Name: in vitro uncoating of hiv-1 cores
Uploaded: 2011-11-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Uncoating of HIV-1 Cores at JoVE.com

HIV - 1 ودعمت دراسات uncoating في المختبر أيكن من منح المعاهد الوطنية للصحة AI40364 ، وAI50423 AI076121. وقدمت العديد من المواد الأساسية ، بما في ذلك الكواشف المستخدمة في ELISA P24 ، من قبل المعاهد الوطنية للصحة لأبحاث الايدز والبرنامج المرجعي ، شعبة الإيدز ، NIAID ، المعاهد الوطنية للصحة.

1. إنتاج جسيمات HIV - 1 قبل المتابعة ، يجب الحصول على إذن واتبع الإرشادات من مكتب السلامة للمؤسسة للعمل في مرفق السلامة الأحيائية الموافق عليها لفيروس نقص المناعة البشرية المعدية. يجب ضمان أن الرعاية المناسبة وتتبع احتياطات السلامة ?...

<ol>
	<li>Ganser, B. K., Li, S., Klishko, V. Y., Finch, J. T., Sundquist, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+and+analysis+of+conical+models+for+the+HIV-1+core.">Assembly and analysis of conical models for the HIV-1 core.</a> Science. 283, 80-83 (1999).</li><li>Li, S., Hill, C. P., Sundquist, W. I., Finch, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+reconstructions+of+helical+assemblies+of+the+HIV-1+CA+protein.">Image reconstructions of helical assemblies of the HIV-1 CA protein.</a> Nature. 407, 409-413 (2000).</li><li>Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+and+cellular+factors+that+regulate+HIV-1+uncoating.">Viral and cellular factors that regulate HIV-1 uncoating.</a> Curr. Opin. HIV. AIDS. 1, 194-199 (2006).</li><li>Forshey, B. M., Schwedler, U. v. o. n., Sundquist, W. I., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+human+immunodeficiency+virus+type+1+core+of+optimal+stability+is+crucial+for+viral+replication.">Formation of a human immunodeficiency virus type 1 core of optimal stability is crucial for viral replication.</a> J. Virol. 76, 5667-5677 (2002).</li><li>Forshey, B. M., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disassembly+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+cores+in+vitro+reveals+association+of+Nef+with+the+subviral+ribonucleoprotein+complex.">Disassembly of human immunodeficiency virus type 1 cores in vitro reveals association of Nef with the subviral ribonucleoprotein complex.</a> J. Virol. 77, 4409-4414 (2003).</li><li>Wacharapornin, P., Lauhakirti, D., Auewarakul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+capsid+mutations+on+HIV-1+uncoating.">The effect of capsid mutations on HIV-1 uncoating.</a> Virology. 358, 48-54 (2007).</li><li>Chen, C., Okayama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+transformation+of+mammalian+cells+by+plasmid+DNA.">High-efficiency transformation of mammalian cells by plasmid DNA.</a> Mol Cell Biol. 7, 2745-2752 (1987).</li><li>Aiken, C., Prasad, V. R., Ganjam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Molecular Biology. 485, 41-53 (2009).</li><li>Kotov, A., Zhou, J., Flicker, P., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+Nef+with+the+human+immunodeficiency+virus+type+1+core.">Association of Nef with the human immunodeficiency virus type 1 core.</a> J. Virol. 73, 8824-8830 (1999).</li><li>Kewalramani, V. N., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vpx+association+with+mature+core+structures+of+HIV-2.">Vpx association with mature core structures of HIV-2.</a> Virology. 218, 159-168 (1996).</li><li>Wehrly, K., Chesebro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p24+antigen+capture+assay+for+quantification+of+human+immunodeficiency+virus+using+readily+available+inexpensive+reagents.">p24 antigen capture assay for quantification of human immunodeficiency virus using readily available inexpensive reagents.</a> Methods. 12, 288-293 (1997).</li><li>Welker, R., Hohenberg, H., Tessmer, U., Huckhagel, C., Kr&#228;usslich, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+structural+analysis+of+isolated+mature+cores+of+human+immunodeficiency+virus+type+1.">Biochemical and structural analysis of isolated mature cores of human immunodeficiency virus type 1.</a> J. Virol. 74, 1168-1177 (2000).</li><li>Briggs, J. A., Wilk, T., Welker, R., Kr&#228;usslich, H. G., Fuller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+organization+of+authentic,+mature+HIV-1+virions+and+cores.">Structural organization of authentic, mature HIV-1 virions and cores.</a> EMBO J. 22, 1707-1715 (2003).</li><li>Auewarakul, P., Wacharapornin, P., Srichatrapimuk, S., Chutipongtanate, S., Puthavathana, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoating+of+HIV-1+requires+cellular+activation.">Uncoating of HIV-1 requires cellular activation.</a> Virology. 337, 93-101 (2005).</li><li>Accola, M. A., Ohagen, A., G&#246;ttlinger, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+cores:+retention+of+Vpr+in+the+absence+of+p6(gag.">Isolation of human immunodeficiency virus type 1 cores: retention of Vpr in the absence of p6(gag.</a> J. Virol. 74, 6198-6202 (2000).</li></ol>

