Name: changing the direction and orientation of electric field during electric pulses application improves plasmid gene transfer in vitro
Uploaded: 2011-09-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Changing the Direction and Orientation of Electric Field During Electric Pulses Application Improves Plasmid Gene Transfer in vitro at JoVE.com

이 작품은 슬로베니아어 연구기구 (프로젝트 J2 - 9770, infrastructural 센터 IP - 0510 및 프로그램 P2 - 0249)에 의해 지원되었다. 이 비디오는 &quot;Electroporation 기반 기술 및 트리 트먼트&quot;류블랴나, 슬로베니아 대학 전기 공학부 주최 과학 워크샵 및 대학원 과정에 대한 보충 자료를 나타냅니다. 저자는 친절 플라스미드 DNA를 제공하고 또한 Duša 홋직 감사합니다.

1. 세포 배양, 플라스미드 및 실험을위한 버퍼 준비 <ol><li> 본 실험 중국 햄스터 난소 세포는 (CHO - K1) 사용됩니다. 셀 2 MM L - 글루타민 10 % 태아 소 혈청, 400 μl / L gentamicin (시그마 - 알드리치 케미 GmbH를, Deisenhofen, 독일에서), 그리고 1 보충 영양 혼합 햄 - F12 (PAA)에 재배 ML / 리터 crystacilin (Pliva, 자그레브, 크로아티아). 전지는 37 24에 대한 보육의 humidified 5 % CO 2 분위기 ° C에 보관됩니다. </li>...

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	<li>Rebersek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporator+with+automatic+change+of+electric+field+direction+improves+gene+electrotransfer+in-vitro.">Electroporator with automatic change of electric field direction improves gene electrotransfer in-vitro.</a> Biomed Eng Online. 6, 25-25 (2007).</li><li>Trontelj, K., Rebersek, M., Miklavcic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tip+electrode+chamber+for+small+volume+electroporation,+electrofusion,+and+gene+transfection.">Tip electrode chamber for small volume electroporation, electrofusion, and gene transfection.</a> 18, (2006).</li><li>Neumann, E., Schaefer-Ridder, M., Wang, Y., Hofschneider, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+mouse+lyoma+cells+by+electroporation+in+high+electric+fields.">Gene transfer into mouse lyoma cells by electroporation in high electric fields.</a> EMBO J. 1, 841-841 (1982).</li><li>Daud, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+I+trial+of+interleukin-12+plasmid+electroporation+in+patients+with+metastatic+melanoma.">Phase I trial of interleukin-12 plasmid electroporation in patients with metastatic melanoma.</a> J Clin Oncol. 26, 5896-5903 (2008).</li><li>Pavlin, M., Miklavcic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+conductivity+of+a+suspension+of+permeabilized+cells:+a+theoretical+analysis.">Effective conductivity of a suspension of permeabilized cells: a theoretical analysis.</a> Biophys J. 85, 719-729 (2003).</li><li>Xie, T., Sun, L., Zhao, H., Fuchs, J., Tsong, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+mechanisms+of+electric+field-induced+DNA+transfection.+IV.+Effects+of+DNA+topology+on+cell+uptake+and+transfection+efficiency.">Study of mechanisms of electric field-induced DNA transfection. IV. Effects of DNA topology on cell uptake and transfection efficiency.</a> Biophys J. 63, 1026-1031 (1992).</li><li>Rols, M., Delteil, C., Serin, G., Teissie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+effects+on+electrotransfection+of+mammalian+cells.">Temperature effects on electrotransfection of mammalian cells.</a> Nucleic Acids Res. 22, 540-540 (1994).</li><li>Golzio, M., Teissie, J., Rols, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+synchronization+effect+on+mammalian+cell+permeabilization+and+gene+delivery+by+electric+field.">Cell synchronization effect on mammalian cell permeabilization and gene delivery by electric field.</a> Biochim Biophys Acta. 1563, 23-28 (2002).</li><li>Haberl, S., Miklavcic, D., Pavlin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Mg+ions+on+efficiency+of+gene+electrotransfer+and+on+cell+electropermeabilization.">Effect of Mg ions on efficiency of gene electrotransfer and on cell electropermeabilization.</a> Bioelectrochemistry. 79, 265-271 (2010).</li><li>Rols, M., Teissie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electropermeabilization+of+mammalian+cells+to+macromolecules:+control+by+pulse+duration.">Electropermeabilization of mammalian cells to macromolecules: control by pulse duration.</a> Biophys J. 75, 1415-1423 (1998).</li><li>Kanduser, M., Miklavcic, D., Pavlin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+involved+in+gene+electrotransfer+using+high-and+low-voltage+pulses-An+in+vitro+study.">Mechanisms involved in gene electrotransfer using high-and low-voltage pulses-An in vitro study.</a> Bioelectrochemistry. 74, 265-271 (2009).</li><li>Pavlin, M., Flisar, K., Kanduser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+electrophoresis+in+gene+electrotransfer.">The role of electrophoresis in gene electrotransfer.</a> J Membr Biol. 236, 75-79 (2010).</li><li>Sersa, G., Cemazar, M., Semrov, D., Miklavcic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changing+electrode+orientation+improves+the+efficacy+of+electrochemotherapy+of+solid+tumors+in+mice.">Changing electrode orientation improves the efficacy of electrochemotherapy of solid tumors in mice.</a> Bioelectrochem Bioenerg. 39, 61-66 (1996).</li><li>Faurie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electro-mediated+gene+transfer+and+expression+are+controlled+by+the+life-time+of+DNA/membrane+complex+formation.">Electro-mediated gene transfer and expression are controlled by the life-time of DNA/membrane complex formation.</a> J Gene Med. 12, 117-125 (2010).</li></ol>

