Free, Applied Biosystems) <ol><li> Tillsätt 20 l 10X Turbo DNas buffert och 2 l Turbo DNas och blanda försiktigt. </li><li> Inkubera vid 37 ° i 20 minuter. </li><li> Tillsätt 20 l återsuspenderad DNas inaktivering reagens och blanda väl. </li><li> Inkubera 5 minuter vid rumstemperatur, blandning ibland. </li><li> Centrifugera vid 10000 g vid rumstemperatur i 1,5 minuter och överför supernatanten till ett nytt mikrofugrör. </li><li> Lägg till en volym av kyla (4 °) syra fenol / kloroform och blanda väl genom att vortexa i 1 minut. </li><li> Centrifugera vid 12.500 g vid rumstemperatur i 2 minuter. </li><li> Överför vattenfasen till ett nytt rör och tillsätt 1 volym kloroform / Isoamyl alkohol (49:1 v / v), virvel. </li><li> Centrifugera vid 12.500 g vid rumstemperatur i 2 minuter. </li><li> Överför vattenfasen (ca 50% av den totala reaktionen volym) till ett nytt rör. </li><li> Tillsätt 0,1 volym 3M natriumacetat, pH 5,5 och2,5 volymer av iskall 100% etanol. Vortex. </li><li> Inkubera vid -20 ° i minst 2 timmar eller vid -80 ° i 30 minuter. </li><li> Centrifugera vid 12 tusen g under 30 minuter vid 4 ° </li><li> Avlägsna supernatanten. </li><li> Tvätta pelleten med 1 ml iskall 70% etanol genom att centrifugera i 5 minuter vid 10000 g vid 4 °. </li><li> Avlägsna supernatanten och lufttorka i 10 minuter. </li><li> Återsuspendera pelleten i 100 ìl RNase-fritt vatten. Kan behöva ske i 65 ° vattenbad till resuspendera och lös pelleten. </li><li> För att testa effekten av DNas behandling, kan en vanlig RT-PCR-reaktion för amplifiering av en ribosomala protein (eller annan referens gen) göras för behandlade och obehandlade prover, använder inga RT kontroller. </li></ol> 5. RNA Cleanup Steg (Qiagen, RNeasy Kit) <ol><li> Se sidorna 56-57 för Qiagen RNeasy Mini Handbook (4: e upplagan, april 2006). Följ som visas. </li></ol> 6. Representativa resultat Mängden bakterier totala RNA återvinns genom att använda det här protokollet är 2-3 mikrogram från två cecums. Den återvunna RNA är av tillräcklig kvantitet och kvalitet för senare qPCR, transkription profilering, och RNA Seq experiment. RNA renhet rutinmässigt utvärderas genom att mäta 260nm/280nm förhållandet 7 av provet, men den här metoden ger ingen information om RNA integritet. Den Agilent Bioanalyzer är en mikrofluidik-baserad plattform för dimensionering, kvantifiering och kvalitetskontroll av DNA, RNA, proteiner och celler, och använder en RNA integriteten metriska kallas RNA Integrity Number (RIN) 8. RNA extraheras med detta protokoll ger 260/280 nyckeltal som sträcker sig från 1,7 till 2,0 och RIN värden ≥ 7,0. Ett exempel på en Agilent Bioanalyzer analys av bakteriell RNA återvinnas genom detta protokoll visas i figur 1. <img src="/files/ftp_upload/3293/3293fig1.jpg" alt="Figur 1"/> Figur 1. Agilent Bioanalyzer electropherogram och gel-liknande bild av Pseudomonas aeruginosa totala RNA-prov isolerade och återhämtat sig från murina cecal innehåll. RIN 8,0.

<ol>
	<li>Bodey, G. P., Bolivar, R., Fainstein, V., Jadeja, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infections+caused+by+Pseudomonas+aeruginosa.">Infections caused by Pseudomonas aeruginosa.</a> Rev Infect Dis. 5, 279-279 (1983).</li><li>Bertrand, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endemicity,+molecular+diversity+and+colonisation+routes+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+intensive+care+units.">Endemicity, molecular diversity and colonisation routes of Pseudomonas aeruginosa in intensive care units.</a> Intensive Care Med. 27, 1263-1268 (2001).</li><li>Koh, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+in+vivo+transcription+profiling+for+identifying+Pseudomonas+aeruginosa+genes+needed+for+gastrointestinal+colonization+and+dissemination.">Utility of in vivo transcription profiling for identifying Pseudomonas aeruginosa genes needed for gastrointestinal colonization and dissemination.</a> PLoS One. 5, e15131-e15131 (2010).</li><li>Koh, A. Y., Priebe, G. P., Pier, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+murine+model+of+gastrointestinal+colonization+and+dissemination+in+neutropenia.">Virulence of Pseudomonas aeruginosa in a murine model of gastrointestinal colonization and dissemination in neutropenia.</a> Infect Immun. 73, 2262-2272 (2005).</li><li>Alexander, R. J., Raicht, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+total+RNA+from+human+stool+samples.">Purification of total RNA from human stool samples.</a> Dig Dis Sci. 43, 2652-2658 (1998).</li><li>Fitzsimons, N. A., Akkermans, A. D., de Vos, W. M., Vaughan, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+gene+expression+detected+in+human+faeces+by+reverse+transcription-PCR.">Bacterial gene expression detected in human faeces by reverse transcription-PCR.</a> J Microbiol Methods. 55, 133-140 (2003).</li><li>Manchester, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+UV+methods+for+measurement+of+protein+and+nucleic+acid+concentrations.">Use of UV methods for measurement of protein and nucleic acid concentrations.</a> Biotechniques. 20, 968-970 (1996).</li><li>Schroeder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RIN:+an+RNA+integrity+number+for+assigning+integrity+values+to+RNA+measurements.">The RIN: an RNA integrity number for assigning integrity values to RNA measurements.</a> BMC Mol Biol. 7, 3-3 (2006).</li><li>Turnbaugh, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+core+gut+microbiome+in+obese+and+lean+twins.">A core gut microbiome in obese and lean twins.</a> Nature. 457, 480-484 (2009).</li></ol>