وصف الأسلوب هنا لتنقية HIV - 1 النوى لدراسة uncoating في المختبر هو مفيد لدراسة هذه المرحلة من دورة الحياة HIV - 1 ، خصوصا بسبب عدم وجود طريقة لتحليل التحقق من صحة HIV - 1 uncoating في الخلايا المستهدفة. على الرغم من أن هذا الأسلوب يستخدم لتنقية تنبيذ فائق التوازن النوى ، والبعض الآخر ق...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td width="190"> اسم الكاشف </td><td width="197"> شركة </td><td width="114"> فهرس العدد </td><td width="161"> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro </td><td> 10-013 - CV </td><td></td></tr><tr><td> برنامج تلفزيوني </td><td> Cellgro </td><td> 21-031 - CV </td><td></td></tr><tr><td> تريتون - X - 100 </td><td> مالينكرودت شركة بيكر </td><td> 9002-93-1 </td><td></td></tr><tr><td> توين 20 </td><td> Acros </td><td> 9005-64-5 </td><td></td></tr><tr><td> 0.25 ٪ التربسين - EDTA </td><td> Cellgro </td><td> 25-053 - CI </td><td></td></tr><tr><td> 2XBBS </td><td></td><td></td><td> التكوين : 50mM BES [ع ه 6،95] ، 280 ملي مول كلوريد الصوديوم و 1.5 ملي نا 2 هبو 4. ضبط درجة الحموضة إلى 6.95في درجة حرارة الغرفة. تصفية وتعقيم في متجر في aliquots -20 درجة مئوية. </td></tr><tr><td> طلاء الأضداد : ريتوكسيماب إلى P24 (183 - H12 - 5C) </td><td> المعاهد الوطنية للصحة والبحوث الإيدز المرجعي برنامج الكاشف </td><td> 3537 </td><td></td></tr><tr><td> الابتدائية الأضداد : فيروس نقص المناعة البشرية الإيج (مصل المريض مفرط المناعة البشرية) </td><td> NIH أبحاث الإيدز والبرنامج المرجعي الكاشف </td><td> 3957 </td><td></td></tr><tr><td> الأجسام المضادة الثانوية : الماعز المضادة للمفتش الإنسان ، مترافق البيروكسيداز </td><td> ثقب </td><td> 31130 </td><td></td></tr><tr><td> HRP الركيزة </td><td> KPL المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 50-76-11 </td><td></td></tr><tr><td> Immulon 2HB 96 لوحات جيدة </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 3455 </td><td></td></tr><tr><td> وSW32Ti SW32.1 الدوارات تي نابذة فائقة السرعة ومتوافق </td> &lt;TD&gt; بيكمان كولتر </td><td></td><td></td></tr><tr><td> TLA - 55 الدوار ونابذة فائقة السرعة منضدية </td><td> بيكمان كولتر </td><td></td><td></td></tr><tr><td> سرعة عالية أنابيب microfuge </td><td> بيكمان كولتر </td><td> 326823 ، 358123 ، 357448 </td><td></td></tr><tr><td> التدرج التلقائي Densi كثافة تدفق fractionator </td><td> Labconco كورب </td><td> 4517000 </td><td></td></tr><tr><td> التدرج السابقة </td><td> شركة سي بي اس العلمية المحدودة </td><td> GM - 20 </td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro uncoating of hiv-1 cores

