Name: in vitro uncoating of hiv-1 cores
Uploaded: 2011-11-08T13:00:00
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एचआईवी 1 Aiken प्रयोगशाला में uncoating अध्ययन एनआईएच AI40364 अनुदान, AI50423 और AI076121 द्वारा समर्थित थे. P24 एलिसा में इस्तेमाल किया अभिकर्मकों सहित कई महत्वपूर्ण सामग्री, NIH एड्स अनुसंधान और संदर्भ प्रोग्राम, एड्स के प्रभाग, NIAID, एनआईएच द्वारा प्रदान किया गया.

1. एचआईवी -1 कणों का उत्पादन आगे बढ़ने से पहले, आप अनुमति प्राप्त और अपनी संस्था के जैवसुरक्षा कार्यालय एक जैव सुरक्षा संक्रामक एचआईवी के लिए अनुमोदित सुविधा में काम करने से दिशा निर्देशों का ?...

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	<li>Ganser, B. K., Li, S., Klishko, V. Y., Finch, J. T., Sundquist, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+and+analysis+of+conical+models+for+the+HIV-1+core.">Assembly and analysis of conical models for the HIV-1 core.</a> Science. 283, 80-83 (1999).</li><li>Li, S., Hill, C. P., Sundquist, W. I., Finch, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+reconstructions+of+helical+assemblies+of+the+HIV-1+CA+protein.">Image reconstructions of helical assemblies of the HIV-1 CA protein.</a> Nature. 407, 409-413 (2000).</li><li>Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+and+cellular+factors+that+regulate+HIV-1+uncoating.">Viral and cellular factors that regulate HIV-1 uncoating.</a> Curr. Opin. HIV. AIDS. 1, 194-199 (2006).</li><li>Forshey, B. M., Schwedler, U. v. o. n., Sundquist, W. I., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+human+immunodeficiency+virus+type+1+core+of+optimal+stability+is+crucial+for+viral+replication.">Formation of a human immunodeficiency virus type 1 core of optimal stability is crucial for viral replication.</a> J. Virol. 76, 5667-5677 (2002).</li><li>Forshey, B. M., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disassembly+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+cores+in+vitro+reveals+association+of+Nef+with+the+subviral+ribonucleoprotein+complex.">Disassembly of human immunodeficiency virus type 1 cores in vitro reveals association of Nef with the subviral ribonucleoprotein complex.</a> J. Virol. 77, 4409-4414 (2003).</li><li>Wacharapornin, P., Lauhakirti, D., Auewarakul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+capsid+mutations+on+HIV-1+uncoating.">The effect of capsid mutations on HIV-1 uncoating.</a> Virology. 358, 48-54 (2007).</li><li>Chen, C., Okayama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+transformation+of+mammalian+cells+by+plasmid+DNA.">High-efficiency transformation of mammalian cells by plasmid DNA.</a> Mol Cell Biol. 7, 2745-2752 (1987).</li><li>Aiken, C., Prasad, V. R., Ganjam, K. 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N., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vpx+association+with+mature+core+structures+of+HIV-2.">Vpx association with mature core structures of HIV-2.</a> Virology. 218, 159-168 (1996).</li><li>Wehrly, K., Chesebro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p24+antigen+capture+assay+for+quantification+of+human+immunodeficiency+virus+using+readily+available+inexpensive+reagents.">p24 antigen capture assay for quantification of human immunodeficiency virus using readily available inexpensive reagents.</a> Methods. 12, 288-293 (1997).</li><li>Welker, R., Hohenberg, H., Tessmer, U., Huckhagel, C., Kr&#228;usslich, H. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+cores:+retention+of+Vpr+in+the+absence+of+p6(gag.">Isolation of human immunodeficiency virus type 1 cores: retention of Vpr in the absence of p6(gag.</a> J. Virol. 74, 6198-6202 (2000).</li></ol>

विधि यहाँ वर्णित करने के लिए एचआईवी - एक कोर को शुद्ध करने के लिए इन विट्रो में uncoating एचआईवी -1 जीवन चक्र के इस चरण में, विशेष रूप से एक मान्य पद्धति की अनुपलब्धता के कारण लक्ष्य कोशिकाओं में एचआईवी -1 uncoating विश?...

