Name: in situ hybridization for the precise localization of transcripts in plants
Uploaded: 2011-11-23T13:00:00
Duration: 12 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants at JoVE.com

ويدعم البحوث في مختبر طن متري من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم الوطنية (DBI - 0820610 و 1022102 IOS) ونيويورك وزارة الصحة (NYSTEM - C024308). تلقى CM زمالات ما بعد الدكتوراه من وزارة التربية والتعليم الإسبانية والعلوم (2007-0937) ورافائيل ديل بينو مؤسسة واسبانيا.

<ol>
	<li>Rensink, W. A., Buell, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+expression+profiling+resources+for+plant+genomics.">Microarray expression profiling resources for plant genomics.</a> Trends. Plant. Sci. 10, 603-609 (2005).</li><li>Li, P., Ponnala, L., Gandotra, N., Wang, L., Si, Y., Tausta, S. L., Kebrom, T. H., Provart, N., Patel, R., Myers, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+developmental+dynamics+of+the+maize+leaf+transcriptome.">The developmental dynamics of the maize leaf transcriptome.</a> Nat. Genet. 42, 1060-1067 (2010).</li><li>Lister, R., O'Malley, R. C., Tonti-Filippini, J., Gregory, B. D., Berry, C. C., Millar, A. H., Ecker, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+integrated+single-base+resolution+maps+of+the+epigenome+in+Arabidopsis.">Highly integrated single-base resolution maps of the epigenome in Arabidopsis.</a> Cell. 133, 523-536 (2008).</li><li>Brady, S. M., Orlando, D. A., Lee, J. Y., Wang, J. Y., Koch, J., Dinneny, J. R., Mace, D., Ohler, U., Benfey, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+root+spatiotemporal+map+reveals+dominant+expression+patterns.">A high-resolution root spatiotemporal map reveals dominant expression patterns.</a> Science. 318, 801-806 (2007).</li><li>Brooks, L., Strable, J., Zhang, X., Ohtsu, K., Zhou, R., Sarkar, A., Hargreaves, S., Elshire, R. J., Eudy, D., Pawlowska, T., Ware, D., Janick-Buckner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+of+shoot+meristem+functional+domains.">Microdissection of shoot meristem functional domains.</a> PLoS. Genet. 5, e1000476-e1000476 (2009).</li><li>Galbraith, D. W., Birnbaum, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+studies+of+cell+type-specific+gene+expression+in+plants.">Global studies of cell type-specific gene expression in plants.</a> Annu. Rev. Plant. Biol. 57, 451-475 (2006).</li><li>Ohtsu, K., Smith, M., Emrich, S., Borsuk, L., Zhou, R., Chen, T., Zhang, X., Timmermans, M., Beck, J., Buckner, B., Janick-Buckner, D., Nettleton, D., Scanlon, M., Schnable, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+analysis+of+the+shoot+apical+meristem+of+maize+(Zea+mays+L.).">Global gene expression analysis of the shoot apical meristem of maize (Zea mays L.).</a> Plant. J. 52, 391-404 (2007).</li><li>Juarez, M. T., Kui, J. S., Thomas, J., Heller, B. A., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNA-mediated+repression+of+rolled+leaf1+specifies+maize+leaf+polarity.">microRNA-mediated repression of rolled leaf1 specifies maize leaf polarity.</a> Nature. 428, 84-88 (2004).</li><li>Kramer, E. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+genetic+mechanisms+controlling+petal+development.">Evolution of genetic mechanisms controlling petal development.</a> Nature. 399, 144-148 (1999).</li><li>Stuurman, J., Jäggi, F., Kuhlemeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shoot+meristem+maintenance+is+controlled+by+a+GRAS-gene+mediated+signal+from+differentiating+cells.">Shoot meristem maintenance is controlled by a GRAS-gene mediated signal from differentiating cells.</a> Genes Dev. 16, 2213-2218 (2002).</li><li>Kim, M., McCormick, S., Timmermans, M., Sinha, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+domain+of+PHANTASTICA+determines+leaflet+placement+in+compound+leaves.">The expression domain of PHANTASTICA determines leaflet placement in compound leaves.