Name: visualization of caenorhabditis elegans cuticular structures using the lipophilic vital dye dii
Uploaded: 2012-01-30T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI at JoVE.com

Biz S. Taneja-Bageshwar, K. Beifuss, S. Kedroske, ve HC teşekkür etmek istiyorum. Yararlı tartışmalar için Hsiao. Bu çalışma, Moleküler Tıp TAMHSC Anabilim Dalı start-up fonları tarafından finanse edildi. Bileşik kapsamı ve dönen disk departmanı ve TAMHSC Dekan Ofisi tarafından sağlanan fonlar ile satın alındı. Bazı suşlar, Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi tarafından finanse edilen Caenorhabditis Genetik Merkezi tarafından verilmiştir . pRF4 (rol-6 (su1006)) A. Ateş bir hediye oldu.

1. Hazırlık DII, leke <ol><li> DMF 20 mg / ml DII (Biotium, Inc, Hayward, CA) stok solüsyonu hazırlayın. DII ışığa karşı hassastır, bu yüzden folyo sararak ışık DII korumak. </li><li> 0.6 mcL DII stok her nüfus için 399,4 mcL M9 ekleyerek DII bir çalışma seyreltme oluşturun. Bu son bir çalışma seyreltme 30 mcg / ml DII M9 vermelidir. Bu, aynı anda birden fazla popülasyonlar boyama için ölçeklendirilebilir. Kalkan DII tüp (ler) folyo sararak ışık. </li></ol> 2. Ne...

<ol>
	<li>Cox, G. N., Kusch, M., Edgar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cuticle+of+Caenorhabditis+elegans:+its+isolation+and+partial+characterization.">Cuticle of Caenorhabditis elegans: its isolation and partial characterization.</a> The Journal of Cell Biology. 90, 7-17 (1981).</li><li>Cox, G. N., Staprans, S., Edgar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuticle+of+Caenorhabditis+elegans.+II.+Stage-specific+changes+in+ultrastructure+and+protein+composition+during+postembryonic+development.">The cuticle of Caenorhabditis elegans. II. Stage-specific changes in ultrastructure and protein composition during postembryonic development.</a> Dev. Biol. 86, 456-470 (1981).</li><li>Hall, D., Altun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> C. elegans Atlas. , (2008).</li><li>Page, A. P., Johnstone, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuticle.">The cuticle.</a> The C. elegans Research Community. , (2007).</li><li>Kramer, J. M., Johnson, J. J., Edgar, R. S., Basch, C., Roberts, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sqt-1+gene+of+C.+elegans+encodes+a+collagen+critical+for+organismal+morphogenesis.">The sqt-1 gene of C. elegans encodes a collagen critical for organismal morphogenesis.</a> Cell. 55, 555-565 (1988).</li><li>Mende, N. v. o. n., Bird, D. M., Albert, P. S., Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=dpy-13:+a+nematode+collagen+gene+that+affects+body+shape.">dpy-13: a nematode collagen gene that affects body shape.</a> Cell. 55, 567-576 (1988).</li><li>Blaxter, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cuticle+surface+proteins+of+wild+type+and+mutant+Caenorhabditis+elegans.">Cuticle surface proteins of wild type and mutant Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Biological Chemistry. 268, 6600-6609 (1993).</li><li>Costa, M., Draper, B. W., Priess, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+actin+filaments+in+patterning+the+Caenorhabditis+elegans+cuticle.">The role of actin filaments in patterning the Caenorhabditis elegans cuticle.</a> Dev. Biol. 184, 373-384 (1997).</li><li>Sapio, M. R., Hilliard, M. A., Cermola, M., Favre, R., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zona+Pellucida+domain+containing+proteins,+CUT-1,+CUT-3+and+CUT-5,+play+essential+roles+in+the+development+of+the+larval+alae+in+Caenorhabditis+elegans.">The Zona Pellucida domain containing proteins, CUT-1, CUT-3 and CUT-5, play essential roles in the development of the larval alae in Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol.. 282, 231-245 (2005).</li><li>Johnstone, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cuticle+collagen+genes.+Expression+in+Caenorhabditis+elegans.">Cuticle collagen genes. Expression in Caenorhabditis elegans.</a> Trends Genet. 16, 21-27 (2000).</li><li>Kramer, J. M., French, R. P., Park, E. C., Johnson, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+rol-6+gene,+which+interacts+with+the+sqt-1+collagen+gene+to+determine+organismal+morphology,+encodes+a+collagen.">The Caenorhabditis elegans rol-6 gene, which interacts with the sqt-1 collagen gene to determine organismal morphology, encodes a collagen.</a> Mol. Cell Biol. 10, 2081-2089 (1990).</li><li>Thein, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+exoskeleton+collagen+COL-19:+an+adult-specific+marker+for+collagen+modification+and+assembly,+and+the+analysis+of+organismal+morphology.">Caenorhabditis elegans exoskeleton collagen COL-19: an adult-specific marker for collagen modification and assembly, and the analysis of organismal morphology.</a> Dev. Dyn. 226, 523-539 (2003).</li><li>McMahon, L., Muriel, J. M., Roberts, B., Quinn, M., Johnstone, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+sets+of+interacting+collagens+form+functionally+distinct+substructures+within+a+Caenorhabditis+elegans+extracellular+matrix.">Two sets of interacting collagens form functionally distinct substructures within a Caenorhabditis elegans extracellular matrix.</a> Molecular Biology of the Cell. 14, 1366-1378 (2003).</li><li>Link, C. D., Ehrenfels, C. W., Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant+expression+of+male+copulatory+bursa+surface+markers+in+Caenorhabditis+elegans.">Mutant expression of male copulatory bursa surface markers in Caenorhabditis elegans.</a> Development. 103, 485-495 (1988).</li><li>Tong, Y. G., Burglin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditions+for+dye-filling+of+sensory+neurons+in+Caenorhabditis+elegans.">Conditions for dye-filling of sensory neurons in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. Methods. 188, 58-61 (2010).</li><li>Singh, R. N., Sulston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+observations+on+moulting+in+Caenorhabditis+elegans.">Some observations on moulting in Caenorhabditis elegans.</a> Nematologica. 24, 63-71 (1978).</li><li>Collet, J., Spike, C. A., Lundquist, E. A., Shaw, J. E., Herman, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+osm-6,+a+gene+that+affects+sensory+cilium+structure+and+sensory+neuron+function+in+Caenorhabditis+elegans.">Analysis of osm-6, a gene that affects sensory cilium structure and sensory neuron function in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 148, 187-200 (1998).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li></ol>