<table border="1"><tbody><tr><td width="190"> अभिकर्मक के नाम </td><td width="197"> कंपनी </td><td width="114"> सूचि संख्या </td><td width="161"> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro </td><td> 10-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> पीबीएस </td><td> Cellgro </td><td> 21-031-CV </td><td></td></tr><tr><td> ट्राइटन-X-100 </td><td> Mallinckrodt बेकर इंक </td><td> 9002-93-1 </td><td></td></tr><tr><td> 20 बीच </td><td> Acros </td><td> 9005-64-5 </td><td></td></tr><tr><td> 0.25% trypsin - EDTA </td><td> Cellgro </td><td> 25 053-CI </td><td></td></tr><tr><td> 2XBBS </td><td></td><td></td><td> रचना: 50mm BES [p 6.95 एच], 280 मिमी NaCl और 1.5 मिमी ना 2 4 HPO. 6.95 पीएच समायोजितकमरे के तापमान पर. बाँझ और -20 डिग्री सेल्सियस पर aliquots में स्टोर फ़िल्टर </td></tr><tr><td> कोटिंग प्रतिरक्षी: p24 के लिए मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (183-H12-5C) </td><td> NIH एड्स अनुसंधान और संदर्भ अभिकर्मक कार्यक्रम </td><td> 3537 </td><td></td></tr><tr><td> प्राथमिक एंटीबॉडी: एचआईवी पुलिस महानिरीक्षक (hyperimmune मानव रोगी के सीरम) </td><td> NIH एड्स रिसर्च संदर्भ और अभिकर्मक कार्यक्रम </td><td> 3957 </td><td></td></tr><tr><td> माध्यमिक एंटीबॉडी: बकरी विरोधी मानव आईजीजी, संयुग्मित peroxidase </td><td> पियर्स </td><td> 31130 </td><td></td></tr><tr><td> एचआरपी सब्सट्रेट </td><td> KPL इंक </td><td> 50-76-11 </td><td></td></tr><tr><td> Immulon 96 अच्छी तरह प्लेटें 2HB </td><td> थर्मो वैज्ञानिक </td><td> 3455 </td><td></td></tr><tr><td> SW32Ti और SW32.1 तिवारी रोटार और संगत ultracentrifuge </td> &lt;td&gt; Beckman कल्टर </td><td></td><td></td></tr><tr><td> TLA-55 रोटर और tabletop ultracentrifuge </td><td> Beckman कल्टर </td><td></td><td></td></tr><tr><td> उच्च गति microfuge ट्यूबों </td><td> Beckman कल्टर </td><td> 326,823, 358,123 357,448, </td><td></td></tr><tr><td> ऑटो Densi प्रवाह घनत्व ढाल fractionator </td><td> Labconco कॉर्प </td><td> 4517000 </td><td></td></tr><tr><td> ग्रेडियेंट पूर्व </td><td> सीबीएस वैज्ञानिक कं इंक </td><td> जीएम - 20 </td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro uncoating of hiv-1 cores

रेट्रोवायरस के जीनोम एक लिपिड लिफाफा से घिरा capsid में encased है. Lentiviruses, जैसे एचआईवी -1 के लिए, शंक्वाकार capsid खोल सीए षट्भुज का एक जाली के रूप में व्यवस्थित प्रोटीन से बना है. capsid व्यापक अंत में 7 pentamers और कोन 1, 2 की संकीर्ण अंत में 5 द्वारा बंद कर दिया है. इस capsid खोल में encased वायरल ribonucleoprotein जटिल है, और एक साथ वे कोर शामिल है. लक्ष्य कोशिका झिल्ली के साथ वायरल झिल्ली के विलय के बाद, एचआईवी -1 cytoplasm में जारी है. capsid तो एक uncoating के रूप में संदर्भित प्रक्रिया में घुलनशील रूप में 3 मुक्त सीए रिहा disassembles. intracellular और एचआईवी-1 uncoating के स्थान और समय खराब समझ रहे हैं. सीए में एकल एमिनो एसिड substitutions है कि capsid की स्थिरता में परिवर्तन भी 4 कोशिकाओं को संक्रमित एचआईवी -1 की क्षमता क्षीण है. यह इंगित करता है कि capsid की स्थिरता एचआईवी -1 संक्रमण के लिए महत्वपूर्ण है. </p&gt; एचआईवी-1 uncoating मुश्किल हो गया है इस प्रक्रिया के लिए संवेदनशील और विश्वसनीय assays की उपलब्धता की कमी के कारण अध्ययन. यहाँ हम संक्रामक एचआईवी-1 कणों से अलग कोर का उपयोग कर इन विट्रो में uncoating के अध्ययन के लिए एक मात्रात्मक विधि का वर्णन . दृष्टिकोण डिटर्जेंट की एक परत के माध्यम से और एक रैखिक sucrose ढाल में केंद्रित virions के अवसादन द्वारा कोर के अलगाव, ठंड में शामिल है. Uncoating यों, पृथक कोर 37 पर incubated हैं ° सी के विभिन्न समय के अंतराल बाद ultracentrifugation द्वारा pelleted के लिए. uncoating की हद तक सतह पर तैरनेवाला में सीए के अंश बढ़ाता द्वारा विश्लेषण किया है. यह दृष्टिकोण एचआईवी-1 capsid 4 स्थिरता, 5, 6 पर वायरल परिवर्तन के प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए नियोजित किया गया है. यह भी एचआईवी-1 uncoating में सेलुलर कारकों की भूमिका का अध्ययन करने के लिए उपयोगी होना चाहिए.