</a> Nature. 424, 438-443 (2003).</li><li>Kramer, E. M., Holappa, L., Gould, B., Jaramillo, M. A., Setnikov, D., Santiago, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elaboration+of+B+gene+function+to+include+the+identity+of+novel+floral+organs+in+the+lower+eudicot+Aquilegia.">Elaboration of B gene function to include the identity of novel floral organs in the lower eudicot Aquilegia.</a> Plant Cell. 19, 750-766 (2007).</li><li>Lippman, Z. B., Cohen, O., Alvarez, J. P., Abu-Abied, M., Pekker, I., Paran, I., Eshed, Y., Zamir, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+making+of+a+compound+inflorescence+in+tomato+and+related+nightshades.">The making of a compound inflorescence in tomato and related nightshades.</a> PLoS Biol. 6, e288-e288 (2008).</li><li>Kidner, C., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+as+a+tool+to+study+the+role+of+microRNAs+in+plant+development.">In situ hybridization as a tool to study the role of microRNAs in plant development.</a> Methods. Mol. Biol. 342, 159-179 (2006).</li><li>Jackson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double+labeling+of+KNOTTED1+mRNA+and+protein+reveals+multiple+potential+sites+of+protein+trafficking+in+the+shoot.">Double labeling of KNOTTED1 mRNA and protein reveals multiple potential sites of protein trafficking in the shoot.</a> 129, 1423-1429 (2002).</li><li>Jensen, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Botanical Histochemistry. , 408-408 (1962).</li><li>Jackson, D., Bowles, D. J., Gurr, S. J., McPherson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+in+plants.">In situ hybridization in plants.</a> Molecular Plant Pathology: A Practical Approach. , 163-174 (1991).</li><li>Chitwood, D. H., Nogueira, F. T., Howell, M. o. n. t. g. o. m. e. r. y., Carrington, T. A., C, J., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+formation+via+small+RNA+mobility.">Pattern formation via small RNA mobility.</a> Genes. Dev. 23, 549-554 (2009).</li><li>Piette, D., Hendrickx, M., Willems, E., Kemp, C. R., Leyns, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+procedure+for+whole-mount+in+situ+hybridization+on+mouse+embryos+and+embryoid+bodies.">An optimized procedure for whole-mount in situ hybridization on mouse embryos and embryoid bodies.</a> Nat. Protoc. 3, 1194-1201 (2008).</li><li>Blilou, I., Xu, J., Wildwater, M., Willemsen, V., Paponov, I., Friml, J., Heidstra, R., Aida, M., Palme, K., Scheres, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PIN+auxin+efflux+facilitator+network+controls+growth+and+patterning+in+Arabidopsis+roots.">The PIN auxin efflux facilitator network controls growth and patterning in Arabidopsis roots.</a> Nature. 433, 39-44 (2005).</li><li>Jackson, D., Hake, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+phyllotaxy+in+maize+by+the+abphyl1+gene.">Control of phyllotaxy in maize by the abphyl1 gene.</a> Development. , 126-315 (1999).</li><li>Chuck, G., Whipple, C., Jackson, D., Hake, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+maize+SBP-box+transcription+factor+encoded+by+tasselsheath4+regulates+bract+development+and+the+establishment+of+meristem+boundaries.">The maize SBP-box transcription factor encoded by tasselsheath4 regulates bract development and the establishment of meristem boundaries.</a> Development. 137, 1243-1250 (2010).</li><li>Long, J. A., Barton, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+apical+embryonic+pattern+in+Arabidopsis.">The development of apical embryonic pattern in Arabidopsis.</a> Development. 125, 3027-3035 (1998).