Burada sunulan DII boyama yöntemi C. elegans manikür görselleştirmek için oldukça hızlı ve rahat bir şekilde sağlar . Repurposing ve optimize ederek, yaygın olarak görüntü çevreye maruz duyusal nöronlar 15,17 kullanılan bir yöntemdir, DII floresan alae ve halkalı yapılar (Şekil 1 ve 2), yanı sıra vulva, erkek kuyruk ve hermafrodit kuyruk başak leke için kullanılabilir (Şekil 3). Biz DII yeteneği inkübasyon çözüm ve zaman etkisi sürekli manikür (Tablo 1, Şekil 4) lek...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifler </td><td> Eşanlamlılar </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> DII </td><td> 1,1 &#39;-Dioctadecyl-3, 3,3&#39;, 3&#39;-tetramethylindocarbocyanine perklorat </td><td> Biotium, Inc. </td><td> 60010 </td><td> Stok seyreltme: DMF 20 mg / ml çalışma seyreltme: 30 mg / ml </td></tr><tr><td> DMF </td><td> Dimethylformamide </td><td> Sigma-Aldrich, Inc. </td><td> D4551 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Octylphenoxypolyethoxyethanol </td><td> VWR International, LLC. </td><td> EM-9410 </td><td></td></tr><tr><td> M9 </td><td> 22mm KH 2 PO 4, 42mm Na 2 HPO 4, 86mm NaCl, 1mm MgSO 4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> NGM &lt;/ Td&gt; <td> Nematodu büyüme ortamı </td><td> IPM Scientific, Inc. </td><td> 11006-501 </td><td> 18 NGM agar protokol hazırlanmış olabilir </td></tr><tr><td> Agar-agar </td><td></td><td> Merck Kimyasallar, Inc. </td><td> 1,01614 </td><td> % 4 su </td></tr><tr><td> Levamizol </td><td> Levamizol hidroklorür </td><td> Sigma-Aldrich, Inc. </td><td> 31742 </td><td> 100 mcM - 1 mM levamizol gerektiği gibi </td></tr><tr><td> Mikroskop slaytlar </td><td></td><td> VWR International, LLC. </td><td> 16005-106 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop kapak camları </td><td></td><td> VWR International, LLC. </td><td> 16004-302 </td><td></td></tr><tr><td> Bileşik kapsamı </td><td></td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td> A1M </td><td> Deney ihtiyaçlarına uygun hedefleri kullanın </td></tr><tr><td> TRITC veya diğer uyumlu filtre </td><td> &amp;nbsp; </td><td> Chroma Technology Corp. </td><td> 49005 </td><td> ET - DSRed (TRITC/Cy3) filtre seti Püskürtülen </td></tr></tbody></table>

visualization of caenorhabditis elegans cuticular structures using the lipophilic vital dye dii

