Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

We willen graag Dr Joshua B. Rubin erkennen voor de gulle gift van de plasmiden voor het lentivirus systeem, alsook Mahil Rao voor nuttige suggestie over de voorbereiding van de GL261-luc cellen. Wij danken Studenten ondersteunen hersentumor Research (SSBTR), The Barrow Neurological Foundation en The Wallace Foundation voor hun genereuze steun. Experimenten op dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van het ziekenhuis St. Joseph en Medisch Centrum in te stellen.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

Gratis toegang tot dit artikel wordt gesponsord door Remklauw Life Sciences.

De cel inoculum wordt toegediend op een diepte van 2,6 mm van het oppervlak van de hersenen na het maken van een 0,4 mm zak. Om een ​​goede plaatsing en de diepte van de naald zorgen voor een X-ray kan worden genomen met behulp van een C-arm of een soortgelijke X-ray beeld intensivering van het apparaat, maar dit is optioneel. Complicaties van de operatie kan ontstaan ​​als het dier niet goed verdoofd, waarna het dier kan bewegen tijdens de celdeling infusie. Dit kan leiden tot lekkage van cel-mix of bloeden van de naald track. Lekkage van cellen veroorzaakt ectopische groei van tumorcellen. Het is ook belangrijk niet te doorboren het ventrikel, die kan worden gedaan als de burrhole wordt gemaakt mediaal van de 2,3 mm beschreven in het protocol 4. Een juiste plaatsing van de naald en cel verspreid werd getest door het inbrengen van een muis met 2 pi methyleenblauw kleurstof en ontleden van het hersenweefsel om de locatie van de kleurstof toegediend te controleren. In dit protocol hebben we de IVIS Spectrum in vivo imaging-systeem en tHij Living Image software (v 4.0) is ontworpen voor gebruik met dit instrument. (Caliper Life Sciences). Een vergelijkbaar systeem in vivo beeldvorming en beeldanalyse tools kunnen worden gebruikt om vergelijkbare resultaten te verkrijgen. Deze systemen bieden een aantal voordelen ten opzichte van de traditionele magnetische resonantie beeldvorming (MRI) om de groei van een experimentele intracraniale tumor te volgen. De meest voor de hand liggende is de relatieve kosten van de twee instrumenten - dieren MRI-machines zijn veel duurder en vergen doorgaans de diensten van een ervaren MRI-technicus. In vivo beeldvorming, zoals wat hier beschreven kan worden gedaan door de eindgebruiker. De bioluminescentie data is kwantitatief, terwijl de kwantificatie van de MRI-gegevens is tijdrovend en enigszins onnauwkeurig. Verder MRI-beelden tonen oedeem en ontsteking in aanvulling op tumorcellen en het kan moeilijk zijn om de tumor te scheiden van effect van de behandeling. Om deze redenen het verkrijgen van nauwkeurige volumetrische metingen van groeiende tumor kan een uitdaging zijn. Bioluminescentie vereist ATP, Dus alleen levende tumorcellen bijdrage leveren aan de tumorgrootte gegevens. Ondanks dit, zijn er een aantal voordelen aan het MRI als een machine beschikbaar is. Cellen hoeven niet te worden geëtiketteerd met een lichtgevend marker te gevisualiseerd worden door MRI. De mogelijkheid om peri-tumorale oedeem visualiseren kan een voordeel voor sommige experimentele protocollen worden. Een sterk punt van beide technologieën is dat het gebruik van een niet verzet tegen het gebruik van de andere, zodat gegevens kunnen worden verkregen op de groei van de tumor en de aanwezigheid van peri-tumorale oedeem en ontsteking van hetzelfde dier wanneer beide technologieën beschikbaar zijn aan de onderzoeker.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum of de levering </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ultra </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticine (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Foetaal Calf Serum (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Muizen </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA Tears Glijmiddel oogzalf </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (ketamine hydrochloride) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (xylazine hydrochloride) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Small Animal stereotaxische Instrument </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump met SYS-Micro4 Controller </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> UMP3-1 </td><td> Indien niet beschikbaar, is het mogelijk om handmatig te bezielen </td></tr><tr><td> 10μl injectiespuit met 26 gauge schuine naald </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Forceps </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield dissector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Precision Glide Naald </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgische Blade handgreep </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Grootte 15 Blade </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl Suture </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Bot Wax </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine-Jodium Swab Sticks </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferine kaliumzout </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isofluraan) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Microscoop </td><td> Carl Zeiss, Inc </td><td></td><td> Elke chirurgische microscoop kan worden volstaan ​​met </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS Spectrum met optionele anesthesie-systeem </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