</li><li>Nogueira, F. T., Chitwood, D. H., Madi, S., Ohtsu, K., Schnable, P. S., Scanlon, M. J., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+small+RNA+accumulation+in+the+maize+shoot+apex.">Regulation of small RNA accumulation in the maize shoot apex.</a> PLoS Genet. 5, e1000320-e1000320 (2009).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في أسلوب التهجين في الموضع المذكورة هنا يسمح للرؤية مباشرة للنمط التعبير الجيني spatiotemporal أي اهتمام لقرار الخلوية كبيرة وحساسية عالية وخصوصية. البروتوكول لا يسمح بالمقارنة الكمية للمستويات التعبير بين الجينات. ومع ذلك ، يمكن للحساسية العالية والأسلوب القرار تكشف التدرجات في التعبير الجيني داخل أنسجة 8 ، 18 ، وهو غير ممكن مع معظم وسائل أخرى للتحليل التعبير الجيني. البروتوكول يتضمن العديد من الخطوات ، التي يمكن أن تجعل حل المشاكل مشاكل. أهم الخطوات للبروتوكول هي تثبيت للأنسجة واختيار ووضع العلامات على التحقيق. سوف الأنسجة تسلل سيئة وتحقيقات مع إدماج DIG منخفضة الغلة اشارات ضعيفة جدا التي قد يكون من الصعب الكشف عن الخلفية أعلاه. لكل جين جديد لسعر الفائدة ، فمن المستحسن لمحاولة تحقيقات قليلة متميزة مستمدة من diffeاستئجار مناطق نسخة. أحيانا ، قد اثنين أو ثلاثة تحقيقات تستهدف مختلف مناطق أصغر من الجينات يمكن الجمع بين الحاجة إلى الحصول على إشارة قوية التهجين ومحددة. بالإضافة إلى ذلك ، الشروط التهجين ، مثل درجة الحرارة وتكوين العازلة التهجين ، يمكن أن يكون الأمثل لكل جينة أو أنسجة لخفض أو زيادة التشدد التهجين. أيضا الخطوة العلاج البروتيني هو متغير ويمكن تغييرها لتكييف بروتوكول للأنواع النباتية المختلفة أو للكشف عن النصوص مع وفرة منخفضة جدا. سيتم إدراج كل من تحقيقات الرقابة الإيجابية والسلبية تكون مفيدة في تحديد نقاط إشكالية البروتوكول. هو الأمثل لإجراء البارافين جزءا لا يتجزأ من أقسام الأنسجة النباتية ولكن يمكن استخدامها مع تعديلات طفيفة أيضا في جبل لكامل الموقع التهجين. وعلى الرغم من أن تستخدم على نطاق واسع في البحوث الحيوانية 19 ، جبل بأكمله في الموقع التهجين يكون لimited إلى الأنسجة النباتية التي يمكن أن تكون مخترقة بسهولة ، مثل الأجنة ، والجذور أو الأنسجة meristematic الشباب 20،21. ويمكن أيضا أن يتم تعديل البروتوكول بسهولة اكتشاف وقت واحد اثنين mRNAs مميزة أو توطين النصوص جنبا إلى جنب مع بروتينات 15،22،23. أخيرا ، فمن الممكن لتوسيع نطاق تطبيق هذا الأسلوب على تصور أنماط التعبير RNA الصغيرة في النباتات. وقد تم تحديد أنماط التعبير ميرنا باستخدام هذا البروتوكول في كل من الذرة وArabidopsis 8،14. في الآونة الأخيرة ، تم استبدال تحقيقات في كتب من قبل المختبر المتاحة تجاريا DIG المسمى الحمض النووي مؤمن (LNA) والتي تزيد بنسبة ضئيلة تحقيقات حساسية إشارة 18 ، 24.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> المنتج </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تصريحات </th></tr><tr><td> Cytoseal 60 4oz </td><td> الصياد </td><td> 23-244-256 </td><td> التولوين المستندة إلى 8310-4 </td></tr><tr><td> Histoclear </td><td> الصياد </td><td> 50-899-90147 </td><td></td></tr><tr><td> مسار الأنسجة Paraplast بلس </td><td> الصياد </td><td> 23-021-400 </td><td></td></tr><tr><td> N + النايلون غشاء Hybond - N + </td><td> جنرال إلكتريك للرعاية الصحية </td><td> RPN203B </td><td></td></tr><tr><td> ريبونوكلياز OUT و 40 يو / ميكرولتر </td><td> Invitrogen </td><td> 10777019 </td><td></td></tr><tr><td> RQ1 ريبونوكلياز خالية الدناز ؛ 1 U / ميكروليتر </td><td> Promega </td><td> M6101 </td><td></td></tr><tr><td> DIG المسمى التحكم RNA </td><td> روش </td><td> 11585746910 </td><td></td></tr><tr><td> DIG مزيج الحمض النووي الريبي الوسم </td><td> روش </td><td> 11277073910 </td><td></td></tr><tr><td> SP6 بوليميريز RNA 1000 U </td><td> روش </td><td> 10810274001 </td><tد&gt; </td></tr><tr><td> T3 بوليميريز RNA 1000 U </td><td> روش </td><td> 11031163001 </td><td></td></tr><tr><td> T7 بوليميريز RNA 1000 U </td><td> روش </td><td> 10881767001 </td><td></td></tr><tr><td> ريبونوكلياز - A </td><td> روش </td><td> 109142 </td><td> تذوب في pH8.0 الجلسرين تريس 50 ٪ 100mM </td></tr><tr><td> حظر الكاشف </td><td> روش </td><td> 1 096 176 </td><td> الحرارة تصل إلى 70 درجة