Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Wir möchten Dr. Joshua B. Rubin für das großzügige Geschenk der Plasmide für die Lentivirus-System sowie Mahil Rao für hilfreiche Anregung für die Vorbereitung der GL261-luc-Zellen erkennen. Wir bedanken uns bei Studenten Unterstützung Brain Tumor Research (SSBTR), The Barrow Neurological Foundation und The Wallace Foundation für ihre großzügige Unterstützung. Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her durch die Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss der St. Joseph-Hospital und Medical Center eingerichtet durchgeführt.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

Freier Zugang zu diesem Artikel wird von Caliper Life Sciences gefördert.

Die Zelle Inokulum wird in einer Tiefe von 2,6 mm von der Oberfläche des Gehirns nach der Erstellung eines 0,4 mm Tasche infundiert. Um eine korrekte Platzierung und Tiefe der Nadel sorgen für eine X-ray kann aufgenommen mit einem C-Arm oder ähnliches Röntgenbild Intensivierung Gerät, jedoch ist diese optional. Komplikationen bei der Operation auftreten können, wenn das Tier nicht ordnungsgemäß betäubt, an welchem ​​Punkt kann das Tier während der Zellteilung Infusion zu bewegen. Dies kann zu Undichtigkeiten der Zelle Mix oder Blutungen aus Nadel zu verfolgen. Austreten von Zellen verursacht ektopische Wachstum von Tumorzellen. Es ist auch wichtig, nicht die Punktion der Ventrikel, was getan werden kann, wenn die BOHRLOCHRESERVOIR wird medial von der 2,3 mm in das Protokoll 4 beschrieben. Die richtige Platzierung der Nadel und Zelle verteilt wurde durch Infusion einer Maus mit 2 ul Methylenblau und seziert das Hirngewebe um die Position der infundierten Farbstoff überprüfen getestet. In diesem Protokoll haben wir die IVIS Spectrum in-vivo-Bildgebung und t verwendeter lebt Image Software (v 4.0) für die Verwendung mit diesem Instrument. (Caliper Life Sciences). Alle vergleichbaren in-vivo-Imaging-System und Bild-Analyse-Tools können verwendet werden, um ähnliche Ergebnisse zu erzielen. Diese Systeme bieten einige Vorteile gegenüber herkömmlichen Magnet-Resonanz-Tomographie (MRT), um das Wachstum eines experimentellen intrakraniellen Tumor zu folgen. Der offensichtlichste ist die relativen Kosten der 2-Instrumente - Tier MRT-Geräte sind wesentlich teurer und erfordern in der Regel die Dienste eines qualifizierten MRI-Techniker. In-vivo-Bildgebung, wie, was hier beschrieben, kann durch den Endverbraucher durchgeführt werden. Die Biolumineszenz Daten quantitative, während die Quantifizierung von MRT-Daten ist zeitaufwändig und etwas ungenau. Darüber hinaus zeigen MRT-Aufnahmen Ödemen und Entzündungen zusätzlich zu Tumorzellen und es kann schwierig sein, Tumor-Behandlung Wirkung zu trennen. Aus diesen Gründen erhalten genaue volumetrische Messungen des wachsenden Tumors kann eine Herausforderung sein. Biolumineszenz erfordert ATPDaher nur lebende Tumorzellen beitragen, die Tumorgröße Daten. Trotzdem gibt es einige Vorteile der MRT, ob eine Maschine zur Verfügung steht. Cells müssen nicht mit einem Biolumineszenz-Marker werden durch MRI sichtbar gekennzeichnet sein. Die Fähigkeit, peri-Tumor-Ödem visualisieren kann ein Vorteil für einige experimentelle Protokolle werden. Eine Stärke der beiden Technologien ist, dass mit einem nicht ausschließt, die Verwendung der anderen, so können Daten über das Wachstum des Tumors sowie das Vorhandensein von peri-Tumor-Ödemen und Entzündungen aus dem gleichen Tier gewonnen werden, wenn beide Technologien verfügbar sind an den Forscher.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes oder Lieferung </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ultra- </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal Calf Serum (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospate Buffered Saline (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Mäuse </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA Tränen Lubricant Augensalbe </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (Ketamin Hydrochlorid) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (Xylazinhydrochlorid) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Small Animal stereotaktische Instrument </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump mit SYS-Micro4-Controller </td><td> World Precision Instruments </td><td> UMP3-1 </td><td> Falls nicht vorhanden, ist es möglich, manuell ziehen </td></tr><tr><td> 10 &amp;mgr; l-Spritze mit 26 Gauge abgeschrägte Nadel </td><td> World Precision Instruments </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Zange </td><td> World Precision Instruments </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield Dissector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Precision Glide Needle </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgische Klinge Griff </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Größe 15 Blatt </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl Naht </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Knochenwachs </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidin-Jod-Swab Sticks </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferin Kaliumsalz </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isofluran) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Mikroskop </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td> Jeder OP-Mikroskop genügt </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS Spectrum mit optionalem Anästhesie-System </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

