Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

ברצוננו להודות לד&quot;ר יהושע ב &#39;רובין על המתנה הנדיבה של פלסמידים למערכת lentivirus וכן ראו Mahil עבור ההצעה מועיל על הכנת התאים GL261 לוק. אנו מודים לתלמידים תמיכה גידול במוח מחקר (SSBTR), נוירולוגיות בארו קרן קרן וואלאס על תמיכתם הנדיבה. ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש החולים סנט ג&#39;וזף המרכז הרפואי.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

גישה חופשית המאמר הזה הוא בחסות Caliper מדעי החיים.

Inoculum התא הוא החדיר בעומק של 2.6 מ&quot;מ מפני השטח של המוח לאחר יצירת כיס 0.4 מ&quot;מ. כדי להבטיח השמה עומק נכונה של המחט רנטגן ניתן לקחת באמצעות C-Arm או מכשיר דומה רנטגן תמונה הגברת, אך זו היא אופציונלית. סיבוכים של הניתוח עשוי להיווצר אם בעל החיים אינו מסומם כהלכה, ובנקודה בעלי חיים עשוי לעבור במהלך עירוי לתא. זה יכול לגרום דליפה של תערובת תאים או דימום מן המסלול מחט. דליפה של תאים מחוץ לרחם גורם צמיחה של תאים סרטניים. חשוב גם לא לנקב את החדר שבו ניתן לעשות אם burrhole עשוי המדיאלי מ&quot;מ 2.3 המתואר בפרוטוקול 4. מיקום נכון של המחט התפשטות התא נבדק על ידי יציקת עכבר עם צבע 2 μl מתילן כחול לנתח את רקמת המוח כדי לבדוק את המיקום של הצבע רווי. בפרוטוקול זה השתמשנו ספקטרום IVIS in vivo הדמיה המערכת tהוא חי תוכנה תמונה (v 4.0) מיועד לשימוש עם מכשיר זה. (Caliper מדעי החיים). כל השוואה במערכת הדמיה vivo ו כלי ניתוח התמונה ניתן להשתמש כדי להשיג תוצאות דומות. מערכות אלו מספקות כמה יתרונות על פני הדמיה המסורתית תהודה מגנטית (MRI) כדי לעקוב אחר הצמיחה של הגידול תוך גולגולתי ניסיוני. הברורה ביותר היא העלויות היחסית של 2 מכשירים - מכונות בבעלי חיים MRI הם הרבה יותר יקר בדרך כלל דורשים את שירותיו של טכנאי מיומן MRI. בשנת vivo הדמיה כגון מה שתואר כאן ניתן לעשות זאת על ידי משתמש הקצה. נתוני פליטת אור הוא כמותי, בעוד quantitation של נתוני ה-MRI היא גוזלת זמן מדויק במקצת. יתר על כן, בתמונות MRI להראות בצקת ודלקת בנוסף תאים סרטניים זה יכול להיות קשה להפריד בין הגידול אפקט הטיפול. מסיבות אלה השגת מדידות מדויקות של נפח הגידול הגובר יכול להיות אתגר. פליטת אור דורש ATPולכן רק תאים סרטניים חיים לתרום את הנתונים גודל הגידול. למרות זאת, יש כמה יתרונות על ה-MRI אם המכשיר זמין. תאים לא צריך להיות שסומנו בסמן bioluminescent להיות דמיינו ידי בדיקת MRI. היכולת לדמיין peri-tumoral בצקת עשוי להיות יתרון עבור חלק פרוטוקולי הניסוי. כוח של טכנולוגיות הן כי באמצעות אחד אינו מונע את השימוש של האחר, כך ניתן לקבל נתונים על הצמיחה של הגידול, כמו גם את נוכחותו של בצקת peri-tumoral ודלקת מן החי זהה כאשר שניהם זמינים טכנולוגיות החוקר.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב או אספקת </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> GL261 luc2-BioWare Ultra </td><td> Caliper מדעי החיים </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco של הנשר השתנה בינוני (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> עוברית עגל סרום (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospate שנאגרו מלוחים (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr עכברים </td><td> NCI-פרדריק </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA דמעות עיניים חומר סיכה משחה </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (hydrochloride קטמין) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (hydrochloride xylazine) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> בעלי חיים קטנים Stereotaxic Instrument </td><td> Kopf מכשירים </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump עם SYS-Micro4 Controller </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> UMP3-1 </td><td> אם לא זמין, ניתן להחדיר באופן ידני </td></tr><tr><td> 10μl מזרק עם מחט מד 26 משופעים </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison מלקחיים </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> פנפילד מבתר </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16G ½ 1 Precision Glide מחט </td><td> Beckton, דיקינסון החברה (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> להב כירורגי טפל </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> 15 גודל Blade </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> תפר Vicryl 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> עצם שעווה </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine-יוד ספוגית מקלות </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferin מלח אשלגן </td><td> Caliper מדעי החיים </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isoflurane) </td><td> בקסטר </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI מיקרוסקופ Pentero </td><td> Carl Zeiss, Inc </td><td></td><td> כל מיקרוסקופ כירורגי יספיקו </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS ספקטרום עם מערכת הרדמה אופציונלי </td><td> Caliper מדעי החיים </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