مئوية في TBS العازلة </td></tr><tr><td> مكافحة Digoxygenin - AP ، شظايا فاب من الأغنام 150 U </td><td> روش </td><td> 1 093 274 </td><td></td></tr><tr><td> NBT / BCIP الأسهم الحل </td><td> روش </td><td> 1 681 451 </td><td></td></tr><tr><td> تدور أعمدة صغيرة سريعة RNA </td><td> روش </td><td> 11814427001 </td><td></td></tr><tr><td> من الحمض الريبي النووي النقال E. القولونية </td><td> روش </td><td> 109541 </td><td></td></tr><tr><td> تريتون ® X - 100 </td><td> سيغما </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> توين - 20</td><td> سيغما </td><td> P9416 </td><td></td></tr><tr><td> منزوع الأيونات formamide </td><td> سيغما </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> البروتيني من نوع غريس المتسلسلة الرابع عشر </td><td> سيغما </td><td> P5147 </td><td> المخفف في الماء milliQ وهضم ما قبل 4 ساعات عند 37 درجة مئوية </td></tr><tr><td> ثلاثي إلإيثانولامين </td><td> سيغما </td><td> 90279 </td><td> المخفف في الماء ، وتقديمهم إلى pH8.0 مع حمض الهيدروكلوريك </td></tr><tr><td> أنهيدريد الخليك </td><td> سيغما </td><td> A6404 </td><td></td></tr><tr><td> ديكستران كبريتات الصوديوم من الملح SPP النستقة. </td><td> سيغما </td><td> D8906 - 5G </td><td> وينبغي تسخين كبريتات ديكستران إلى 80 درجة مئوية إلى حل. </td></tr><tr><td> الحل في التركيز دينهارت 50x </td><td> سيغما </td><td> D2532 </td><td></td></tr><tr><td> ألبومين المصل البقري من -- 98 ٪ ≥ </td><td> سيغما </td><td> A7906 </td><td></td></tr><tr><td> يوزين Y الصوديوم الملح </td><td> سيغما </td><td> E4382 </td><td> تذوب في الايثانول 96-100 ٪ حتى المشبعة </td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> سيغما </td><td> P6148 </td><td></td></tr><tr><td> الإيثانول المطلق 200 برهان </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> الفينول / كلوروفورم </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> قاعدة قوالب </td><td> Microsocpy العلوم الالكترونية </td><td> 62352-15 </td><td></td></tr><tr><td> تضمين الحلقات </td><td> الصياد </td><td> 22-038-197 </td><td></td></tr><tr><td> 20ml قنينة التلألؤ المتاح ، مع قبعات </td><td> VWR </td><td> 66020-326 </td><td></td></tr><tr><td> التحقيق على اساس زائد الشرائح </td><td> الصياد </td><td> 22-230-900 </td><td></td></tr><tr><td> النظارات الصغيرة تغطية 24x50 ملم </td><td> VWR </td><td> 48404-452 </td><td></td></tr><tr><td> Whatman رقة 3mm </td><td> VWR </td><td> 89022-360 </td><td></td></tr><tr><td> أطباق زجاجية الثلاثة وstai onenless رف الصلب الشريحة </td><td> Microsocpy العلوم الالكترونية </td><td> 71420-25 </td><td> زعته اثنين من الزجاج ضرورية لمعالجة histoclear ويستخدم آخر لعلاج أنهيدريد الخليك </td></tr><tr><td> 18 حاويات بلاستيكية نظيفة </td><td> Microsocpy العلوم الالكترونية </td><td> 71402 </td><td></td></tr><tr><td> 2 أو 3 صناديق بلاستيكية كبيرة مسطحة مع الأغطية اغلاقها باحكام </td><td></td><td></td><td> الخطوات المطلوبة لالتهجين والأضداد </td></tr><tr><td> غرامة فرش </td><td></td><td></td><td> مساعدة تسليم شرائط الشمع </td></tr><tr><td> مشراح </td><td></td><td></td><td> لايكا </td></tr><tr><td> نظام التنظيف الذاتي فراغ الجافة </td><td> وولش </td><td> 2025 </td><td></td></tr><tr><td> الشريحة الأكثر دفئا </td><td> الصياد </td><td></td><td></td></tr><tr><td> كتلة التدفئة </td><td></td><td></td><td> هناك حاجة عند 60 درجة مئوية و 85 درجة مئوية</td></tr><tr><td> في الحاضنة 58-60 درجة مئوية </td><td> الصياد </td><td></td><td> للحصول على خطوات مع Paraplast المنصهر </td></tr><tr><td> أفران أو حمامات الماء لمدة 55 درجة مئوية و 37 درجة مئوية </td><td> الصياد </td><td></td><td> بحاجة الى عامين بسبب التغيير السريع في درجات حرارة بين </td></tr><tr><td> الطرد المركزي (4 درجات مئوية -- 20 درجة مئوية) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> دخن غطاء محرك السيارة </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in situ hybridization for the precise localization of transcripts in plants

