Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

نود أن نعترف الدكتور جوشوا باء روبين لهدية سخية من البلازميدات لنظام الفيروسة البطيئة وكذلك راو Mahil لاقتراح مفيد على إعداد الخلايا GL261 لوك. نشكر الطلاب دعم أبحاث الدماغ ورم (SSBTR) ، ومؤسسة العصبية بارو ومؤسسة والاس لدعمهم السخي. وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها رعاية الحيوان واللجنة المؤسسية استخدم في مستشفى القديس يوسف والمركز الطبي.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

وترعى حرية الوصول إلى هذه المقالة عن طريق العلوم الحياتية الفرجار.

هي التي غرست في قيحة الخلية على عمق 2.6 مم من سطح الدماغ بعد خلق جيب مم 0.4. لضمان تحديد المكان المناسب وعمق إبرة an يمكن اتخاذها للأشعة السينية باستخدام C - ذراع أو ما شابه ذلك الجهاز صورة الأشعة السينية تكثيف ، ولكن هذا هو اختياري. قد مضاعفات عملية جراحية تنشأ إذا لم يتم هذا الحيوان مخدرا بشكل صحيح ، وعند هذه النقطة يمكن أن ينتقل من الحيوان خلال التسريب الخلية. هذا يمكن أن يسبب تسرب خليط الخلية أو نزيف من مسار الإبرة. تسرب الخلايا أسباب نمو الخلايا السرطانية خارج الرحم. من المهم أيضا عدم ثقب البطين الذي يمكن القيام به إذا تم burrhole الإنسي إلى 2.3 مم وصفها في بروتوكول 4. تم اختبار تحديد المكان المناسب لانتشار الإبرة والخلية عن طريق غرس ماوس مع 2 صبغة الميثيلين الأزرق وميكرولتر تشريح أنسجة المخ للتحقق من موقع الصبغة التي غرست. في هذا البروتوكول قد استخدمنا الطيف IVIS في الجسم الحي ونظام التصوير روهو يعيش صورة البرنامج (V 4.0) مصممة للاستخدام مع هذا الصك. (الفرجار علوم الحياة). ويمكن استخدام أي نظام التصوير مماثلة في الجسم الحي وأدوات تحليل الصور للحصول على نتائج مماثلة. هذه الأنظمة توفر بعض المزايا على التصوير بالرنين المغناطيسي التقليدية (MRI) لمتابعة نمو الورم داخل القحف an التجريبية. الأكثر وضوحا هو التكاليف النسبية للصكوك 2 -- آلات التصوير بالرنين المغناطيسي الحيوانية أبعد ما تكون أكثر تكلفة ، وعادة ما تتطلب خدمات فني التصوير بالرنين المغناطيسي a المهرة. يمكن التصوير في الجسم الحي مثل ما هو موضح هنا ينبغي القيام به من قبل المستخدم النهائي. البيانات الكمية وتلألؤ بيولوجي ، بينما الكميات بيانات التصوير بالرنين المغناطيسي هو مضيعة للوقت وغير دقيق الى حد ما. وعلاوة على ذلك ، وصور الرنين المغناطيسي تظهر وذمة والتهاب بالإضافة إلى الخلايا السرطانية ويمكن أن يكون من الصعب فصل الورم من تأثير العلاج. لهذه الأسباب يمكن الحصول على قياسات دقيقة للورم الحجمي المتزايد يشكل تحديا. تلألؤ بيولوجي يتطلب ATPولذا فقط الخلايا السرطانية الحية المساهمة في بيانات حجم الورم. على الرغم من هذا ، هناك بعض المزايا في التصوير بالرنين المغناطيسي إذا كان الجهاز غير متوفرة. الخلايا لا يجب أن يكون المسمى مع علامة bioluminescent أن تصور بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي. قد تكون القدرة على تصور شبه tumoral ذمة يكون ميزة بالنسبة لبعض البروتوكولات التجريبية. وقوة كل من التكنولوجيات التي تستخدم واحد لا يحول دون استخدام الطرف الآخر ، بحيث يمكن الحصول على بيانات على نمو الورم فضلا عن وجود شبه tumoral ذمة والتهاب من نفس الحيوان عند كل التكنولوجيات المتاحة للباحث.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف أو توريد </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> GL261 - luc2 Bioware الترا </td><td> الفرجار العلوم الحياتية </td><td> GL261 - luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco في التعديل النسر متوسطة (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> الجنين مصل العجل (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> التخزين المؤقت Phospate المالحة (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> الفئران C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr </td><td> NCI - فريدريك </td><td></td><td></td></tr><tr><td> اكوا البصريات شحم دموع مرهم </td><td> Akorn المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (هيدروكلوريد الكيتامين) </td><td> وايث </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (زيلازين هيدروكلوريد) </td><td> وايث </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> آلات صغيرة الحيوان التجسيمي </td><td> Kopf الآلات </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump مع SYS - Micro4 المراقب </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> UMP3 - 1 </td><td> إذا لم يكن متوفرا ، فمن الممكن أن ضخ يدويا </td></tr><tr><td> مشطوف حقنة 10μl مع 26 إبرة قياس </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison الملقط </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield مشرح </td><td> كودمان </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16G 1 ½ دقيقة الإنزلاق الإبرة </td><td> بيكتون ، ديكنسون ، وشركة (دينار بحريني) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> بليد الجراحية المؤشر </td><td> دينار بحريني </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> حجم 15 بليد </td><td> دينار بحريني </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> Vicryl خياطة 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> شمع العظم </td><td> MEDLINE </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> العصي المسحة Povidine - اليود </td><td> MEDLINE </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D - Luciferin ملح البوتاسيوم </td><td> الفرجار العلوم الحياتية </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isoflurane) </td><td> باكستر </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero مجهر </td><td> كارل زايس ، وشركة </td><td></td><td> فإن أي مجهر الجراحية تكفي </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS الطيف مع نظام تخدير اختياري </td><td> الفرجار العلوم الحياتية </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

