Name: changing the direction and orientation of electric field during electric pulses application improves plasmid gene transfer in vitro
Uploaded: 2011-09-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Changing the Direction and Orientation of Electric Field During Electric Pulses Application Improves Plasmid Gene Transfer in vitro at JoVE.com

この作品は、スロベニアの研究機関（プロジェクトJ2 - 9770、インフラセンターIP - 0510とプログラムP2 - 0249）によってサポートされていました。このビデオでは、&quot;エレクトロポレーションベースの技術と治療&quot;リュブリャナ、スロベニアの大学で電気工学の学部が主催する科学的なワークショップや大学院のコースのための補助教材を表します。著者は、親切にプラスミドDNAを提供するためにもDušaホジッに感謝。

1。細胞培養、プラスミドおよび実験用バッファの準備<ol><li>この実験ではチャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO - K1）を使用しています。細胞は栄養混合2mMのL -グルタミン、10％ウシ胎児血清、400μlの/ lのゲンタマイシン（Sigma - Aldrich社ビックケミー社、Deisenhofenからすべて、ドイツ）、及び1 / mlの補足HAM - F12（PAA）で栽培されていますリットルcrystacilin（Pliva、ザグレブ、クロアチア）。細...

<ol>
	<li>Rebersek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporator+with+automatic+change+of+electric+field+direction+improves+gene+electrotransfer+in-vitro.">Electroporator with automatic change of electric field direction improves gene electrotransfer in-vitro.</a> Biomed Eng Online. 6, 25-25 (2007).</li><li>Trontelj, K., Rebersek, M., Miklavcic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tip+electrode+chamber+for+small+volume+electroporation,+electrofusion,+and+gene+transfection.">Tip electrode chamber for small volume electroporation, electrofusion, and gene transfection.</a> 18, (2006).</li><li>Neumann, E., Schaefer-Ridder, M., Wang, Y., Hofschneider, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+mouse+lyoma+cells+by+electroporation+in+high+electric+fields.">Gene transfer into mouse lyoma cells by electroporation in high electric fields.</a> EMBO J. 1, 841-841 (1982).</li><li>Daud, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+I+trial+of+interleukin-12+plasmid+electroporation+in+patients+with+metastatic+melanoma.">Phase I trial of interleukin-12 plasmid electroporation in patients with metastatic melanoma.</a> J Clin Oncol. 26, 5896-5903 (2008).</li><li>Pavlin, M., Miklavcic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+conductivity+of+a+suspension+of+permeabilized+cells:+a+theoretical+analysis.">Effective conductivity of a suspension of permeabilized cells: a theoretical analysis.</a> Biophys J. 85, 719-729 (2003).</li><li>Xie, T., Sun, L., Zhao, H., Fuchs, J., Tsong, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+mechanisms+of+electric+field-induced+DNA+transfection.+IV.+Effects+of+DNA+topology+on+cell+uptake+and+transfection+efficiency.">Study of mechanisms of electric field-induced DNA transfection. IV. Effects of DNA topology on cell uptake and transfection efficiency.</a> Biophys J. 63, 1026-1031 (1992).</li><li>Rols, M., Delteil, C., Serin, G., Teissie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+effects+on+electrotransfection+of+mammalian+cells.">Temperature effects on electrotransfection of mammalian cells.</a> Nucleic Acids Res. 22, 540-540 (1994).</li><li>Golzio, M., Teissie, J., Rols, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+synchronization+effect+on+mammalian+cell+permeabilization+and+gene+delivery+by+electric+field.">Cell synchronization effect on mammalian cell permeabilization and gene delivery by electric field.</a> Biochim Biophys Acta. 1563, 23-28 (2002).</li><li>Haberl, S., Miklavcic, D., Pavlin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Mg+ions+on+efficiency+of+gene+electrotransfer+and+on+cell+electropermeabilization.">Effect of Mg ions on efficiency of gene electrotransfer and on cell electropermeabilization.</a> Bioelectrochemistry. 79, 265-271 (2010).</li><li>Rols, M., Teissie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electropermeabilization+of+mammalian+cells+to+macromolecules:+control+by+pulse+duration.">Electropermeabilization of mammalian cells to macromolecules: control by pulse duration.</a> Biophys J. 75, 1415-1423 (1998).</li><li>Kanduser, M., Miklavcic, D., Pavlin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+involved+in+gene+electrotransfer+using+high-and+low-voltage+pulses-An+in+vitro+study.">Mechanisms involved in gene electrotransfer using high-and low-voltage pulses-An in vitro study.</a> Bioelectrochemistry. 74, 265-271 (2009).</li><li>Pavlin, M., Flisar, K., Kanduser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+electrophoresis+in+gene+electrotransfer.">The role of electrophoresis in gene electrotransfer.</a> J Membr Biol. 236, 75-79 (2010).</li><li>Sersa, G., Cemazar, M., Semrov, D., Miklavcic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changing+electrode+orientation+improves+the+efficacy+of+electrochemotherapy+of+solid+tumors+in+mice.">Changing electrode orientation improves the efficacy of electrochemotherapy of solid tumors in mice.</a> Bioelectrochem Bioenerg. 39, 61-66 (1996).</li><li>Faurie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electro-mediated+gene+transfer+and+expression+are+controlled+by+the+life-time+of+DNA/membrane+complex+formation.">Electro-mediated gene transfer and expression are controlled by the life-time of DNA/membrane complex formation.</a> J Gene Med. 12, 117-125 (2010).</li></ol>