مع التقدم في أبحاث الجينوم في العقد الماضي ، شهدت العديد من الدراسات بيولوجيا النبات على نطاق واسع تقديم التحليلات الكمية في التعبير الجيني. ويجري استخدام ميكروأري وتسلسل الجيل المقبل النهج للتحقيق في عمليات الاستجابة التنموية والفسيولوجية والإجهاد ، وتشريح اللاجينية والصغيرة مسارات الحمض النووي الريبي ، وبناء شبكات الجينات التنظيمية 1-3 الكبيرة. في حين أن هذه التقنيات تسهيل تحليل الجينات في وقت واحد من مجموعات كبيرة ، لأنها توفر عادة القرار محدود جدا من التغييرات spatiotemporal التعبير الجيني. ويمكن التغلب على هذا القيد جزئيا باستخدام أسلوب التنميط بالتزامن مع lasermicrodissection أو مضان تنشيط الخلايا فرز 4-7. ومع ذلك ، ولكي نفهم تماما الدور البيولوجي للجين ، ومعرفة نمط spatiotemporal التعبير في القرار الخلوية الأساسية. ولا سيما عند دراسة تطوير أو آثار بيئية STIيمكن المولى والمسوخ تحليل مفصل لنمط التعبير الجين أصبح أساسيا. على سبيل المثال ، يمكن أن الاختلافات الكمية خفية في مستويات التعبير عن الجينات التنظيمية الرئيسية تؤدي إلى الظواهر الدرامية عندما يرتبط مع الخسارة أو الربح التعبير في أنواع معينة من الخلايا. وتستخدم عادة عدة طرق لفحص تفصيلي لأنماط التعبير الجيني. هو واحد من خلال تحليل خطوط مراسل المعدلة وراثيا. ويمكن هذا التحليل ، ومع ذلك ، أصبحت تستغرق وقتا طويلا عند تحليل جينات متعددة أو يعملون في مصانع لتحويل المتمردة. علاوة على ذلك ، عادة ما هو مطلوب التحقق المستقل للتأكد من أن نمط التعبير الذي يحاكي التحوير من الجينات المحلية. المناعى توطين البروتين أو مرنا في التهجين الموضع الحالي بدائل سريعة نسبيا لرؤية مباشرة في التعبير الجيني في الخلايا والأنسجة. هذا الأخير لديه ميزة واضحة أنه يمكن أن يكون بسهولة شالحوار الاقتصادي الاستراتيجي على أي من الجينات الفائدة. التهجين في الموقع تتيح الكشف عن mRNAs المستهدفة في الخلايا عن طريق التهجين مع الحمض النووي الريبي لمكافحة الشعور المسمى التحقيق التي حصلت عليها في المختبر النسخ من الجينات في المصالح. نحن هنا الخطوط العريضة لبروتوكول للتوطين في الوضع الطبيعي في التعبير الجيني في النباتات التي هي حساسية عالية ومحددة. هو الأمثل للاستخدام مع بارافورمالدهيد الثابتة والبارافين جزءا لا يتجزأ من المقاطع ، والتي تعطي حماية ممتازة من الأنسجة ، وتحقيقات DIG ذات العلامات التي تصور من قبل المناعية للكشف عن والفوسفاتيز القلوية رد الفعل اللونية. وقد تم بنجاح تطبيق هذا البروتوكول إلى عدد من الانسجة من طائفة واسعة من الأنواع النباتية ، ويمكن استخدامها لتحليل التعبير عن mRNAs فضلا الرناوات الصغيرة 8-14.