يتم التعرف على دبقي الماوس 261 (GL261) باعتبارها نموذجا في النظام المجراة أن يلخص العديد من الميزات من ورم أرومي دبقي الأشكال البشرية (GBM). وقد أدخل في الأصل خط الخلية عن طريق الحقن داخل الجمجمة من 3 cholantrene الميثيل في C57BL / 6 سلالة الماوس مسانج 1 ، ويمكن استخدامها لذلك ، المختصة مناعيا C57BL / 6 الفئران. بينما نستخدم GL261 ، يمكن استخدام بروتوكول التالية لغرس ورصد أي ورم داخل الجمجمة نموذج الفأر. وكانت المهندسة GL261 الخلايا لستابلي luciferase يراعة التعبير (GL261 لوك). أنشأنا أيضا أكثر إشراقا خط GL261 - luc2 الخلية ترنسفكأيشن مستقرة من الجين luc2 أعرب عن مروج CMV. واستخدمت الفئران C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (المتغير أبرص C57BL / 6) من المعهد الوطني للسرطان ، فريدريك ، دكتوراه في الطب من أجل القضاء على توهين طفيفة من جراء الجلد والفرو الأسود. مع استخدام C57BL البيضاء / 6 الفئران ؛ المجراة في التصوير باستخدام الطيف IVIS ايم في الجسم الحيشيخوخة النظام هو ممكن من يوم غرس (الفرجار العلوم الحياتية ، Hopkinton ، MA). وأظهرت GL261 لوك ​​وGL261 - luc2 خطوط الخلايا نفسها في سلوك خلايا الجسم الحي كما GL261 الأبوية. بعض ملامح مشتركة النسيجية الموجودة في GBMs الإنسان وهذا نموذج الفأر وتشمل : نخر الورم ، pseudopalisades ، اتساع الأوعية الدموية ، والغزو ، فرط الخلوية ، والتهاب 1. وأدلى قبل الزرع والحيوانات بواسطة حقنة تخدير داخل الصفاق الكيتامين (50 ملغ / كلغ) ، زيلازين (5 ملغ / كلغ) والبوبرينورفين (0.05 ملغ / كلغ) ، وضعت في جهاز المجسم وشق an مع مشرط على مدى الجمجمة خط الوسط. وقدم الخلفي burrhole 0.1mm الى 2.3mm bregma وعلى يمين خط الوسط. تم إدخال إبرة إلى عمق 0.4mm 3mm وسحبت إلى عمق 2.6mm. وقد غرست اثنين ميكرولتر من GL261 لوك ​​أو GL261 - luc2 الخلايا (خلايا 10 7 / مل) على مدى 3 دقائق. تم إغلاق burrholeوكان مع خياطة الجرح وعلى bonewax. بعد زرع الخلايا المجسم bioluminescent يتم اكتشافها من يوم غرس ويمكن تحليل الورم باستخدام ميزة إعادة الإعمار 3D صورة من صك IVIS الطيف. الحيوانات تلقي الحقن تحت الجلد من luciferin 150μg / كيلوغرام من وزن الجسم 20 دقيقة قبل التصوير. وكميا عبء الورم باستخدام يعني تلألؤ بيولوجي ورم مع مرور الوقت. وقد لوحظت الفئران الحاملة للورم اليومية لتقييم المراضة والموت الرحيم وعند واحد أو أكثر من الأعراض التالية موجودة : الخمول ، وعدم ambulate ، التقوس في الجلوس ، وعدم العريس ، وفقدان الشهية مما يؤدي إلى فقدان&gt; 10 ٪ من وزنه. والأورام واضحا في جميع الحيوانات في التشريح.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

زرع خلايا داخل الجمجمة من GL261 في C57BL / 6 الفئران تنتج الاورام الدبقية الخبيثة التي تلخص الكثير من السمات المميزة للورم أرومي دبقي الأشكال البشرية. استخدمنا التعبير عن الخلايا GL261 ستابلي luciferase للسماح لنا باستخدام<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير لمتابعة تطور الورم. الجراحة و 3D<em&gt; في الجسم الحي</emوتظاهر&gt; التصوير.

زرع داخل القحف مع 3d اللاحقة في فيفو Bioluminescent التصوير الاورام الدبقية الفئران

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

فأري الورم الكبدي Bioluminescent النموذجي

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

في الجسم الحي التصوير المزدوج الركيزة Bioluminescent

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

زرع الشريان السباتي الكفة لتحريك القص من التوتر في الفئران المستحثة تصلب الشرايين

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

داخل الجمجمة وزراعة المجسم<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير Bioluminescent من الأعضاء المستمدة من الحيوانات ورم في النظام النموذجي ماوس من الأشكال ورم أرومي دبقي

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

نموذج الفئران من زرع دعامات في الشريان السباتي لدراسة عودة التضيق

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

رواية عالية الدقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنية التصوير لدراسة الاستجابة الديناميكية للمنشآت داخل القحف لنمو الورم والتداوي

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

الفئران التنظير ل<em&gt; في فيفو</em&gt; شفاء المتعدد الوسائط التصوير من التسرطن وتقييم المعوية والتهاب الجرح

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

نموذج الفئران من فخذي الشريان إصابة سلك مع غرس المحيطة بالأوعية تسليم المخدرات التصحيح

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

التصور الكمي من التسلل الكريات البيض في نموذج الفئران من التهاب عضلة القلب مداهم من قبل ورقة ضوء المجهري

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...