الجينوم من الفيروسات القهقرية هو المغطى في قفيصة محاطة المغلف الدهون. لlentiviruses ، مثل HIV - 1 ، وتتألف القشرة قفيصة المخروطية من البروتين CA رتبت بوصفها شعرية من مسدس. إغلاق قفيصة pentamers بنسبة 7 في نهاية اسعة و 5 في نهاية الضيقة للمخروط 1 و 2. المغطى في هذه القذيفة قفيصة هو مجمع بروتين نووي ريبوزي الفيروسية ، وأنهم يشكلون معا جوهر. بعد الانصهار في الغشاء الفيروسية مع غشاء الخلية المستهدفة ، يتم الافراج عن HIV - 1 في السيتوبلازم. قفيصة ثم يفكك الافراج CA الحرة في شكل قابل للذوبان 3 في عملية يشار إلى uncoating. ولا يزال الغموض يكتنف مكان وتوقيت الخلايا HIV - 1 uncoating. الأحماض الأمينية واحد التبديلات في كاليفورنيا التي تغير على استقرار قفيصة يضعف أيضا قدرة HIV - 1 إلى 4 تصيب الخلايا. هذا يدل على أن الاستقرار في قفيصة هو أمر حاسم لHIV - 1 العدوى. </p&gt; وقد HIV - 1 uncoating الصعب دراسة نظرا لعدم توافر فحوصات حساسة وموثوقة لهذه العملية. نحن هنا وصف الأسلوب الكمي للدراسة في المختبر باستخدام uncoating النوى معزولة عن جسيمات HIV - 1 المعدية. هذا النهج ينطوي على عزل النوى بالترسيب من خلال virions تتركز طبقة من المنظفات والى الانحدار الخطي السكروز ، في البرد. لتحديد uncoating ، يتم تحضين النوى معزولة عند 37 درجة مئوية لفترات مختلفة وتوقيتها لاحقا من قبل مكعبات تنبيذ فائق. ويتم تحليل مدى uncoating عن طريق قياس نسبة ضئيلة من CA في طاف. وقد استخدمت هذه الطريقة لتحليل آثار الطفرات الفيروسية على HIV - 1 الاستقرار قفيصة 4 ، 5 ، 6. وينبغي أن يكون من المفيد أيضا لدراسة دور العوامل الخلوية في HIV - 1 uncoating.

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Uncoating of HIV-1 Cores at JoVE.com

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

Uncoating هو خطوة ضرورية في مرحلة مبكرة من دورة الحياة HIV - 1 ، ويعرف بأنه تفكك قذيفة قفيصة والإفراج عن مجمع بروتين نووي ريبوزي الفيروسي (vRNP). هنا ، علينا أن نظهر تقنيات لعزل نواة سليمة من virions HIV - 1 لقياس وuncoating بهم<em&gt; في المختبر</em&gt;.

Uncoating في المختبر من HIV - 1 النوى

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

الاستدلال الوراثي من HIV - 1 Tropism باستخدام السكان على أساس تسلسل V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

التصوير من HIV-1 مغلف من صنع المشبك الفيروسية، واشارة على طبقات ثنائية الدهون الاصطناعية

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

و<em&gt; في المختبر</em&gt; المشارك عدوى نموذج لدراسة<em&gt; المتصورة المنجلية</em&gt; HIV-1-التفاعلات في الإنسان خلايا الوحيدات المشتقة الابتدائية المناعي

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

New Tools to Expand Regulatory T Cells from HIV-1-infected Individuals

أدوات جديدة لتوسيع الخلايا التائية التنظيمية من الأفراد HIV-1-المصابة

CD4+ Regulatory T cells (Tregs) are potent immune modulators and serve an important function in human immune homeostasis. Depletion of Tregs has led to ...

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

تقييد أنزيم الاستنساخ القائم على أسلوب لتقييم<em&gt; في المختبر</em&gt; القدرة تكرار HIV-1 النوع الفرعي C-الكمامة MJ4 همي الفيروسات

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

تقييم بتكوين لHIV-1 مغلف مثلوثي بروتينات سكرية باستخدام خلية القاعدة ELISA الفحص

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Isolation of Exosomes from the Plasma of HIV-1 Positive Individuals

عزل Exosomes من البلازما من HIV-1 الأفراد ايجابية

Exosomes are small vesicles ranging in size from 30 nm to 100 nm that are released both constitutively and upon stimulation from a variety of cell types. ...

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle (GUV) Membranes

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle GUV Membranes

تصور HIV-1 الكمامة ملزم لالعملاق Unilamellar الحويصلة (GUV) الأغشية

The structural protein of HIV-1, Pr55Gag (or Gag), binds to the plasma membrane in cells during the virus assembly process. Membrane binding of Gag is an ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

تقييم فعالية وسمية الرنا استهداف HIV-1 الإنتاج للاستخدام في الجينات أو العلاج بالعقاقير

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

يبلوع الهجرة والسرعة تقاس في لايف الابتدائية الضامة الإنسان المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية-1

Macrophages are phagocytic cells that play a major role at the crossroads between innate and specific immunity. They can be infected by the human ...