Name: in situ hybridization for the precise localization of transcripts in plants
Uploaded: 2011-11-23T13:00:00
Duration: 12 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants at JoVE.com

MT laboratuvar Araştırma Ulusal Bilim Vakfı (DBI-0.820.610 ve IOS-1.022.102) ve New York Sağlık Dairesi (NYSTEM C024308) hibe tarafından desteklenmektedir. CM, Eğitim ve Bilim (2007-0937) ve Vakfı Rafael del Pino, İspanya İspanyol Bakanlığı, doktora sonrası burslar aldı.

<ol>
	<li>Rensink, W. A., Buell, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+expression+profiling+resources+for+plant+genomics.">Microarray expression profiling resources for plant genomics.</a> Trends. Plant. Sci. 10, 603-609 (2005).</li><li>Li, P., Ponnala, L., Gandotra, N., Wang, L., Si, Y., Tausta, S. L., Kebrom, T. H., Provart, N., Patel, R., Myers, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+developmental+dynamics+of+the+maize+leaf+transcriptome.">The developmental dynamics of the maize leaf transcriptome.</a> Nat. Genet. 42, 1060-1067 (2010).</li><li>Lister, R., O'Malley, R. C., Tonti-Filippini, J., Gregory, B. D., Berry, C. C., Millar, A. H., Ecker, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+integrated+single-base+resolution+maps+of+the+epigenome+in+Arabidopsis.">Highly integrated single-base resolution maps of the epigenome in Arabidopsis.</a> Cell. 133, 523-536 (2008).</li><li>Brady, S. M., Orlando, D. A., Lee, J. Y., Wang, J. Y., Koch, J., Dinneny, J. R., Mace, D., Ohler, U., Benfey, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+root+spatiotemporal+map+reveals+dominant+expression+patterns.">A high-resolution root spatiotemporal map reveals dominant expression patterns.</a> Science. 318, 801-806 (2007).</li><li>Brooks, L., Strable, J., Zhang, X., Ohtsu, K., Zhou, R., Sarkar, A., Hargreaves, S., Elshire, R. J., Eudy, D., Pawlowska, T., Ware, D., Janick-Buckner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+of+shoot+meristem+functional+domains.">Microdissection of shoot meristem functional domains.</a> PLoS. Genet. 5, e1000476-e1000476 (2009).</li><li>Galbraith, D. W., Birnbaum, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+studies+of+cell+type-specific+gene+expression+in+plants.">Global studies of cell type-specific gene expression in plants.</a> Annu. Rev. Plant. Biol. 57, 451-475 (2006).</li><li>Ohtsu, K., Smith, M., Emrich, S., Borsuk, L., Zhou, R., Chen, T., Zhang, X., Timmermans, M., Beck, J., Buckner, B., Janick-Buckner, D., Nettleton, D., Scanlon, M., Schnable, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+analysis+of+the+shoot+apical+meristem+of+maize+(Zea+mays+L.).">Global gene expression analysis of the shoot apical meristem of maize (Zea mays L.).</a> Plant. J. 52, 391-404 (2007).</li><li>Juarez, M. T., Kui, J. S., Thomas, J., Heller, B. A., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNA-mediated+repression+of+rolled+leaf1+specifies+maize+leaf+polarity.">microRNA-mediated repression of rolled leaf1 specifies maize leaf polarity.</a> Nature. 428, 84-88 (2004).</li><li>Kramer, E. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+genetic+mechanisms+controlling+petal+development.">Evolution of genetic mechanisms controlling petal development.</a> Nature. 399, 144-148 (1999).</li><li>Stuurman, J., Jäggi, F., Kuhlemeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shoot+meristem+maintenance+is+controlled+by+a+GRAS-gene+mediated+signal+from+differentiating+cells.">Shoot meristem maintenance is controlled by a GRAS-gene mediated signal from differentiating cells.</a> Genes Dev. 16, 2213-2218 (2002).</li><li>Kim, M., McCormick, S., Timmermans, M., Sinha, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+domain+of+PHANTASTICA+determines+leaflet+placement+in+compound+leaves.">The expression domain of PHANTASTICA determines leaflet placement in compound leaves.</a> Nature. 424, 438-443 (2003).</li><li>Kramer, E. M., Holappa, L., Gould, B., Jaramillo, M. A., Setnikov, D., Santiago, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elaboration+of+B+gene+function+to+include+the+identity+of+novel+floral+organs+in+the+lower+eudicot+Aquilegia.">Elaboration of B gene function to include the identity of novel floral organs in the lower eudicot Aquilegia.</a> Plant Cell. 19, 750-766 (2007).</li><li>Lippman, Z. B., Cohen, O., Alvarez, J. P., Abu-Abied, M., Pekker, I., Paran, I., Eshed, Y., Zamir, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+making+of+a+compound+inflorescence+in+tomato+and+related+nightshades.">The making of a compound inflorescence in tomato and related nightshades.</a> PLoS Biol. 6, e288-e288 (2008).</li><li>Kidner, C., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+as+a+tool+to+study+the+role+of+microRNAs+in+plant+development.">In situ hybridization as a tool to study the role of microRNAs in plant development.</a> Methods. Mol. Biol. 342, 159-179 (2006).</li><li>Jackson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double+labeling+of+KNOTTED1+mRNA+and+protein+reveals+multiple+potential+sites+of+protein+trafficking+in+the+shoot.">Double labeling of KNOTTED1 mRNA and protein reveals multiple potential sites of protein trafficking in the shoot.</a> 129, 1423-1429 (2002).</li><li>Jensen, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Botanical Histochemistry. , 408-408 (1962).</li><li>Jackson, D., Bowles, D. J., Gurr, S. J., McPherson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+in+plants.">In situ hybridization in plants.</a> Molecular Plant Pathology: A Practical Approach. , 163-174 (1991).</li><li>Chitwood, D. H., Nogueira, F. T., Howell, M. o. n. t. g. o. m. e. r. y., Carrington, T. A., C, J., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+formation+via+small+RNA+mobility.">Pattern formation via small RNA mobility.</a> Genes. Dev. 23, 549-554 (2009).</li><li>Piette, D., Hendrickx, M., Willems, E., Kemp, C. R., Leyns, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+procedure+for+whole-mount+in+situ+hybridization+on+mouse+embryos+and+embryoid+bodies.">An optimized procedure for whole-mount in situ hybridization on mouse embryos and embryoid bodies.</a> Nat. Protoc. 3, 1194-1201 (2008).</li><li>Blilou, I., Xu, J., Wildwater, M., Willemsen, V., Paponov, I., Friml, J., Heidstra, R., Aida, M., Palme, K., Scheres, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PIN+auxin+efflux+facilitator+network+controls+growth+and+patterning+in+Arabidopsis+roots.">The PIN auxin efflux facilitator network controls growth and patterning in Arabidopsis roots.</a> Nature. 433, 39-44 (2005).</li><li>Jackson, D., Hake, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+phyllotaxy+in+maize+by+the+abphyl1+gene.">Control of phyllotaxy in maize by the abphyl1 gene.</a> Development. , 126-315 (1999).</li><li>Chuck, G., Whipple, C., Jackson, D., Hake, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+maize+SBP-box+transcription+factor+encoded+by+tasselsheath4+regulates+bract+development+and+the+establishment+of+meristem+boundaries.">The maize SBP-box transcription factor encoded by tasselsheath4 regulates bract development and the establishment of meristem boundaries.</a> Development. 137, 1243-1250 (2010).</li><li>Long, J. A., Barton, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+apical+embryonic+pattern+in+Arabidopsis.">The development of apical embryonic pattern in Arabidopsis.</a> Development. 125, 3027-3035 (1998).</li><li>Nogueira, F. T., Chitwood, D. H., Madi, S., Ohtsu, K., Schnable, P. S., Scanlon, M. J., Timmermans, M. C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+small+RNA+accumulation+in+the+maize+shoot+apex.">Regulation of small RNA accumulation in the maize shoot apex.</a> PLoS Genet. 5, e1000320-e1000320 (2009).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada özetlenen in situ hibridizasyon yöntemi büyük hücresel çözünürlük, yüksek duyarlılık ve özgüllük ile ilgi herhangi bir genin Spatiotemporal ifade deseninin doğrudan görselleştirme sağlar . Protokol genler arasında ekspresyon düzeyleri kantitatif bir karşılaştırma izin vermez. Ancak, yöntemin yüksek hassasiyet ve çözünürlük, gen ekspresyonu analiz diğer yöntemler ile mümkün olmayan bir doku 8, 18, ​​içinde, gen ekspresyonu degradeler ortaya çıkarabilir. Protokol, sorun giderme sorunlu yapabilirsiniz birçok adımları içerir. Protokolün en kritik adımlardan doku fiksasyon ve prob seçimi ve etiketleme. Düşük DIG dahil Kötü sızmış doku ve sondalar arka plan yukarıda tespit etmek zor olabilir çok zayıf sinyaller verecektir. Ilgi her yeni gen için, farklı türetilmiş bir kaç farklı problar denemek için tavsiye edilirtranskript bölgelerde kira. Bazen genin farklı bölgelerde küçük hedefleyen iki veya üç probları güçlü ve spesifik hibridizasyon sinyali elde etmek için bir araya gerekebilir. Buna ek olarak, hibridizasyon koşulları, sıcaklık ve hibridizasyon tamponu bileşimi olarak, hibridizasyon darlığı düşük ya da arttırmak için her bir gen ya da doku için optimize edilebilir. Ayrıca proteaz tedavi adım bir değişken ve farklı bitki türleri için ya da çok düşük bolluğu ile transkript tespiti için protokol adapte değiştirilebilir. Hem pozitif ve negatif kontrol probları dahil protokolün sorunlu noktaları belirlenmesinde yararlı olacaktır. Prosedür parafine gömülü bitki doku bölümleri için optimize edilmiştir, ancak küçük değişiklikler, in situ hibridizasyon tüm montaj için de kullanılıyor olabilir. In situ hibridizasyon hayvanlar üzerinde yapılan araştırmalar 19, tüm montaj yaygın olarak kullanılmasına karşın l olacakembriyolar, kökler veya genç Meristematik dokuların 20,21 gibi kolayca sızmış olabilir bitki dokularında imited. Protokol aynı zamanda, eş zamanlı olarak iki ayrı mRNA&#39;ların algılamak veya proteinleri 15,22,23 birlikte transkript lokalize kolayca değiştirilebilir. Sonuç olarak, bu yöntemin uygulama bitkilerin küçük RNA ekspresyonu görselleştirme uzatmak mümkündür. miRNA ekspresyonu, mısır ve Arabidopsis 8,14 hem de bu protokolü kullanılarak tespit edilmiştir . Daha yakın zamanlarda, in vitro transkripsiyonu probları yerini almış piyasada bulunan DIG etiketli kilitli nükleik asit (LNA) oligo probları artış hassasiyeti ve sinyal 18, 24 .

<table border="1"><tbody><tr><th> Ürün </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Açıklamalar </th></tr><tr><td> Cytoseal 60 4oz </td><td> Balıkçı </td><td> 23-244-256 </td><td> Toluen-tabanlı 8310-4 </td></tr><tr><td> Histoclear </td><td> Balıkçı </td><td> 50-899-90147 </td><td></td></tr><tr><td> Doku Yol paraplast Plus, </td><td> Balıkçı </td><td> 23-021-400 </td><td></td></tr><tr><td> N + naylon membran Hybond-N + </td><td> GE Healthcare </td><td> RPN203B </td><td></td></tr><tr><td> RNaz OUT; 40 U / mcL </td><td> Invitrogen </td><td> 10777019 </td><td></td></tr><tr><td> RQ1 RNaz-Alerjik DNaz, 1 U / ml </td><td> Promega </td><td> M6101 </td><td></td></tr><tr><td> DIG etiketli Kontrol RNA </td><td> Roche </td><td> 11585746910 </td><td></td></tr><tr><td> DIG RNA etiketleme karışımı </td><td> Roche </td><td> 11277073910 </td><td></td></tr><tr><td> SP6 RNA polimeraz 1000 U </td><td> Roche </td><td> 10810274001 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> T3 RNA polimeraz 1000 U </td><td> Roche </td><td> 11031163001 </td><td></td></tr><tr><td> T7 RNA polimeraz 1000 U </td><td> Roche </td><td> 10881767001 </td><td></td></tr><tr><td> RNaz-A </td><td> Roche </td><td> 109142 </td><td> gliserol 50% Tris 100 mM pH8.0 içinde çözülür </td></tr><tr><td> Reaktif Engelleme </td><td> Roche </td><td> 1 096 176 </td><td> 70 ° C TBS tampon kadar ısıtın. </td></tr><tr><td> Anti-Digoxygenin-AP, koyun 150 U Fab parçaları </td><td> Roche </td><td> 1 093 274 </td><td></td></tr><tr><td> NBT / BCIP stok solüsyonu </td><td> Roche </td><td> 1 681 451 </td><td></td></tr><tr><td> mini Hızlı Spin RNA Sütunlar </td><td> Roche </td><td> 11814427001 </td><td></td></tr><tr><td> E. gelen tRNA coli </td><td> Roche </td><td> 109541 </td><td></td></tr><tr><td> Triton ® X-100 </td><td> Sigma </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> Tween-20</td><td> Sigma </td><td> P9416 </td><td></td></tr><tr><td> Deiyonize formamid </td><td> Sigma </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> Proteaz gelen Streptomyces griseus Tip XIV. </td><td> Sigma </td><td> P5147 </td><td> MilliQ su ve pre-digest 4 saat içinde seyreltilir 37 ° C </td></tr><tr><td> Trietanolamin </td><td> Sigma </td><td> 90279 </td><td> Su seyreltik HCl ile pH8.0 getirmek </td></tr><tr><td> Asetik anhidrit </td><td> Sigma </td><td> A6404 </td><td></td></tr><tr><td> Dekstran sülfat sodyum tuzu Leuconostoc spp. </td><td> Sigma </td><td> D8906-5G </td><td> Dekstran Sülfat, 80 ° C çözülür ısıtılmış olmalıdır. </td></tr><tr><td> Denhardt Solüsyonu 50x Konsantre </td><td> Sigma </td><td> D2532 </td><td></td></tr><tr><td> Sığır serum albumin - ≥% 98 </td><td> Sigma </td><td> A7906 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin Y disodyum tuzu </td><td> Sigma </td><td> E4382 </td><td> Doymuş kadar 96-100% etanol içinde çözülür </td></tr><tr><td> Paraformaldehit </td><td> Sigma </td><td> P6148 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol mutlak 200 kanıtı </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fenol / kloroform </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Baz kalıp </td><td> Elektronik Microsocpy Bilim </td><td> 62352-15 </td><td></td></tr><tr><td> Katıştırma halkaları </td><td> Balıkçı </td><td> 22-038-197 </td><td></td></tr><tr><td> 20ml tek sintilasyon şişeleri, kapakları </td><td> VWR </td><td> 66020-326 </td><td></td></tr><tr><td> Probe-on-artı slaytlar </td><td> Balıkçı </td><td> 22-230-900 </td><td></td></tr><tr><td> Micro kapak gözlük 24x50 mm </td><td> VWR </td><td> 48404-452 </td><td></td></tr><tr><td> Whatman kağıt 3mm </td><td> VWR </td><td> 89022-360 </td><td></td></tr><tr><td> Üç cam tabaklar ve bir stainless çelik slayt raf </td><td> Elektronik Microsocpy Bilim </td><td> 71420-25 </td><td> Histoclear tedavi için gerekli olan iki cam bombeli ve sonuncusu asetik anhidrit tedavisi için kullanılır </td></tr><tr><td> 18 temiz plastik kaplar </td><td> Elektronik Microsocpy Bilim </td><td> 71402 </td><td></td></tr><tr><td> 2 veya 3 yapışmalı, kapaklı büyük düz plastik kutular </td><td></td><td></td><td> hibridizasyon ve antikor adımlar için gerekli </td></tr><tr><td> İnce fırça </td><td></td><td></td><td> Balmumu şeritler teslim Yardım </td></tr><tr><td> Mikroskobik dilimleme aleti </td><td></td><td></td><td> Leica </td></tr><tr><td> Kendi kendini temizleyen kuru vakum sistemi </td><td> Şartları yerine getirmemek </td><td> 2025 </td><td></td></tr><tr><td> Sıcak kaydırın. </td><td> Balıkçı </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Isıtma bloğu </td><td></td><td></td><td> 60 ° C ve 85 ° C&#39;de gerekli</td></tr><tr><td> 58-60 az İnkübatör ° C </td><td> Balıkçı </td><td></td><td> Erimiş paraplast adımlar için </td></tr><tr><td> Fırınlar veya su banyoları 55 ° C ile 37 ° C </td><td> Balıkçı </td><td></td><td> Sıcaklıklar arasındaki hızlı değişim nedeniyle iki ihtiyacınız var </td></tr><tr><td> Santrifüj (4 ° C - 20 ° C) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Davlumbaz </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in situ hybridization for the precise localization of transcripts in plants

Geçtiğimiz on yıl genomik araştırma gelişmelerle birlikte, bitki biyolojisi, gen ekspresyonu büyük ölçekli kantitatif analizleri gösteren çok sayıda çalışma gördü. Mikroarray ve yeni nesil sıralama yaklaşımlar, gelişimsel, fizyolojik ve stres yanıtı süreçlerini araştırmak, epigenetik ve küçük RNA yollar teşrih ve 1-3 büyük gen düzenleyici ağlar oluşturmak için kullanılmaktadır . Bu tekniklerin büyük gen setleri eşzamanlı analizi kolaylaştırmak iken, genellikle gen ekspresyonu değişiklikleri çok sınırlı uzaysal çözünürlüğü sağlar. Bu sınırlama kısmen lasermicrodissection ile birlikte ya da 4-7 sıralama floresan ile aktive olan hücre yöntemi kullanarak ya profil üstesinden gelinebilir . Ancak, tam bir genin biyolojik rolünü anlamak için, bir hücresel çözünürlükte ifade Spatiotemporal desen bilgisi şarttır. Özellikle, geliştirme veya çevre sti etkileri eğitimMuli ve mutantlar bir gen ifade deseninin ayrıntılı analizi gerekli olabilir. Örneğin, belirli bir hücre türleri ifade kaybı veya kazancı ile ilgili anahtar düzenleyici genlerin ekspresyon düzeyleri ince kantitatif farklılıklar dramatik fenotipleri yol açabilir. Çeşitli yöntemler rutin ayrıntılı inceleme için gen ekspresyonu kullanılır. Bir transgenik muhabiri hatlarının analizi yoluyla. Böyle bir analiz, birden fazla genin analiz veya dönüşüm inatçı tesislerinde çalışırken Ancak, zaman alıcı olabilir. Ayrıca, bağımsız bir doğrulama transgen ifade desen endojen gen taklit sağlamak için genellikle gereklidir. İmmünohistokimyasal protein yerelleştirme veya mRNA in situ hibridizasyon, gen ekspresyonu hücre ve dokuları içinde doğrudan görünüm için nispeten hızlı alternatifler sunuyoruz . Ikincisi kolayca u ayrı bir avantajı varilgi herhangi bir gen sed in situ hibridizasyon ilgi gen in vitro transkripsiyon elde prob etiketli anti-sense RNA hibridizasyon hücreleri hedef mRNA&#39;ların algılanmasını sağlar . Burada yüksek hassasiyet ve özel bitkilerde gen ekspresyonu in situ lokalizasyonu için bir protokol anahat. Paraformaldehid sabit, parafine gömülü bölümleri, histoloji mükemmel koruma sağlar ve immün algılama ve alkalin fosfataz kolorimetrik reaksiyon tarafından görüntülenmiştir DIG etiketli probları ile kullanım için optimize edilmiştir. Bu protokol bitki türlerinin geniş bir dokuların bir dizi başarıyla uygulanan ve mRNA&#39;ların yanı sıra küçük RNA&#39;lar 8-14 ifade analiz etmek için kullanılır.

Watch this Scientific Journal Video about In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants at JoVE.com

In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants

<em&gt; Yerinde</emBurada açıklanan&gt; hibridizasyon protokolü, yüksek duyarlılık ve özgüllük ile hücresel düzeyde mRNA ve küçük RNA ifade doğrudan yerelleştirme sağlar. Prosedürü, parafine gömülü bitki doku bölümleri için optimize edilmiş, bitki ve dokuların geniş bir yelpazede uygulanabilir ve on gün içinde tamamlanabilir.

Bitkilerde Transkriptler Hassas Yerelleştirme Situ Hibridizasyon

With the advances in genomics research of the past decade, plant biology has seen numerous studies presenting large-scale quantitative analyses of gene ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Erken Civciv Embriyolar in situ Hibridizasyon Çift Tüm Dağı

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Floresan In situ İnsan Sperm hibridizasyon (FISH) Protokolü

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Radyoaktif In situ</emDoku Çeşitli Gen Patterns Saptayan> Hibridizasyon

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

Floresans tarafından viral RNA tespit edilmesi<em&gt; In situ</em&gt; Hibridizasyon (FISH)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

RNA Floresan tarafından Tek hücreli Gen Transkripsiyon Analizi<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridizasyon (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Floresan ile birlikte Kromozom çoğaltılıyor Zamanlama<em&gt; Yerinde</em&gt; Hibridizasyon

Mammalian DNA replication initiates at multiple sites along chromosomes at different times during S phase, following a temporal replication program. The ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Tüm Dağı RNA Floresan<em&gt; In situ</emVe&gt; Hibridizasyon<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyolar

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Floresan kullanarak mRNA Moleküllerin Görselleştirme ve Analiz<em&gt; Yerinde</emIn&gt; Hibridizasyon<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA<em&gt; In situ</em&gt; Formalin Sabit Böbrek Dokular Hibridizasyon

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Floresan DNA için Basit Bir Yöntem<em&gt; In Situ</em&gt; Ezilmiş Kromozomlar için Hibridizasyon

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...