Watch this Scientific Journal Video about In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants at JoVE.com

In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants

و<em&gt; في الموقع</em&gt; بروتوكول التهجين الموصوفة هنا يسمح للتوطين المباشر مرنا والصغيرة تعبير الحمض النووي الريبي على المستوى الخلوي مع حساسية عالية وخصوصية. هو الأمثل لإجراء البارافين جزءا لا يتجزأ من أقسام الأنسجة النباتية ، ينطبق على طائفة واسعة من النباتات والأنسجة ، ويمكن أن تكتمل في غضون عشرة أيام.

في الموقع التهجين لتوطين دقيقة من النصوص في النباتات

With the advances in genomics research of the past decade, plant biology has seen numerous studies presenting large-scale quantitative analyses of gene ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

الجامعة جبل مزدوجة في الموقع التهجين لافراخ الدجاج في وقت مبكر

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

مضان في الموقع التهجين (FISH) البروتوكول في الحيوانات المنوية البشرية

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

المشعة في الموقع التهجين، لتحديد متنوعة أنماط التعبير الجيني في الأنسجة

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

الكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي بواسطة الإسفار<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين (FISH)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

تحليل النسخ الجيني وحيدة الخلية التي كتبها نيون RNA<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

التوقيت كروموسوم النسخ المتماثل جنبا إلى جنب مع نيون<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين

Mammalian DNA replication initiates at multiple sites along chromosomes at different times during S phase, following a temporal replication program. The ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

كله جبل RNA نيون<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

التصور والتحليل من جزيئات الرنا المرسال عن طريق الإسفار<em&gt; في الموضع</em&gt; التهجين في<em&gt; خميرة الخباز</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

الرنا الميكروي<em&gt; في الوضع الطبيعي</em&gt; التهجين للأنسجة الكلى الفورمالين الثابتة

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

طريقة بسيطة لDNA الإسفار<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين لسحق الكروموسومات

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...