진 electrotransfer 짧은, 고전압 전기 펄스 3 적용을 통해 세포로 DNA의 전송을 가능하게하고 안전성, 효능 및 응용 프로그램의 용이성으로 인해 바이러스 벡터에 대한 안전한 대안을 대표하는 다양한 생명 공학 기술입니다. 오늘날 유전자 electrotransfer 널리 4보고되었습니다이 방법을 사용하여 셀 및 첫 단계의 모든 종류의 I 임상 시험을 transfect하는 데 사용되지만, 기본 메커니즘은 아?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 햄 - F12 </td><td> PAA </td><td> E15 - 016 </td><td> 문화 매체 </td></tr><tr><td> L - 글루타민 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> G7513 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> PAA </td><td> A15 - 151 </td><td></td></tr><tr><td> gentamicin </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> G1397 </td><td> 항생 물질 </td></tr><tr><td> crystacilin </td><td> Pliva </td><td> 625110 </td><td> 항생 물질 </td></tr><tr><td> pEGFP - N1 </td><td> Clontech Laboratories의 </td><td> 6085-1 </td><td> 플라스미드 DNA </td></tr><tr><td> HiSpeed​​ 플라스미드 맥시 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 12,662 </td><td></td></tr><tr><td> 나 2 HPO 4 </td><td> 머크 </td><td> F640786 933 </td><td></td></tr><tr><td> 아니 2 PO 4 </td><td> TKI Hrastnik </td><td> 0795 </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> M - 8266 </td><td></td></tr><tr><td> 자당 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> 16,104 </td><td></td></tr><tr><td> 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 솔루션 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> T4174 </td><td></td></tr><tr><td> 피펫 팁 </td><td> 사용자가 만든 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 전기 펄스 발생기 </td><td> 사용자가 만든 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 웰 플레이트 </td><td> TPP </td><td> 92,406 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ML의 원심 분리기 튜브 </td><td> TPP </td><td> 91,015 </td><td></td></tr><tr><td> 75cm 두 문화 술병 </td><td> TPP </td><td> 90,076 </td><td></td></tr></tbody></table>

changing the direction and orientation of electric field during electric pulses application improves plasmid gene transfer in vitro

진 electrotransfer 작은 분자로 그 침투성하고, 세포막의 불안정의 원인이 짧고 강렬한 전기 펄스의 응용 프로그램에 의해 세포에 유전자를 전달하기 위해 사용하는 물리적 방법이고 이러한 DNA와 같은 큰 분자의 전송을 허용합니다. 이것은 안전성, 효능 및 응용 프로그램의 용이성으로 인해 바이러스 벡터에 대한 대안을 나타냅니다. 유전자 electrotransfer에 대해 다른 전기 펄스 프로토콜은 그 중 하나가 펄스 전송 중에 전기장 방향과 방향을 변화, 최대 유전자 transfection을 달성하기 위해 사용됩니다. 전기장 방향과 방향을 변경하면 세포에 DNA 항목에 대한 관할 멤브레인 영역을 향상시킬 수 있습니다. 이 비디오에서는, 우리는 모든 펄스가 같은 방향으로 전달되며 펄스가 또는 전기장의 방향과 방향을 변경하여 전달하는 경우 유전자 electrotransfer의 효율에 차이를 보여줍니다. 통합 전극과 전기 펄스 응용 프로그램을하는 동안 다른 방향으로 전기장의 변화를 수있는 고전압 프로토 타입 생성기,이 목적 팁 경우, 사용되었습니다. 진 electrotransfer의 효험은 모든 세포의 숫자로 나눈 녹색 형광 단백질을 표현 세포의 숫자와 같은 펄스 신청 후 24 시간 결정됩니다. 결과는 전기 펄스 전송 중에 전기장의 방향이 바뀌면 유전자 transfection이 증가는 것을 보여줍니다.

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Changing the Direction and Orientation of Electric Field During Electric Pulses Application Improves Plasmid Gene Transfer in vitro

전기장의 방향이 펄스 응용 프로그램 중에 변경되면 electroporation에 의해 유전자 transfection이 약 두 배 향상이며, 동시에 세포 생존 능력은 영향을받지 않습니다. 유전자 transfection의 증가는 세포로 DNA의 항목에 대해 관할 만들어 막 면적의 증가로 인해 발생할 수 있습니다.

전기 펄스 응용 프로그램에는 방향과 전기장의 방향을 변경하면 플라스미드 유전자 전송을 향상 체외에서</em

Gene electrotransfer is a physical method used to deliver genes into the cells by application of short and intense electric pulses, which cause ...

Research

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