Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Nous tenons à remercier le Dr Joshua B. Rubin pour le don généreux de plasmides pour le système de lentivirus ainsi que Mahil Rao pour suggestion utile à la préparation des cellules GL261-Luc. Nous remercions les étudiants Soutien recherche sur les tumeurs cérébrales (SSBTR), Barrow Neurological La Fondation et la Fondation Wallace pour leur généreux soutien. Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements énoncés par le soin des animaux et du Comité institutionnel utilisation de l&#39;Hôpital St. Joseph et Medical Center.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

Accès gratuit à cet article est sponsorisé par Caliper Life Sciences.

L&#39;inoculum cellulaire est perfusée à une profondeur de 2,6 mm de la surface du cerveau après la création d&#39;une poche de 0,4 mm. Pour assurer un placement correct et la profondeur de l&#39;aiguille d&#39;une radiographie peut être prise à l&#39;aide d&#39;un C-Arm ou autre dispositif de l&#39;image aux rayons X s&#39;intensifie, mais ceci est optionnel. Les complications de la chirurgie peuvent survenir si l&#39;animal n&#39;est pas correctement sous sédation, à quel point l&#39;animal peut se déplacer pendant la perfusion de cellules. Cela peut provoquer une fuite de mélange de cellules ou des saignements de trajet de l&#39;aiguille. Fuite des cellules provoque une croissance ectopique de cellules tumorales. Il est également important de ne pas percer le ventricule qui peut être fait si le burrhole est fait en dedans de la 2,3 mm décrite dans le protocole 4. Placement correct de la propagation de seringues et de cellules a été testé en infusant une souris avec deux colorants méthylène ul bleu et la dissection du tissu cérébral pour vérifier l&#39;emplacement du colorant infusé. Dans ce protocole, nous avons utilisé le spectre IVIS l&#39;imagerie in vivo du système et tIl Living logiciel Image (v 4.0) conçu pour une utilisation avec cet instrument. (Caliper Life Sciences). Toute comparables dans le système d&#39;imagerie in vivo et des outils d&#39;analyse d&#39;image peut être utilisée pour obtenir des résultats similaires. Ces systèmes fournissent certains avantages sur l&#39;imagerie par résonance magnétique classique (IRM) pour suivre la croissance d&#39;une tumeur intracrânienne expérimentale. Le plus évident est le coût relatif des deux instruments - machines animales IRM sont beaucoup plus chers et nécessitent généralement des services d&#39;un technicien qualifié IRM. L&#39;imagerie in vivo, comme ce qui était décrit ici peut être fait par l&#39;utilisateur final. Les données quantitatives bioluminescence est, tandis que la quantification des données de l&#39;IRM prend beaucoup de temps et quelque peu inexacte. Par ailleurs, les images IRM montrent un œdème et l&#39;inflammation, en plus de cellules tumorales et il peut être difficile de séparer la tumeur de l&#39;effet du traitement. Pour ces raisons, l&#39;obtention de mesures précises de la tumeur en pleine croissance volumétrique peut être un défi. La bioluminescence nécessite de l&#39;ATP, Donc que les cellules tumorales de vie contribuent à la taille de la tumeur de données. Malgré cela, il ya certains avantages à l&#39;IRM si une machine est disponible. Les cellules n&#39;ont pas à être marqué avec un marqueur bioluminescent être visualisés par IRM. La capacité à visualiser péri-tumoral oedème peut être un avantage pour certains protocoles expérimentaux. A force de ces deux technologies est que l&#39;aide l&#39;un n&#39;empêche pas l&#39;utilisation de l&#39;autre, afin que les données peuvent être obtenus sur la croissance de la tumeur ainsi que la présence de zones péri-tumorale œdème et l&#39;inflammation du même animal, lorsque les deux technologies sont disponibles pour le chercheur.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif ou de la fourniture </td><td> Société </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ultra </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Généticine (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal (SVF) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphate saline tamponnée (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> Souris C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA larmes onguent ophtalmique Lubrifiant </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (chlorhydrate de kétamine) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (chlorhydrate de xylazine) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Petit instrument stéréotaxique animaux </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump par SYS-Micro4 Controller </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> UMP3-1 </td><td> S&#39;il n&#39;est pas disponible, il est possible d&#39;insuffler manuellement </td></tr><tr><td> Seringue avec 10 ul de calibre 26 biseautés aiguille </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison forceps </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield Dissecteur </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Précision Glide aiguille </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Poignée lame chirurgicale </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Taille 15 Lame </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 suture Vicryl </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> La cire d&#39;os </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Bâtons Swab Povidine-iode </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> Sel de potassium D-luciférine </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (isoflurane) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Microscope </td><td> Carl Zeiss, Inc </td><td></td><td> Toute microscope chirurgical suffira </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS spectre avec un système d&#39;anesthésie option </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

La souris gliome 261 (GL261) est reconnu comme un système modèle in vivo qui récapitule plusieurs des caractéristiques du glioblastome humain (GBM). La lignée cellulaire a été initialement provoquée par l&#39;injection intracrânienne de 3-méthyl-cholantrene dans un C57BL / 6 souche de souris syngéniques 1; donc immunologiquement compétentes souris C57BL / 6 peut être utilisé. Bien que nous utilisions GL261, le protocole suivant peut être utilisé pour l&#39;implantation et le suivi de tous les modèles tumoraux de souris intracrânienne. GL261 cellules ont été conçues pour exprimer de façon stable la luciférase de luciole (GL261-Luc). Nous avons également créé le plus lumineux de ligne GL261-luc2 cellule par transfection stable du gène exprimé luc2 du promoteur CMV. Souris C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (variante albinos de C57BL / 6) de l&#39;Institut national du cancer, Frederick, MD ont été utilisés pour éliminer le atténuation de la lumière causée par la peau noire et la fourrure. Avec l&#39;utilisation de C57BL albinos / 6 souris; l&#39;imagerie in vivo en utilisant le spectre IVIS in vivo imle vieillissement du système est possible à partir du jour de l&#39;implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). Le GL261-Luc et GL261-luc2 lignées cellulaires ont montré le même comportement in vivo que le GL261 parentale cellules. Certaines des caractéristiques histologiques partagé présent dans GBM humain et ce modèle de souris comprennent: nécrose tumorale, pseudopalisades, néovascularisation, une invasion, une hypercellularité et l&#39;inflammation 1. Avant l&#39;implantation d&#39;animaux ont été anesthésiés par une injection intrapéritonéale de kétamine (50 mg / kg), la xylazine (5 mg / kg) et la buprénorphine (0,05 mg / kg), placé dans un appareil de stéréotaxie et une incision a été faite avec un bistouri au cours de la ligne médiane du crâne. Un burrhole postérieure a été faite à l&#39;0.1mm 2.3mm bregma et à droite de la ligne médiane. Une aiguille est insérée à une profondeur de 0,4 mm 3mm et retiré à une profondeur de 2,6 mm. Deux ul du GL261-Luc ou GL261-luc2 cellules (10 7 cellules / ml) ont été perfusés au cours de 3 minutes. Le burrhole a été ferméavec bonewax et l&#39;incision a été suturée. Après l&#39;implantation stéréotaxique les cellules bioluminescentes sont détectables à partir du jour de l&#39;implantation et la tumeur peut être analysée en utilisant la fonction image 3D de reconstruction de l&#39;instrument Spectrum IVIS. Les animaux reçoivent une injection sous-cutanée de 150μg luciférine / kg de poids corporel 20 min avant l&#39;imagerie. Charge tumorale est quantifiée en utilisant la bioluminescence tumorale moyenne au cours du temps. Souris porteuses de tumeurs ont été observés quotidiennement pour évaluer la morbidité et ont été euthanasiés lorsque un ou plusieurs des symptômes suivants sont présents: la léthargie, incapacité à déambuler, une posture voûtée, non marié, l&#39;anorexie entraîne une perte&gt; 10% du poids. Les tumeurs ont été évident dans tous les animaux présents sur l&#39;autopsie.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

L&#39;implantation intracrânienne d&#39;GL261 cellules en souris C57BL / 6 produit gliomes malins qui récapitulent plusieurs des caractéristiques de glioblastome humain. Nous avons utilisé des cellules exprimant de façon stable GL261 luciférase pour nous permettre d&#39;utiliser<em&gt; In vivo</em&gt; Imagerie pour suivre la progression tumorale. La chirurgie et la 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Imagerie sont démontrés.

Implantation intracrânienne avec 3D ultérieures In Vivo Bioluminescent imagerie des gliomes murin

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Modèle murin Bioluminescent tumeurs hépatiques

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

Recherche

Médecine

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo double Substrat Bioluminescent Imaging

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

Implantation d&#39;une manchette carotidienne pour le déclenchement de cisaillement-stress athérosclérose induite chez la souris

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Implantation stéréotaxique intracrânienne et<em&gt; In vivo</em&gt; Imagerie bioluminescente de xénogreffes tumorales dans un système de modèle de souris de glioblastome multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Un modèle murin d&#39;implantation d&#39;une endoprothèse dans l&#39;artère carotide pour l&#39;étude de la resténose

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel haute résolution<em&gt; In vivo</em&gt; Technique d&#39;imagerie pour étudier la réponse dynamique des structures intracrâniennes à la croissance tumorale et de thérapeutique

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murin endoscopie pour<em&gt; In Vivo</em&gt; Guérison multimodale d&#39;imagerie de la cancérogenèse et de l&#39;évaluation de la plaie intestinale et l&#39;inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Modèle murin de l&#39;artère fémorale fil des blessures à l&#39;implantation d&#39;un périvasculaire Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Appauvrissement des cellules de souris de xénogreffes de tumeurs humaines améliore de manière significative l&#39;analyse en aval des cellules cibles

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Visualisation quantitative de l&#39;infiltration de leucocytes dans un modèle murin de myocardite fulminante par microscopie à feuilles lumineuses

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...