C. kütikül elegans hayvan 1-4 dış çevreler son derece dayanıklı bir yapıdır . Manikür hayvan çevreden korur, aynı zamanda vücut şekli belirler ve motilitesi 4-6 önemli bir rol oynar sadece. Epidermal hücreler tarafından salgılanan çeşitli katmanları bir dıştaki lipit tabaka 7 de dahil olmak üzere, manikür oluşmaktadır. Dairesel sırtlar manikür annuli desen hayvan uzunluğu olarak adlandırılır ve geliştirme 8 tüm aşamalarında bulunmaktadır. Alae Belirli gelişim aşamaları sırasında L1, Dauer ve yetişkin aşamaları 2,9 de dahil olmak üzere mevcut çatılar. Cuticular kollajen organizasyonu etkileyen genlerindeki mutasyonlar cuticular yapısı ve hayvan vücut morfolojisi 5,6,10,11 değiştirebilir. Cuticular yapıları Fluores, cuticular görüntüleme DIC optik ile bileşik mikroskobu kullanarak vurgulamak mümkün, güncel yöntemleryüzde transgen ifade 12, antikor boyama 13 ve elektron mikroskobu 1. Etiketli buğday tohumu agglutinin (WGA) cuticular glikoproteinler görselleştirmek için kullanılan, ancak daha ince cuticular yapılar 14 çözümünde sınırlıdır. Floresan boya kullanarak cuticular yüzey boyama gözlenmiş, ancak ayrıntılı 15 hiç karakterize olmuştur. Biz canlı C. manikür görselleştirmek için bir yöntem mevcut kullanarak elegans, yaygın olarak C. kullanılan kırmızı floresan lipofilik boya DII (1,1 &#39;-dioctadecyl-3, 3,3&#39;, 3&#39;-tetramethylindocarbocyanine perklorat ) elegans çevreye maruz kalan nöronlar görselleştirmek için. DII boyama için optimize edilmiş Bu protokol, yüksek çözünürlüklü floresan annuli görselleştirme, alae, vulva, erkek kuyruk ve C hermafrodit kuyruk başak için basit, güçlü bir yöntemdir elegans.

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI at JoVE.com

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

Biz canlı manikür görselleştirmek için bir yöntem mevcut<em&gt; C. elegans</em&gt; Yaygın olarak kullanılan kırmızı floresan lipofilik boya DII (1,1 &#39;-dioctadecyl-3, 3,3&#39;, 3&#39;-tetramethylindocarbocyanine perklorat)<em&gt; C. elegans</em&gt; Çevreye maruz kalan nöronlar görselleştirmek. Alae ve halkalı cuticular yapılar optimize edilmiş bu protokol ile, DII tarafından boyanmış ve bileşik mikroskobu kullanarak gözlenen.

Görselleştirme Caenorhabditis Elegans Tırnak Yapıları Lipofilik Vital Boya, DII

The cuticle of C. elegans is a highly resistant structure that surrounds the exterior of the animal1-4. The cuticle not only protects the animal from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Ölçme Caenorhabditis elegans 96 Şey microtiter Tabaklar Ömrü

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Temel<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Yöntem: Senkronizasyon ve Gözlem

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

yetiştirme<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Laboratuvarı Üç boyutlu

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

DiI Perfusion as a Method for Vascular Visualization in Ambystoma mexicanum

DiI Perfusion as a Method for Vascular Visualization in Ambystoma mexicanum

Vasküler Görselleştirme İçin Bir Yöntem Olarak DiI Perfüzyonu<em&gt; Ambystoma mexicanum</em

Perfusion techniques have been used for centuries to visualize the circulation of tissues. Axolotl (Ambystoma mexicanum) is a species of salamander that ...

Quantitative Approaches for Studying Cellular Structures and Organelle Morphology in Caenorhabditis elegans

Quantitative Approaches for Studying Cellular Structures and Organelle Morphology in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans hücresel yapıları ve organelle morfoloji eğitim için nicel yaklaşımlar

Defining the cellular mechanisms underlying disease is essential for the development of novel therapeutics. A strategy frequently used to unravel these ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Dokuya Özgü Chaperone Etkileşimlerini Taramak için Caenorhabditis elegans'ı Kullanma

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans'ta Agrega Niceliğinin Otomatikleştirilmesi

A rise in the prevalence of neurodegenerative protein conformational diseases (PCDs) has fostered a great interest in this subject over the years. This ...

Hand Dissection of Caenorhabditis elegans Intestines

Hand Dissection of Caenorhabditis elegans Intestines

Caenorhabditis elegans Bağırsaklarının El Diseksiyonu

Comprised of only 20 cells, the Caenorhabditis elegans intestine&#160;is the nexus of many life-supporting functions, including digestion, metabolism, ...

Isolation and Characterization of the Natural Microbiota of the Model Nematode Caenorhabditis elegans

Isolation and Characterization of the Natural Microbiota of the Model Nematode Caenorhabditis elegans

Model Nematod Caenorhabditis elegans'ın Doğal Mikrobiyotasının İzolasyonu ve Karakterizasyonu

The nematode Caenorhabditis elegans interacts with a large diversity of microorganisms in nature. In general, C. elegans is commonly found in rotten plant ...