Name: tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy
Uploaded: 2011-09-24T14:00:00
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Ce travail a été soutenu par une subvention de recherche des Instituts canadiens de recherche en santé (IRSC, la RdP-86 749). L. Liu est récipiendaire du Prix de nouveau chercheur des IRSC (MSH-95374).

1. Préparation de Chemoattractant en gel d&#39;agarose <ol><li> Pipeter 10 mL de 2 × PBS dans un tube conique de 50 ml, et de se réchauffer le tube en le plaçant dans un bécher contenant de l&#39;eau chaude. </li><li> Pipeter 10 mL d&#39;eau distillée et ajouter 0,4 g de poudre d&#39;agarose dans un autre tube conique de 50 ml (avec son bouchon légèrement desserré) et chauffer le mélange jusqu&#39;à ce que d&#39;ébullition dans un four à micro-ondes (pour ~ 1 min dans un four à micro-ondes de 700 watts) ...

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	<li>Liu, L., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+leukocyte+recruitment:+organ-specific+mechanisms+of+action.">Molecular mechanisms of leukocyte recruitment: organ-specific mechanisms of action.</a> Thromb. Haemost. 89, 213-220 (2003).</li><li>Petri, B., Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+leukocyte+recruitment:+an+in+vivo+perspective.">The physiology of leukocyte recruitment: an in vivo perspective.</a> J. Immunol. 180, 6439-6446 (2008).</li><li>Phillipson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+crawling+of+neutrophils+to+emigration+sites:+a+molecularly+distinct+process+from+adhesion+in+the+recruitment+cascade.">Intraluminal crawling of neutrophils to emigration sites: a molecularly distinct process from adhesion in the recruitment cascade.</a> J. Exp. Med. 203, 2569-2575 (2006).</li><li>Wong, C. H., Heit, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulators+of+leucocyte+chemotaxis+during+inflammation.">Molecular regulators of leucocyte chemotaxis during inflammation.</a> Cardiovasc. Res. 86, 183-191 (2010).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Bullen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+imaging+techniques+for+drug+discovery.">Microscopic imaging techniques for drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 7, 54-67 (2008).</li><li>Hazelwood, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entering+the+Portal:+Understanding+the+Digital+Image+Recorded+Through+a+Microscope.">Entering the Portal: Understanding the Digital Image Recorded Through a Microscope.</a> Imaging Cellular and Molecular Biological Functions. , 3-43 (2007).</li><li>Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-selectin+facilitates+emigration+and+extravascular+locomotion+of+leukocytes+during+acute+inflammatory+responses+in+vivo.">L-selectin facilitates emigration and extravascular locomotion of leukocytes during acute inflammatory responses in vivo.</a> J. Immunol. 165, 7164-7170 (2000).</li><li>Cara, D. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+as+a+tool+for+studying+recruitment+and+chemotaxis.">Intravital microscopy as a tool for studying recruitment and chemotaxis.</a> Methods Mol. Biol. 239, 123-132 (2004).</li><li>Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LSP1+is+an+endothelial+gatekeeper+of+leukocyte+transendothelial+migration.">LSP1 is an endothelial gatekeeper of leukocyte transendothelial migration.</a> J. Exp. Med. 201, 409-418 (2005).</li><li>Heit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+accelerates,+but+is+not+required+for,+neutrophil+chemotaxis+to+fMLP.">PI3K accelerates, but is not required for, neutrophil chemotaxis to fMLP.</a> J. Cell Sci. 121, 205-214 (2008).</li></ol>

Microscopie intravitale est l&#39;outil indispensable pour révéler les mécanismes cellulaires et moléculaires de recrutement des leucocytes pendant l&#39;inflammation. La visualisation quantitative pour la détermination des interactions leucocytes-endothélium dans les microvaisseaux des tissus translucides tels que le muscle crémaster et le mésentère reste le gold standard pour l&#39;application de la technique de 1,5. La microscopie à fond clair conventionnels intravitale a beaucoup uniques caract?...