De muis glioom 261 (GL261) wordt erkend als een in vivo model systeem dat recapituleert veel van de kenmerken van de menselijke glioblastoma multiforme (GBM). De cel lijn werd oorspronkelijk veroorzaakt door intracraniale injectie van 3-methyl-cholantrene in een C57BL / 6 syngene muizenstam 1, daarom immunologisch bevoegde C57BL / 6 muizen gebruikt kan worden. Terwijl we gebruiken GL261, kan het volgende protocol worden gebruikt voor de implantatie en monitoring van iedere intracraniële tumor muis model. GL261 cellen werden ontworpen om stabiel te uiten vuurvlieg luciferase (GL261-luc). We hebben ook het helderder GL261-luc2 cellijn door stabiele transfectie van de luc2-gen tot expressie gebracht van de CMV promoter. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr muizen (albino variant van C57BL / 6) van het National Cancer Institute, Frederick, MD werden gebruikt om het licht demping veroorzaakt door de zwarte huid en vacht te elimineren. Met het gebruik van albino C57BL / 6 muizen, in vivo beeldvorming met behulp van de IVIS Spectrum in vivo imaging-systeem is mogelijk vanaf de dag van implantatie (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). De GL261 en GL261-luc-luc2 cellijnen toonde hetzelfde in vivo gedrag als het ouderlijk GL261 cellen. Een deel van de gedeelde histologische kenmerken aanwezig zijn in de menselijke GBMS en dit muismodel zijn onder andere: tumor necrose, pseudopalisades, neovascularisatie, invasie, hypercellularity, en ontsteking 1. Voorafgaand aan de implantatie dieren werden verdoofd door een intraperitoneale injectie van ketamine (50 mg / kg), xylazine (5 mg / kg) en buprenorfine (0,05 mg / kg), geplaatst in een stereotactisch apparaat en een incisie werd gemaakt met een scalpel over de craniale middellijn. Een burrhole werd 0,1 mm posterior van de bregma en 2.3mm rechts van de middellijn. Een naald werd ingebracht tot een diepte van 3 mm en 0,4 mm teruggetrokken tot een diepte van 2,6 mm. Twee pi van GL261-luc of GL261-luc2 cellen (10 7 cellen / ml) werden toegediend in de loop van 3 minuten. De burrhole werd geslotenmet bonewax en de incisie gehecht was. Naar aanleiding van stereotactische implantatie van de lichtgevende cellen detecteerbaar vanaf de dag van implantatie en de tumor kan worden geanalyseerd met behulp van de 3D-beeldreconstructie kenmerk van de IVIS Spectrum instrument. Dieren krijgen een subcutane injectie van 150μg luciferine / kg lichaamsgewicht 20 minuten voorafgaand aan de beeldvorming. Tumorlast wordt gekwantificeerd met behulp van bioluminescentie betekenen tumor in de tijd. Tumor-dragende muizen werden dagelijks geobserveerd om te beoordelen en morbiditeit werden gedood wanneer een of meer van de volgende symptomen aanwezig zijn: lusteloosheid, gebrek aan wandelen, gebogen houding, niet te verzorgen, anorexia wat resulteert in&gt; 10% gewichtsverlies. Tumoren werden duidelijk in alle van de dieren op autopsie.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Intracraniële implantatie van GL261 cellen in C57BL / 6 muizen produceert kwaadaardige gliomen dat veel van de kenmerken van de menselijke glioblastoma multiforme samenvatten. We gebruikten GL261 cellen die stabiel uitdrukken luciferase om ons in staat om te gebruiken<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming tot tumorprogressie te volgen. De operatie en 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming worden aangetoond.

Intracraniële Implantatie met Latere 3D In Vivo Bioluminescent Imaging van Murine Gliomen

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Murine Bioluminescent Lever Tumor Model

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual ondergrond Bioluminescent Imaging

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

Implantatie van een carotis Cuff voor het activeren van Shear-stress geïnduceerde atherosclerose in Muizen

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactische Intracraniale Implantatie en<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging van tumorxenograften in een Muis Model Systeem van glioblastoma multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Een Muizenmodel van Stent Implantatie in de halsslagader voor de Studie van Restenose

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel Hoge-resolutie<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging techniek om de Dynamic Response van intracraniële structuren om tumorgroei en Therapeutics Studie

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Muizen Endoscopie voor<em&gt; In Vivo</em&gt; Multimodal Imaging van Carcinogenese en Evaluatie van intestinale wondgenezing en ontsteking

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Muizenmodel van Femorale Artery Wire Injury met Implantatie van een Perivasculaire Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Uitputting van de Muis Cellen van geënte, humane tumoren verbetert Downstream Analyse van Target Cellen

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kwantitatieve visualisatie van leukocytinfectiet in een muizenmodel van Fulminant-myocarditis door middel van lichte microscopie

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...