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In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

Uncoating एचआईवी -1 जीवन चक्र के प्रारंभिक चरण में एक आवश्यक कदम है और capsid खोल के disassembly और वायरल ribonucleoprotein जटिल (vRNP) की रिहाई के रूप में परिभाषित है. यहाँ, हम एचआईवी-1 virions से बरकरार कोर अलग करने के लिए और उनके uncoating बढ़ाता लिए तकनीक का प्रदर्शन<em&gt; इन विट्रो में</em&gt;.

एचआईवी-1 कोर की इन विट्रो Uncoating में

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

V3 के एचआईवी -1 tropism के genotypic निष्कर्ष का प्रयोग जनसंख्या आधारित अनुक्रमण

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

के इमेजिंग एचआईवी -1 लिफाफा प्रेरित virological Synapse और सिंथेटिक लिपिड bilayers पर संकेतन

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

एक<em&gt; इन विट्रो में</em&gt; सह - संक्रमण का अध्ययन करने के लिए मॉडल<em&gt; प्लाज्मोडियम फाल्सीपेरम</emमानव प्राथमिक monocyte व्युत्पन्न प्रतिरक्षा कोशिकाओं में&gt; एचआईवी -1 सहभागिता

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

New Tools to Expand Regulatory T Cells from HIV-1-infected Individuals

नई उपकरण एचआईवी -1 से संक्रमित व्यक्तियों से विनियामक टी कोशिकाओं का विस्तार करने के लिए

CD4+ Regulatory T cells (Tregs) are potent immune modulators and serve an important function in human immune homeostasis. Depletion of Tregs has led to ...

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

एक प्रतिबंध एंजाइम आधारित क्लोनिंग विधि का आकलन करने के लिए<em&gt; इन विट्रो</em&gt; एचआईवी -1 उपप्रकार सी चुप-MJ4 काइमेरिक वायरस की प्रतिकृति क्षमता

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

एक सेल आधारित एलिसा परख का उपयोग एचआईवी -1 trimeric लिफाफा glycoproteins के गठनात्मक मूल्यांकन

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Isolation of Exosomes from the Plasma of HIV-1 Positive Individuals

एचआईवी -1 सकारात्मक व्यक्तियों के प्लाज्मा से Exosomes का अलगाव

Exosomes are small vesicles ranging in size from 30 nm to 100 nm that are released both constitutively and upon stimulation from a variety of cell types. ...

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle (GUV) Membranes

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle GUV Membranes

एचआईवी -1 चुप के दृश्य विशालकाय unilamellar पुटिका (GUV) झिल्ली के लिए बाइंडिंग

The structural protein of HIV-1, Pr55Gag (or Gag), binds to the plasma membrane in cells during the virus assembly process. Membrane binding of Gag is an ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

जीन या ड्रग थेरेपी में उपयोग के लिए लक्ष्य निर्धारण एचआईवी -1 उत्पादन प्रभावकारिता और आरएनए की विषाक्तता का मूल्यांकन

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

फेगोसोम प्रवासन और वेग लाइव प्राथमिक मानव मैक्रोफेज एचआईवी -1 से संक्रमित में मापा

Macrophages are phagocytic cells that play a major role at the crossroads between innate and specific immunity. They can be infected by the human ...