Tableau: Matériaux, réactifs et équipements spécifiques <table border="1"><tr><td> Nom du réactif / équipements </td><td> Société </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Des tuyaux en polyéthylène, PE10 </td><td> Becton Dickinson </td><td> 427401 </td><td> ID 0.28mm x 0,61 mm OD </td></tr><tr><td> Encre de Chine </td><td> Speedball Art </td><td> Super Black </td><td> Pigments de carbone sans colorants 100% noir </td></tr><tr><td> Cautère </td><td> Aaron médicale </td><td> AA03 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Bayer HealthCare, Bayer Inc </td><td> DIN 02169592 </td><td></td></tr><tr><td> Le chlorhydrate de kétamine </td><td> Bioniche Animal Health Canada Inc </td><td> DIN 01989529 </td><td></td></tr><tr><td> Murin MIP-2 recombinante </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 452-M2 </td><td></td></tr><tr><td> WKYMVm </td><td> Phoenix Pharma, Inc </td><td> 072-12 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td> Ultrapure </td></tr><tr><td> Héparine </td><td> Sigma </td><td> H-3393 </td><td></td></tr><tr><td> Microscope droit </td><td> Olympus </td><td> BX61WI </td><td></td></tr><tr><td> 3CCD caméra vidéo couleur </td><td> SONY </td><td> DXC-990 </td><td></td></tr><tr><td> HD-DVD enregistreur vidéo </td><td> LG Electronics Inc </td><td> RH398H-M </td><td></td></tr><tr><td> Moniteur TV </td><td> LG Electronics Inc </td><td> 22LG30 </td><td></td></tr><tr><td> Circulateur d&#39;eau </td><td> Thermo Scientific </td><td> DC10 HAAKE </td><td></td></tr><tr><td> Pompe péristaltique </td><td> Gilson; Pharmacia </td><td> Gilson Minipuls 3; Pharmacia P-3 </td><td></td></tr><tr><td> Conseil crémaster </td><td> Université de la Saskatchewan </td><td></td><td> Home-made </td></tr></table>

tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy

Le recrutement des leucocytes circulants à partir du flux sanguin vers les tissus enflammés est un processus crucial et complexe de 1,2 inflammation. Dans le veinules post des tissus enflammés, les leucocytes d&#39;abord d&#39;attache et rouler sur la surface luminale de veinules mur. Rouler arrestation leucocytes sur l&#39;endothélium et subissent adhésion ferme en réponse à chimiokine ou chimiotactiques autre sur la surface des veinules. Beaucoup de leucocytes adhérents relocaliser sur le site initial de l&#39;adhésion au site d&#39;extravasation jonctionnelle dans l&#39;endothélium, un processus appelé intraluminale ramper 3. Suite à ramper, se déplacer à travers l&#39;endothélium des leucocytes (transmigration) et migrent dans les tissus extravasculaires vers la source de chimiotactique (chimiotactisme) 4. Microscopie intravitale est un outil puissant pour la visualisation des interactions leucocytes-endothélium in vivo et révèle les mécanismes cellulaires et moléculaires du recrutement des leucocytes 2,5. Dans ce rapport, nous fournissons une description détaillée de l&#39;utilisation de la microscopie intravitale fond clair de visualiser et de déterminer le processus détaillé de recrutement des neutrophiles chez la souris crémaster muscle en réponse à la pente d&#39;un facteur chimiotactique des neutrophiles. Pour induire le recrutement de neutrophiles, un petit morceau de gel d&#39;agarose (~ 1 mm 3 dimensions) contenant chimiotactique des neutrophiles MIP-2 (CXCL2, une chimiokine CXC) ou WKYMVm (Trp-Lys-Tyr-Val-D-Met, un analogue synthétique des peptides bactériens) est placé sur le tissu musculaire adjacent à la veinule observés postcapillaires. Avec le temps écoulé, la photographie vidéo et l&#39;ordinateur le logiciel ImageJ, neutrophiles ramper intraluminale sur l&#39;endothélium, la migration des neutrophiles transendothéliale et de la migration et le chimiotactisme dans les tissus sont visualisés et suivis. Ce protocole permet une analyse fiable et quantitative de nombreux paramètres tels que le recrutement de neutrophiles vitesse de ramper intraluminale, le temps de la transmigration, le temps de détachement, la vitesse de migration, la vitesse et l&#39;indice de chimiotactisme chimiotactisme dans les tissus. Nous démontrons que l&#39;utilisation de ce protocole, ces paramètres peuvent être le recrutement de neutrophiles stable déterminée et la locomotion cellule unique commodément suivi in vivo.

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Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

Nous décrivons un protocole de fond clair microscopie intravitale pour la mesure dynamique des interactions cellulaires des neutrophiles-endothélium lors du recrutement des neutrophiles en réponse à la source d&#39;un facteur chimiotactique des neutrophiles in vivo. Neutrophiles ramper intraluminale, migration trans et le chimiotactisme dans les tissus de souris crémaster sont visualisés avec la photographie vidéo en temps-caduque et suivis avec ImageJ.

Suivi des rampants neutrophiles intraluminale, migration trans et le chimiotactisme dans les tissus par microscopie intravitale Vidéo

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

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Neutrophiles pièges extracellulaires: Comment générer et de les visualiser

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Évaluation quantitative des neutrophiles migrations humaines à travers une culture d&#39;épithélium de la vessie

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