Inga intressekonflikter deklareras.

RNA-extraktion som beskrivs här tillåter återvinning av tillräckliga mängder av högkvalitativa Pseudomonas aeruginosa RNA totala skördats från murina mag-tarmkanalen. Denna metod är inte begränsad till P. aeruginosa och kan potentiellt användas till andra bakterier. Återhämtningen av tillräcklig mikroorganismer från tarmen varierar betydligt från organism till organism. I vår murina modell, s. aeruginosa koloniserar vanligtvis murina magtarmkanalen på nivåer mellan 5 x 10 7 till 5 x 10 8 cfu / g avföring 4. Sedan återhämtade cecal innehållet är ungefär 0,5 gram, det uppskattade antalet P. aeruginosa återhämtat sig från två cecums är mellan 5 x 10 7 till 5 x 10 8 CFU. Om andra mikroorganismer används, skulle det vara klokt att kontrollera GI kolonisation nivåer och sedan beräkna antalet cecums som behövs för att återfå de riktade antal CFU. Det är också viktigt att notera att när du använder denna murina modell Antibiotikabehandlade möss inte är infekterade med PA har inga mätbara mängder av RNA isoleras från sina cecal innehåll. Vår mus modell av Pseudomonas aeruginosa mag kolonisation och försöker sprida att efterlikna patogenesen av P. aeruginosa bakteriemi i cancer och stamceller patienter. I denna patientgrupp är kommensala floran ofta utarmat sekundärt till behandling med antibiotika eller kemoterapeutiska behandling (t.ex. antibiotika utarmning av GI kommensala floran) resulterar i överväxt av patogena mikrober (t.ex. mono-förening med P. aeruginosa) och sedan påföljande spridning efter immunsystemet. Fördelar och begränsningar av denna mus modell har redan behandlats tidigare 4. Syftet med denna aktuella studien är att ge en metod för att isolera mikrobiell totala RNA från mag-tarmkanalen. Detta protokoll kan enkelt anpassas till andra murina modeller som studerar andra aspekter av mikrobiell patogenes i mag-tarmkanalen (dvs. commensal flora interaktioner, bakteriella effekter på inflammatorisk tarmsjukdom, etc.). En fördel med denna metod är införandet av flera lys steg inklusive frys / tö, mekaniska störningar (pulverisering med murbruk / stöt, homogenisering), kokning, och kemisk lys (t ex SDS). Trots de många lys steg, kan vissa mikroorganismer (framför allt grampositiva bakterier och svamp / jäst) kräva ytterligare mekaniska störningar. Efter den heta lys / syra fenol-kloroform inkubationen (steg 3,5), tillägg av kulor (0,1 mm för bakterier och / eller 0,5-0,7 mm för jäst) och en efterföljande pärla-slå steg bör vara tillräcklig för att lysera dessa organismer 9, 10. Med tanke på de komplicerade material som återvunnits från murina blindtarmen, de upprepade kalla acid-phenol/chloroform extraktioner (steg från 3,7 till 3,9) är absolut nödvändiga för att uppnå acceptabel RNA kvalitet och integritet för vidare reaktioner. Mellan 3-5 kallt acid-phenol/chloroform extraktioner kan krävas innan de vita gränssnittet mellan vattenfasen och den organiska fasen elimineras. Slutligen, en kombination av både DNase behandling (Steg 4) och RNeasy Cleanup Protocol (steg 5) är väsentliga för att avlägsna kontaminerande DNA och små icke-mRNA (5s och tRNA). Som nämnts tidigare är RNA återvinns genom att utnyttja detta protokoll av tillräcklig kvantitet och kvalitet för senare transkription profilering 3, qPCR (opublicerade) och RNA Seq (opublicerade) experiment.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th></tr><tr><td> Mortel </td><td> Fisher </td><td> 12-947-1 </td></tr><tr><td> Homogeniseringsblandare </td><td> Omni </td><td> TM-125 </td></tr><tr><td> Oak Ridge centrifugrör (50 ml) </td><td> Nalgene </td><td> 3119-0050 </td></tr><tr><td> Acid Fenol / Kloroform </td><td> Ambion </td><td> AM9720 </td></tr><tr><td> Kloroform </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C2432 </td></tr><tr><td> Isoamyl Alkohol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> W205702 </td></tr><tr><td> Isopropanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 190.764 </td></tr><tr><td> Diethyl pyrocarbonate (DEPC) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 40.718 </td></tr><tr><td> DNas </td><td> Ambion </td><td> AM2238 </td></tr><tr><td> RNeasy Kit </td><td> Qiagen </td><td> 74.104 </td></tr><tr><td> 3M Natriumacetat </td><td> Ambion </td><td> AM9740 </td></tr><tr><td> 100% etanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E7023 </td></tr></tbody></table>