Die Maus Gliom 261 (GL261) als in-vivo-Modell erkannt, dass rekapituliert viele der Funktionen des menschlichen Glioblastoma multiforme (GBM). Die Zelllinie wurde ursprünglich von intrakraniellen Injektion von 3-Methyl-cholantrene in eine C57BL / 6 syngenen Mausstamm 1 induzierte, deshalb immunologisch kompetenten C57BL / 6 Mäuse verwendet werden kann. Während wir GL261 verwenden, können das folgende Protokoll für die Implantation und Überwachung jeder intrakraniellen Maus-Tumor-Modell verwendet werden. GL261-Zellen wurden stabil exprimieren, Leuchtkäfer-Luciferase (GL261-luc) entwickelt. Wir schuf auch die helleren GL261-luc2 Zelllinie durch stabile Transfektion der luc2 Gen aus dem CMV-Promotors exprimiert. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Mäusen (Albino-Variante der C57BL / 6) von der National Cancer Institute, Frederick, MD wurden verwendet, um das Licht Dämpfung durch schwarze Haut und Fell zu eliminieren. Mit dem Einsatz von Albino C57BL / 6 Mäusen, in-vivo-Bildgebung mit dem IVIS Spectrum in vivo imAltern ist ab dem Tag der Implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) möglich. Die GL261-luc und GL261-luc2 Zelllinien zeigten die gleichen In-vivo-Verhalten der Eltern GL261-Zellen. Einige der gemeinsamen histologischen Merkmale in der menschlichen GBM und das Maus-Modell beinhalten: Tumor-Nekrose, pseudopalisades, Neovaskularisation, Invasion, Hyperzellularität und Entzündungen 1. Vor der Implantation Tiere wurden durch eine intraperitoneale Injektion von Ketamin (50 mg / kg), Xylazin (5 mg / kg) und Buprenorphin (0,05 mg / kg), in einem stereotaktischen Apparat und einen Einschnitt gelegt betäubt wurde mit einem Skalpell über die aus kranialen Mittellinie. Ein BOHRLOCHRESERVOIR war 0.1mm posterior zum Bregma und 2,3 mm nach rechts von der Mittellinie aus. Eine Nadel wurde bis in eine Tiefe von 3mm und zurückgezogen 0.4mm bis zu einer Tiefe von 2,6 mm eingesetzt. Zwei ul der GL261-luc oder GL261-luc2 Zellen (10 7 Zellen / ml) wurden im Verlauf von 3 Minuten infundiert. Die BOHRLOCHRESERVOIR wurde geschlossenmit bonewax und der Schnitt genäht. Nach stereotaktische Implantation der Biolumineszenz-Zellen sind ab dem Tag der Implantation nachweisbar und der Tumor kann unter Verwendung des 3D-Bildrekonstruktion Merkmal der IVIS Spectrum Instrument sein. Tiere erhalten eine subkutane Injektion von 150μg Luciferin / kg Körpergewicht 20 min vor der Bildgebung. Tumorlast wird unter Verwendung bedeuten Tumor Biolumineszenz im Laufe der Zeit. Tumor-tragende Mäuse wurden täglich auf Morbidität beurteilen beobachtet und wurden eingeschläfert, wenn einer oder mehrere der folgenden Symptome vorhanden sind: Lethargie, das Versagen der ambulate, gekrümmte Haltung, das Versagen der Bräutigam, Anorexie was bei&gt; 10% Gewichtsverlust. Die Tumore wurden offensichtlich in all der Tiere bei der Obduktion.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Intrakranielle Implantation von GL261-Zellen in C57BL / 6 Mäusen produziert maligne Gliome, dass viele Merkmale der menschlichen Glioblastoma multiforme zu rekapitulieren. Wir verwendeten GL261-Zellen stabil exprimiert Luziferase, damit wir verwenden<em&gt; In vivo</em&gt; Bildgebung zu folgen Tumorprogression. Die Operation und 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Bildgebung demonstriert.

Intrakranielle Implantation mit anschließender 3D In Vivo Bioluminescent Imaging von Murine Gliome

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Murine Bioluminescent Leber Tumor-Modell

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

Forschung

Medizin

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual-Substrat Bioluminescent Imaging

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

Implantation einer Karotis Cuff für Triggering Shear-Stress-Induced Arteriosklerose bei Mäusen

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotaktische Intrakranielle Implantation und<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging der Tumorxenotransplantaten in einem Maus-Modell-System des Glioblastoma multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Ein Mausmodell der Stentimplantation in der Arteria carotis für das Studium der Restenose

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel Hochauflösende<em&gt; In vivo</em&gt; Bildtechnik, um die Dynamik der intrakranielle Strukturen zu Tumorwachstum und Therapeutics Studieren

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoskopie für<em&gt; In Vivo</em&gt; Multimodale Bildgebung der Krebsentstehung und Bewertung der Darm Wundheilung und Entzündung

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Mausmodell der Femoralarterie Draht Verletzung mit Implantation einer Perivaskuläre Drug Delivery-Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Depletion von Maus-Zellen aus menschlichem Tumorxenografte deutlich verbessert Downstream-Analyse von Zielzellen

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Quantitative Visualisierung von Leukozyten-Infiltrat in einem Murin-Modell der Fulminant-Myokarditis durch Licht-Blatt-Mikroskopie

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...