Name: in vitro uncoating of hiv-1 cores
Uploaded: 2011-11-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Uncoating of HIV-1 Cores at JoVE.com

ВИЧ-1 раздевания исследования в лаборатории Эйкена были поддержаны грантами NIH AI40364, AI50423 и AI076121. Несколько ключевых материалов, в том числе реагенты, используемые в p24 ELISA, были предоставлены NIH исследований СПИДа и справочные программы, Отдел СПИДа, NIAID, NIH.

1. Производство ВИЧ-1 частиц Прежде чем продолжить, вы должны получить разрешение и следовать указаниям из офиса биобезопасности вашей организации на работу в центр биобезопасности одобрен для инфекционного ВИЧ. Вы должны убедиться, что надлежащего ухода и техники безоп?...

<ol>
	<li>Ganser, B. K., Li, S., Klishko, V. Y., Finch, J. T., Sundquist, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+and+analysis+of+conical+models+for+the+HIV-1+core.">Assembly and analysis of conical models for the HIV-1 core.</a> Science. 283, 80-83 (1999).</li><li>Li, S., Hill, C. P., Sundquist, W. I., Finch, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+reconstructions+of+helical+assemblies+of+the+HIV-1+CA+protein.">Image reconstructions of helical assemblies of the HIV-1 CA protein.</a> Nature. 407, 409-413 (2000).</li><li>Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+and+cellular+factors+that+regulate+HIV-1+uncoating.">Viral and cellular factors that regulate HIV-1 uncoating.</a> Curr. Opin. HIV. AIDS. 1, 194-199 (2006).</li><li>Forshey, B. M., Schwedler, U. v. o. n., Sundquist, W. I., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+human+immunodeficiency+virus+type+1+core+of+optimal+stability+is+crucial+for+viral+replication.">Formation of a human immunodeficiency virus type 1 core of optimal stability is crucial for viral replication.</a> J. Virol. 76, 5667-5677 (2002).</li><li>Forshey, B. M., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disassembly+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+cores+in+vitro+reveals+association+of+Nef+with+the+subviral+ribonucleoprotein+complex.">Disassembly of human immunodeficiency virus type 1 cores in vitro reveals association of Nef with the subviral ribonucleoprotein complex.</a> J. Virol. 77, 4409-4414 (2003).</li><li>Wacharapornin, P., Lauhakirti, D., Auewarakul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+capsid+mutations+on+HIV-1+uncoating.">The effect of capsid mutations on HIV-1 uncoating.</a> Virology. 358, 48-54 (2007).</li><li>Chen, C., Okayama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+transformation+of+mammalian+cells+by+plasmid+DNA.">High-efficiency transformation of mammalian cells by plasmid DNA.</a> Mol Cell Biol. 7, 2745-2752 (1987).</li><li>Aiken, C., Prasad, V. R., Ganjam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Molecular Biology. 485, 41-53 (2009).</li><li>Kotov, A., Zhou, J., Flicker, P., Aiken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+Nef+with+the+human+immunodeficiency+virus+type+1+core.">Association of Nef with the human immunodeficiency virus type 1 core.</a> J. Virol. 73, 8824-8830 (1999).</li><li>Kewalramani, V. N., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vpx+association+with+mature+core+structures+of+HIV-2.">Vpx association with mature core structures of HIV-2.</a> Virology. 218, 159-168 (1996).</li><li>Wehrly, K., Chesebro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p24+antigen+capture+assay+for+quantification+of+human+immunodeficiency+virus+using+readily+available+inexpensive+reagents.">p24 antigen capture assay for quantification of human immunodeficiency virus using readily available inexpensive reagents.</a> Methods. 12, 288-293 (1997).</li><li>Welker, R., Hohenberg, H., Tessmer, U., Huckhagel, C., Kr&#228;usslich, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+structural+analysis+of+isolated+mature+cores+of+human+immunodeficiency+virus+type+1.">Biochemical and structural analysis of isolated mature cores of human immunodeficiency virus type 1.</a> J. Virol. 74, 1168-1177 (2000).</li><li>Briggs, J. A., Wilk, T., Welker, R., Kr&#228;usslich, H. G., Fuller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+organization+of+authentic,+mature+HIV-1+virions+and+cores.">Structural organization of authentic, mature HIV-1 virions and cores.</a> EMBO J. 22, 1707-1715 (2003).</li><li>Auewarakul, P., Wacharapornin, P., Srichatrapimuk, S., Chutipongtanate, S., Puthavathana, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoating+of+HIV-1+requires+cellular+activation.">Uncoating of HIV-1 requires cellular activation.</a> Virology. 337, 93-101 (2005).</li><li>Accola, M. A., Ohagen, A., G&#246;ttlinger, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+cores:+retention+of+Vpr+in+the+absence+of+p6(gag.">Isolation of human immunodeficiency virus type 1 cores: retention of Vpr in the absence of p6(gag.</a> J. Virol. 74, 6198-6202 (2000).</li></ol>