遺伝子electrotransferは短く、高電圧電気パルス3を適用することにより、細胞へのDNAの転送を可能にし、その安全性、有効性およびアプリケーションの容易さのためのウイルスベクターの安全な代替を表す汎用性の高いバイオ技術です。今日遺伝子electrotransferが広く4報告されているこの方法を用いて細胞と第一段階のすべてのタイプI臨床試験をトランスフェクトするために使用...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> HAM - F12 </td><td> PAA </td><td> E15 - 016 </td><td>培地</td></tr><tr><td> L -グルタミン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> G7513 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td> PAA </td><td> A15 - 151 </td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> G1397 </td><td>抗生物質</td></tr><tr><td> crystacilin </td><td> Pliva </td><td> 625110 </td><td>抗生物質</td></tr><tr><td> pEGFPを- N1 </td><td>クロンテックラボラトリーズ</td><td> 6085から1 </td><td>プラスミドDNA </td></tr><tr><td>ハイスピー​​ドプラスミドマキシキット</td><td>キアゲン</td><td> 12662 </td><td></td></tr><tr><td>のNa 2 HPO 4 </td><td>メルク</td><td> F640786 933 </td><td></td></tr><tr><td>のNaH 2 PO 4 </td><td> TKI Hrastnik </td><td> 0795 </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2の </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> M - 8266 </td><td></td></tr><tr><td>スクロース</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 16104 </td><td></td></tr><tr><td>トリプシン/ EDTA溶液</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> T4174 </td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ</td><td>カスタムは行わ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>電気パルス発生器</td><td>カスタムは行わ</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6ウェルプレート</td><td> TPP </td><td> 92406 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml遠心チューブ</td><td> TPP </td><td> 91015 </td><td></td></tr><tr><td> 75センチメートル2培養フラスコ</td><td> TPP </td><td> 90076 </td><td></td></tr></tbody></table>

changing the direction and orientation of electric field during electric pulses application improves plasmid gene transfer in vitro

遺伝子electrotransferは小分子には、透過性化、細胞膜の不安定化を引き起こす短いし、強烈な電気パルスのアプリケーションによって細胞に遺伝子を提供するために使用される物理的な方法であり、DNAのような大きな分子の転送が可能になります。それは、その安全性、有効性と適用の容易さに起因するウイルスベクターに代わるものを、表します。遺伝子electrotransfer異なる電気パルスプロトコルは最大の遺伝子のトランスフェクションを達成するために使用されているため、そのうちの一つは、パルスの配信中に電界の方向と向きを変えている。電界の方向と向きを変更すると、細胞へのDNAのエントリのための有能な膜面積を増加させる。このビデオでは、我々はすべてのパルスが同じ方向に配信されると、パルスが交互に電界の方向と向きを変えることによって配信される際に遺伝子のelectrotransferの効果の違いを示しています。統合された電極と電気パルス印加時に別の方向に電界が変化することができる高電圧プロトタイプジェネレータ、とこの目​​的のためのヒントについては、使用されていました。遺伝子electrotransferの有効性は、すべてのセルの数で割った値、緑色蛍光タンパク質を発現する細胞の数などのパルス印加後24時間に決定されます。結果は、電気パルスの配信時の電界の向きが変更されたときに遺伝子導入が増加することを示している。

Watch this Scientific Journal Video about Changing the Direction and Orientation of Electric Field During Electric Pulses Application Improves Plasmid Gene Transfer in vitro at JoVE.com

Changing the Direction and Orientation of Electric Field During Electric Pulses Application Improves Plasmid Gene Transfer in vitro

細胞の生存率には影響されていない間の電界の向きは、パルス印加中に変更されたときにエレクトロポレーションによる遺伝子導入は、約2倍に向上しています。遺伝子導入の増加は、細胞へのDNAのエントリのための有能な作られている膜面積の増加によって引き起こされる。

電気パルスのアプリケーションの間に電界の方向と向きを変更すると、プラスミド遺伝子導入を向上 in vitroで</em

Gene electrotransfer is a physical method used to deliver genes into the cells by application of short and intense electric pulses, which cause ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Changing the Direction and Orientation of Electric Field During Electric Pulses Application Improves Plasmid Gene Transfer in vitro

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

免疫不全マウスにおけるヒト網膜芽細胞腫の腫瘍の確立と伝播

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

前臨床モデルにおける虚血性心不全のための遺伝子導入

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

マウスの永久中大脳動脈結紮の応用

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

がんの生産と活性酸素種の検出（ROS）

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

PTSDの、ニューラル血液学的および行動的相関関係を明らかにするための動物モデルにおけるバイオマーカー

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

ヘルパー依存型アデノウイルスベクターによる遺伝子導入による糖尿病マウスの肝臓におけるネオ·膵島形成

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Vascular Gene Transfer from Metallic Stent Surfaces Using Adenoviral Vectors Tethered through Hydrolysable Cross-linkers

加水分解性架橋剤を介してアデノウイルスベクターテザーを使用した金属ステント表面からの血管の遺伝子導入

In-stent restenosis presents a major complication of stent-based revascularization procedures widely used to re-establish blood flow through critically ...

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

小説<em&gt; in vivoで</em&gt;遺伝子導入技術と<em&gt; in vitroで</em筋骨格障害における骨損失の検討のための&gt;細胞ベースのアッセイ

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

ヒト腫瘍異種移植片からマウス細胞の枯渇は大幅に標的細胞の下流分析を向上させます

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During In Vitro Wound Healing

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During  In Vitro Wound Healing

顕微鏡法によるIn Vitro創傷が治癒過程における上皮移行の評価

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated ...