Name: a functional whole blood assay to measure viability of mycobacteria, using reporter-gene tagged bcg or m.tb (bcg lux/m.tb lux)
Uploaded: 2011-09-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb BCG lux/M.Tb lux at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل شخصية من الزمالات ويلكوم ترست لKampmann بياتي (056608 ، GRO77273).

1. إعداد المخزون BCG مراسل لوكس متفطرات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو BCG لوكس (M. البقرية سلالة مونتريال BCG تحولت مع pSMT1 المكوك البلازميد) مع اهتزاز في 200rpm إلى منتصف المرحلة لوغاريتمي في Middlebrook 7H9 مرق تحتوي على 0.2 ٪ الجلسرين ، 0.05 ٪ توين 80 و 10...

<ol>
	<li>Cheng, S. H., Walker, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+increased+anti-mycobacterial+activity+in+peripheral+blood+monocytes+after+BCG+vaccination+in+British+school+children.">Demonstration of increased anti-mycobacterial activity in peripheral blood monocytes after BCG vaccination in British school children.</a> Clin Exp Immunol. 74, 20-205 (1988).</li><li>Cheng, S. H., Walker, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+antimycobacterial+activity+before+and+after+Mycobacterium+bovis+BCG+vaccination+in+Chingleput,+India,+and+London,+United+Kingdom.">Monocyte antimycobacterial activity before and after Mycobacterium bovis BCG vaccination in Chingleput, India, and London, United Kingdom.</a> Infect Immun. 61, 4501-4503 (1993).</li><li>Silver, R. F., Li, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+virulence+of+Mycobacterium+tuberculosis+within+human+monocytes:+virulence+correlates+with+intracellular+growth+and+induction+of+tumor+necrosis+factor+alpha+but+not+with+evasion+of+lymphocyte-dependent+monocyte+effector+functions.">Expression of virulence of Mycobacterium tuberculosis within human monocytes: virulence correlates with intracellular growth and induction of tumor necrosis factor alpha but not with evasion of lymphocyte-dependent monocyte effector functions.</a> Infect Immun. 66, 1190-1199 (1998).</li><li>Hoft, D. F., Worku, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+relationships+between+immune-mediated+inhibition+of+mycobacterial+growth+and+other+potential+surrogate+markers+of+protective+Mycobacterium+tuberculosis+immunity.">Investigation of the relationships between immune-mediated inhibition of mycobacterial growth and other potential surrogate markers of protective Mycobacterium tuberculosis immunity.</a> J Infect Dis. 186, 1448-1457 (2002).</li><li>Worku, S., Hoft, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+control+and+antigen-specific+T+cells+on+intracellular+mycobacterial+growth.">Differential effects of control and antigen-specific T cells on intracellular mycobacterial growth.</a> Infect Immun. 71, 1763-1773 (2003).</li><li>Kampmann, B., Gaora, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+human+antimycobacterial+immunity+using+recombinant+reporter+mycobacteria.">Evaluation of human antimycobacterial immunity using recombinant reporter mycobacteria.</a> J Infect Dis. 182, 895-901 (2000).</li><li>Cheon, S. H., Kampmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bactericidal+activity+in+whole+blood+as+a+potential+surrogate+marker+of+immunity+after+vaccination+against+tuberculosis.">Bactericidal activity in whole blood as a potential surrogate marker of immunity after vaccination against tuberculosis.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9, 901-907 (2002).</li><li>Janulionis, E., Sofer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+activity+of+orally+administered+clofazimine+against+intracellular+Mycobacterium+tuberculosis+in+whole-blood+culture.">Lack of activity of orally administered clofazimine against intracellular Mycobacterium tuberculosis in whole-blood culture.</a> Antimicrob Agents Chemother. 48, 3133-3135 (2004).</li><li>Kampmann, B., Tena, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+human+in+vitro+system+for+evaluating+antimycobacterial+vaccines.">Novel human in vitro system for evaluating antimycobacterial vaccines.</a> Infect Immun. 72, 6401-6407 (2004).</li><li>Kampmann, B., Tena-Coki, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+antimycobacterial+immune+responses+in+HIV-infected+children+receiving+HAART.">Reconstitution of antimycobacterial immune responses in HIV-infected children receiving HAART.</a> Aids. 20, 1011-1018 .</li><li>Martineau, A. R., Wilkinson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+dose+of+vitamin+D+enhances+immunity+to+mycobacteria.">A single dose of vitamin D enhances immunity to mycobacteria.</a> Am J Respir Crit Care Med. 176, 208-213 (2007).</li></ol>

هي راسخة المقايسات للجراثيم في سياق البحوث قاح السل في النماذج الحيوانية ، حيث يتم تطبيقها على الشاشة اللقاحات المرشحة اعدة. تخفيض الحمولة الجرثومية في وظائف الأجهزة المختلفة كما الرئيسي للقراءة من استمناع. تم تصميم الجيل الأول...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> القط لا </td></tr><tr><td> BCG لوكس </td><td> مختلف </td><td> ن / أ </td></tr><tr><td> Middlebrook 7H11 آغار </td><td> بيكتون ديكنسون </td><td> 283810 </td></tr><tr><td> Middlebrook 7H9 مرق </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 271310 (500G) </td></tr><tr><td> Middlebrook ADC تخصيب </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 212352 </td></tr><tr><td> Middlebrook OADC تكملة </td><td> بيكتون ديكنسون </td><td> 212240 </td></tr><tr><td> توين 80 </td><td> سيغما الدريتش </td><td> 274364 </td></tr><tr><td> الغليسيرول </td><td> سيغما الدريتش </td><td> G5150 </td></tr><tr><td> هيغروميسين B </td><td> روش </td><td> 10843555001 (20ml) </td></tr><tr><td> N - decyl ألدهيد </td><td> سيغما </td><td> D7384 - 100G </td></tr><tr><td> الإيثانول (&gt; 99،7 ٪) </td><td> VWR </td><td> 101077 </td></tr><tr><td> معقمة PBS </td><td> في البيت </td><td> ن / أ </td></tr><tr><td> RPMI - 1640 مع HEPES ، L - الجلوتامين 25mM </td><td> سيغما </td><td> R0883 </td></tr><tr><td> ماء مقطر معقم </td><td> في البيت </td><td> ن / أ </td></tr><tr><td colspan="3"> معدات </td></tr><tr><td> luminometer أنبوب (منفذ حقن إلزامي) </td><td> برتولد AutoLumat LB953 أو أحادية الأنبوب سيريوس luminometer </td><td></td></tr><tr><td> أنابيب Luminometer ، 12 × 75mm ، بيركس بدون شفة </td><td> كورنينج من VWR </td><td> 99445-12 </td></tr><tr><td> قوارير مخروطي مع قبعات تنفيس ، معقمة البولي 250ml </td><td> كورنينج عبر فيشر العلمية </td><td> 2150329 </td></tr><tr><td> دينار بحريني أنابيب جمع الدم Vacutainer (خالية من المواد الحافظة الهيبارين) </td><td> دينار بحريني </td><td> 367676 </td></tr><tr><td> 50ml فالكون أنابيب مخروطية </td><td> دينار بحريني </td><td> 352077 </td></tr><tr><td> 7ml Sterilin عينة أنابيب البولي بروبلين بيجو </td><td> VWR </td><td> 99445-12 </td></tr><tr><td> Sterilin العالمي الحاويات (30 مل) </td><td> مختبر التحليل LTD </td><td> 128C </td></tr><tr><td> الخرز الزجاجي 2mm وقطر </td><td> SigmaAldrich </td><td> Z143928 </td></tr><tr><td> 10ML ماصات وصبي ماصة </td><td> أي </td><td></td></tr><tr><td> 1000μl 200μl وماصات ونصائح التصفية </td><td> أي </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"> معدات المختبرات العامة : </td></tr><tr><td> السلامة من الدرجة الثانية لمجلس الوزراء مجلس الوزراء </td><td></td><td></td></tr><tr><td> وحدة التبريد (4 درجات مئوية) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الطرد المركزي </td><td></td><td></td></tr><tr><td> هزاز شاكر منصة (180 0) لخلط الأنابيب </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مجموعة شاكر المداري الحاضنة عند درجة 37 ليشبون الثقافات البكتيرية </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

a functional whole blood assay to measure viability of mycobacteria, using reporter-gene tagged bcg or m.tb (bcg lux/m.tb lux)

لقد لعبت المقايسات الفنية لفترة طويلة دورا رئيسيا في قياس استمناع لقاح معين. وأعرب عن تقليدية هذا النحو التتر جراثيم المصل. وقد مكنت الدراسات من التتر جراثيم المصل في الاستجابة لقاحات الطفولة لنا لتطوير والتحقق من وقف انتاج المواد الانشطارية لمستويات الحماية والاستجابات المناعية مثل خفض العرضية في الاستخدام الروتيني. وقد اتخذت هذه المقايسات إلى الأمام لا إلى تقييم لقاحات الروتينية التي تحفز الخلايا في المقام الأول بوساطة الحصانة في شكل المستجيب استجابات الخلايا التائية ، مثل لقاحات السل. في نموذج حيواني ، يتم تقييم أداء روتيني لمرشح معين في لقاح للجراثيم المقايسات الموحدة ، وتعرضوا جميعا الحالي رواية لقاح السل المرشحين لهذه الخطوة في تقييمها قبل مرحلة التجارب على الانسان 1. وينبغي تقييم استمناع وبالتالي احتمال فعالية اللقاحات الواقية المضادة للسل رواية الخضوع مثالي مماثل خطوة حكيمة التقييم في النماذج البشرية الآن ، بما في ذلك القياسات في المقايسات للجراثيم. هي راسخة المقايسات للجراثيم في سياق البحوث قاح السل في النماذج الحيوانية ، حيث يتم تطبيقها على الشاشة اللقاحات المرشحة اعدة. تخفيض الحمولة الجرثومية في وظائف الأجهزة المختلفة كما الرئيسي للقراءة من استمناع. ومع ذلك ، فقد أدرجت هذه المقايسات في أي التجارب السريرية للقاحات المضادة للسل الرواية حتى الآن. على الرغم من أنه لا يزال الغموض حول الآليات الدقيقة التي تؤدي إلى قتل متفطرات الضامة داخل الإنسان ، فهناك حاجة واضحة للتفاعل الضامة ، والخلايا التائية مع متفطرات. في مقايسة وصفها في هذه الورقة تمثل جيلا جديدا من المقايسات للجراثيم التي تمكن من الدراسات لهذه المكونات الخلوية الرئيسية مع جميع العوامل الأخرى الخلوية والخلطية موجودة في الدم كله ، من دون الادلاء افتراضات حول مساهمتهم الفردية النسبي. المقايسة التي وصفها مجموعتنا يستخدم كميات صغيرة من الدم الكامل وبالفعل استخدمت في دراسات من البالغين والأطفال في السل المتوطن الإعدادات. لقد أظهرنا استمناع من لقاح بي سي جي ، وزيادة نمو المتفطرات في المرضى المصابين بالفيروس ، فضلا عن تأثير العلاج المضاد للفيروس وفيتامين (د) على البقاء على قيد الحياة الفطرية في المختبر. نحن هنا تلخيص هذه المنهجية ، وتقديم بيانات استنساخ لنا باستخدام هذا النموذج البسيط نسبيا ، وانخفاض التكلفة ومجال الاستخدام. ملاحظة : التعاريف / المختصرات BCG = م لوكس BCG البقرية ، مونتريال السلالة ، حولت المكوك مع pSMT1 بلازميد يحمل جينات من luxAB harveyi الضمة ، تحت سيطرة GroEL بالمتفطرات (hsp60) المروج. كفو وحدة مستعمرة = التشكيل (وهو مقياس لقابلية الفطرية).

Watch this Scientific Journal Video about A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb BCG lux/M.Tb lux at JoVE.com

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb BCG lux/M.Tb lux

نحن تصف نهجا بديلا للتعداد متفطرات<em&gt; في المختبر</em&gt; ، والذي يستخدم مراسل الجينات الموسومة متفطرات بدلا من الوحدات المكونة للمستعمرة (كفو). &quot;البقاء&quot; من الكائنات الحية ، فضلا عن استضافة الاستجابة علامات. تقاس في وقت واحد ، وتوفير منخفضة التكلفة ، ونظام متعدد الاستعمالات والوظيفية للدراسات المضيف / الممرض التفاعلات في سياق السل

وظيفية فحص الدم لقياس الجامعة صلاحية مايكوباكتيريا ، وذلك باستخدام الجينات المرتبطة دلاليا مراسل بي سي جي إم أو السل (BCG لوكس / M. التربيوم لوكس)

Functional assays have long played a key role in measuring of immunogenicity of a given vaccine. This is conventionally expressed as serum bactericidal ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb (BCG lux/M.Tb lux)

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

توسيع وتنقية ، والتقييم الوظيفي للخلايا الدم المحيطية الإنسان NK

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay

تعداد خلايا الدم البيضاء الكبرى الطرفية بالسكان الدم للمحاكمات متعددة المراكز السريرية باستخدام الدم الكامل الفحص Phenotyping

Cryopreservation of peripheral blood leukocytes is widely used to preserve cells for immune response evaluations in clinical trials and offers many ...

Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

محمي مستضدات خلايا الدم الحمراء وظيفية بواسطة الغشاء مسمار Polyglycerols Hyperbranched الاتفاق

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Using the Overlay Assay to Qualitatively Measure Bacterial Production of and Sensitivity to Pneumococcal Bacteriocins

باستخدام تراكب الفحص لقياس نوعيا الإنتاج الجرثومي من والحساسية للالرئوية Bacteriocins

Streptococcus pneumoniae colonizes the highly diverse polymicrobial community of the nasopharynx where it must compete with resident organisms.  We have ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

كشف الجليكوجين في خلايا الدم المحيطي وحيدات النوى مع الدوري حمض شيف تلطيخ

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood

وتدفق Cytometric بسيط طريقة لقياس امتصاص الغلوكوز والجلوكوز التعبير الناقل للالقطعان الوحيدات في الدم الكامل

Monocytes are innate immune cells that can be activated by pathogens and inflammation associated with certain chronic inflammatory diseases. Activation of ...

Protective Efficacy and Pulmonary Immune Response Following Subcutaneous and Intranasal BCG Administration in Mice

الحماية فعالية والرئوي الاستجابة المناعية بعد تحت الجلد والطريق الأنفي BCG الإدارة في الفئران

Despite global coverage of intradermal BCG vaccination, tuberculosis remains one of the most prevalent infectious diseases in the world. Preclinical data ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

استخدام الوحيدات أحادي الطبقة الفحص لتقييم البلعمة بوساطة مستقبلات Fcγ

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Unravelling the Function of a Bacterial Effector from a Non-cultivable Plant Pathogen Using a Yeast Two-hybrid Screen

التكشف وظيفة من المستجيب البكتيرية من مسببات الأمراض النباتية غير الصالحة للزراعة باستخدام الخميرة شاشة ثنائية مختلطة

Unravelling the molecular mechanisms of disease manifestations is important to understand pathologies and symptom development in plant science. Bacteria ...