rna isolation of pseudomonas aeruginosa colonizing the murine gastrointestinal tract

Pseudomonas aeruginosa (PA) infektioner leder till hög sjuklighet och dödlighet i hosts med nedsatt immunförsvar, såsom patienter med leukemi, svåra brännskador eller organtransplantationer 1. Hos patienter med hög risk att utveckla PA blodomloppet infektioner, är gastrointestinala (GI) tarmkanalen den huvudsakliga reservoaren för kolonisation 2, men de mekanismer genom vilka PA övergångar från en asymtomatisk kolonisera mikrob till en invasiv, och ofta dödliga, patogener är oklara. Tidigare utförde vi in vivo-experiment transkription profilering genom att återvinna PA mRNA från bakterieceller som bor i cecums av koloniserade möss 3 för att identifiera förändringar i bakteriellt genuttryck under förändringar värdens immunstatus. Som med alla transkription profilering experiment, är det hastighetsbegränsande steget i isolering av tillräckliga mängder av hög kvalitet mRNA. Med tanke på det överflöd av enzymer, skräp, rester mat och partiklar i mag-tarmkanalen, är utmaningen av RNA isolering skrämmande. Här presenterar vi en metod för tillförlitliga och reproducerbara isolering av bakteriell RNA återhämtat sig från murina mag-tarmkanalen. Denna metod använder en väletablerad murin modell av PA GI kolonisation och neutropeni-inducerad spridning 4. När GI kolonisation med PA bekräftas, möss är euthanized och cecal innehållet återvinns och blixt fryst. RNA extraheras sedan med hjälp av en kombination av mekaniska störningar, kokning, fenol / kloroform extraktioner DNas behandling och affinitetskromatografi. Kvantitet och renhet bekräftas av spektrofotometri (Nanodrop Technologies) och bioanalyzer (Agilent Technologies) (Fig. 1). Denna metod för GI mikrobiell RNA isolering kan lätt anpassas till andra bakterier och svampar också.

Watch this Scientific Journal Video about RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract at JoVE.com

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

En pålitlig metod för RNA isolering av<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Återhämtat sig från murina cecums beskrivs. Den återvunna RNA är av tillräcklig kvantitet och kvalitet för senare qPCR, transkription profilering, och RNA Seq experiment. Denna teknik kan anpassas för RNA isolering av andra intestinal mikrober.

RNA Isolering av Pseudomonas aeruginosa Kolonisera Murine mag-tarmkanalen

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-kultur modeller av Pseudomonas aeruginosa Biofilmer odlas på levande mänskliga Airway Cells

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa och Saccharomyces cerevisiae biofilm i Flow Cells

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Långsiktig Kronisk<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airway infektion hos möss

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Komma till den ljus sidan: In Vivo övervakning av Pseudomonas aeruginosa Biofilm infektioner i kroniska sår i en diabetiker hårlösa murina modell

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Replikering av beställt, Nonredundant bibliotek av Pseudomonas aeruginosa stam PA14 Transposon införande mutanter

Pseudomonas aeruginosa is a phenotypically and genotypically diverse and adaptable Gram-negative bacterium ubiquitous in human environments. P. aeruginosa ...

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Metoder för att upptäcka cytotoxiska amyloid följande infektion av pulmonell Endothelial celler av Pseudomonas aeruginosa

Patients who survive pneumonia have elevated death rates in the months following hospital discharge. It has been hypothesized that infection of pulmonary ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualisering av Candida albicans i murin mag-tarmkanalen med fluorescerande in situ hybridisering

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Culture of Small Colony Variant of Pseudomonas aeruginosa and Quantitation of its Alginate

Culture of Small Colony Variant of Pseudomonas aeruginosa and Quantitation of its Alginate

Kultur av liten kolonivariant av Pseudomonas aeruginosa och Antal av dess Alginate

Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic Gram-negative bacterial pathogen, can overproduce an exopolysaccharide alginate resulting in a unique phenotype ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

En fördröjd inokulering modell av kronisk pseudomonas aeruginosa Sår infektion

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...