Метод, описанный здесь, чтобы очистить ВИЧ-1 ядер для изучения раздевания в пробирке полезна для изучения этой стадии ВИЧ-1 жизненного цикла, особенно из-за отсутствия утвержденным методом для анализа на ВИЧ-1 раздевания в клетках-мишенях. Хотя этот метод использует равновесия ультрацен...

<table border="1"><tbody><tr><td width="190"> Название реагента </td><td width="197"> Компания </td><td width="114"> Номер в каталоге </td><td width="161"> Комментарии (необязательно) </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro </td><td> 10-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Cellgro </td><td> 21-031-CV </td><td></td></tr><tr><td> Тритон-Х-100 </td><td> Mallinckrodt Baker Inc </td><td> 9002-93-1 </td><td></td></tr><tr><td> Твин-20 </td><td> Acros </td><td> 9005-64-5 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% трипсина-EDTA </td><td> Cellgro </td><td> 25-053-ДИ </td><td></td></tr><tr><td> 2XBBS </td><td></td><td></td><td> Состав: 50 мМ BES [р Н 6,95], 280 мМ NaCl и 1,5 мМ Na 2 HPO 4. Отрегулируйте рН до 6,95при комнатной температуре. Фильтры стерилизовать и хранить в аликвоты при -20 ° C. </td></tr><tr><td> Покрытие антитела: моноклональные антитела к р24 (183-H12-5C) </td><td> NIH исследований СПИДа и справочные программы реагент </td><td> 3537 </td><td></td></tr><tr><td> Первичное антитело: ВИЧ-Ig (гипериммунных человеческой сыворотки больного) </td><td> NIH исследований СПИДа Справочно-реагент программе </td><td> 3957 </td><td></td></tr><tr><td> Вторичные антитела: Коза анти-человеческий IgG, пероксидазы сопряженных </td><td> Прокалывать </td><td> 31130 </td><td></td></tr><tr><td> HRP субстрат </td><td> KPL Inc </td><td> 50-76-11 </td><td></td></tr><tr><td> Immulon 2HB 96-луночных </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3455 </td><td></td></tr><tr><td> SW32Ti и SW32.1 Ti роторов и совместимых ультрацентрифуге </td> &lt;TD&gt; Beckman Coulter </td><td></td><td></td></tr><tr><td> TLA-55 ротор и настольные ультрацентрифуге </td><td> Beckman Coulter </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Высокие трубы микроцентрифужную скорости </td><td> Beckman Coulter </td><td> 326823, 358123, 357448 </td><td></td></tr><tr><td> Авто-плотностях потока градиента плотности ректификационной колонны </td><td> Labconco корпорации </td><td> 4517000 </td><td></td></tr><tr><td> Бывший Градиент </td><td> CBS Научно А.Ш. </td><td> ГМ-20 </td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro uncoating of hiv-1 cores

Геном ретровируса заключен в капсид окружен липидной оболочкой. Для лентивирусов, таких как ВИЧ-1, конической оболочки капсида состоит из белка CA расположены в виде решетки из шестиугольника. Капсида закрыто 7 пентамеры на широком конце и 5 на узкий конец конуса 1, 2. Заключенная в этой оболочки капсида является вирусный комплекс рибонуклеопротеидных, а вместе они составляют ядро. После слияния вирусной мембраны с мембраной клетки-мишени, ВИЧ-1 поступает в цитоплазму. Капсида то разбирает освобождения свободного ЦА в растворимой форме 3 в процесс называется раздевания. Внутриклеточные места и времени проведения ВИЧ-1 раздевания мало изучены. Одноместный аминокислотных замен в ЦА, которые изменяют стабильность капсида также ослабить способность ВИЧ-1, чтобы инфицировать клетки 4. Это означает, что стабильность капсид имеет решающее значение для ВИЧ-1 инфекции. </p&gt; ВИЧ-1 раздевания было трудно учиться из-за отсутствия свободных мест в чувствительных и надежных тестов для этого процесса. Здесь мы опишем количественный метод исследования раздевания в пробирке использованием ядра изолированы от инфекционных ВИЧ-1 частиц. Подход предполагает выделение ядер путем осаждения концентрированных вирионов через слой моющего средства и в линейный градиент сахарозы, в холод. Для количественной оценки раздевания, изолированных ядер инкубируют при 37 ° С для различных определенные интервалы времени, а затем осаждали ультрацентрифугирования. Степень раздевания анализируется количественная доля ЦА в супернатант. Этот подход был применен для анализа последствий вирусных мутаций на ВИЧ-1 капсида стабильности 4, 5, 6. Следует также полезны для изучения роли клеточных факторов ВИЧ-1 раздевания.

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Uncoating of HIV-1 Cores at JoVE.com

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

Раздевания является важным шагом на ранней стадии ВИЧ-1, жизненного цикла и определяется как разборку капсида оболочки и высвобождение вирусного комплекс рибонуклеопротеидных (vRNP). Здесь мы демонстрируем методы выделения нетронутыми ядер от ВИЧ-1 вирионов и для количественного их раздевания<em&gt; В пробирке</em&gt;.

В пробирке раздевания ВИЧ-1 сердечников

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Генотипическая вывода ВИЧ-1 тропизм Использование Популяционные Секвенирование V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Изображений ВИЧ-1 Envelope-индуцированной Вирусологические Synapse и сигнализации на синтетической Бислои липидов

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

<em&gt; В пробирке</em&gt; Ко-инфекция моделью для изучения<em&gt; Plasmodium тропической</em&gt; ВИЧ-1 Взаимодействие человека в первичной моноцитарных иммунных клеток

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

New Tools to Expand Regulatory T Cells from HIV-1-infected Individuals

Новые методы для расширения регуляторных Т-клеток от ВИЧ-1-инфицированных

CD4+ Regulatory T cells (Tregs) are potent immune modulators and serve an important function in human immune homeostasis. Depletion of Tregs has led to ...

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

Рестриктазой основе Клонирование метод оценки<em&gt; В пробирке</em&gt; Репликация Емкость ВИЧ-1 подтипа С Gag-MJ4 химерных вирусов

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Конформационный Оценка ВИЧ-1 тримерных гликопротеинов с помощью мобильного основе ELISA Пробирной

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Isolation of Exosomes from the Plasma of HIV-1 Positive Individuals

Выделение экзосомы из плазмы ВИЧ-1-инфицированных

Exosomes are small vesicles ranging in size from 30 nm to 100 nm that are released both constitutively and upon stimulation from a variety of cell types. ...

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle (GUV) Membranes

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle GUV Membranes

Визуализация ВИЧ-1 Gag Связывание с Giant однослойные везикулы (ГУВ) Мембраны

The structural protein of HIV-1, Pr55Gag (or Gag), binds to the plasma membrane in cells during the virus assembly process. Membrane binding of Gag is an ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Оценка эффективности и токсичности РНК Ориентация ВИЧ-1 Производство для использования в генной или терапии наркотиками

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

Фагосоме Миграция и скорость, измеренная в живых первичных макрофагах человека, инфицированных ВИЧ-1

Macrophages are phagocytic cells that play a major role at the crossroads between innate and specific immunity. They can be infected by the human ...