Glioma העכבר 261 (GL261) מזוהה במערכת מודל vivo כי משחזר רבות מהתכונות של האדם multiforme glioblastoma (GBM). קו התא היה מושרה במקור על ידי הזרקה תוך גולגולתי של 3 cholantrene-מתיל לתוך C57BL / 6 זן עכבר syngeneic 1, ולכן המוסמכת immunologically C57BL / 6 עכברים ניתן להשתמש. בעוד אנו משתמשים GL261, פרוטוקול הבאים יכולים לשמש להשתלה וניטור של כל מודל העכבר תוך גולגולתי הגידול. GL261 היו תאים מהונדסים ביציבות להביע גחלילית בלוציפראז (GL261 לוק). אנחנו גם יצר את קו בהיר GL261-luc2 התא על ידי transfection יציב של הגן luc2 הביע מן האמרגן CMV. עכברים C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (גרסה של לבקנים C57BL / 6) מן המכון הלאומי לסרטן, פרדריק, MD שימשו כדי לחסל את הנחתה אור הנגרמת על ידי עור פרווה שחור. עם השימוש C57BL לבקן / 6 עכברים; בתחום ההדמיה vivo באמצעות ספקטרום IVIS in vivo imהזדקנות מערכת אפשרי מיום ההשתלה (Caliper מדעי החיים, Hopkinton, MA). GL261 לוק ו-GL261 luc2 שורות תאים הראו אותו בהתנהגות vivo כמו GL261 תאים ההורים. חלק מהתכונות היסטולוגית משותפת נוכח GBMs האדם מודל זה עכבר כוללים: נמק הגידול, pseudopalisades, neovascularization, פלישה, hypercellularity, ודלקת 1. לפני ההשתלה החיות היו מורדמים בזריקה intraperitoneal של קטמין (50 מ&quot;ג / ק&quot;ג), xylazine (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו - עצירות (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג), להציב מנגנון stereotactic ואת חתך נעשה עם אזמל על הגולגולת קו האמצע. Burrhole נעשה האחורי 0.1mm ל 2.3mm גבחת וגם בצד ימין של קו האמצע. מחט הוכנס לעומק של 0.4mm 3mm ומסוגר עד לעומק של 2.6mm. שני μl של GL261 לוק או GL261-luc2 תאים (10 7 תאים / מ&quot;ל) היו חדורים במשך 3 דקות. Burrhole נסגרעם bonewax ואת החתך היה sutured. בעקבות ההשתלה stereotactic התאים bioluminescent הם לגילוי מיום ההשתלה הגידול ניתן לנתח באמצעות תמונה 3D שחזור תכונה של המכשיר ספקטרום IVIS. בעלי חיים מקבלים זריקה תת עורית של 150μg luciferin / ק&quot;ג משקל גוף 20 דקות לפני הדמיה. נטל הגידול לכמת באמצעות פליטת אור הגידול מתכוון לאורך זמן. נושאות גידולים בעכברים נצפו יומי כדי להעריך את התחלואה היו מורדמים כאשר אחד או יותר מהתסמינים הבאים נוכחים: עייפות אי ambulate, יציבה כפופה, אי החתן, אנורקסיה שגורם לאובדן&gt; 10% ממשקל. גידולים ניכרו כל החיות על necropsy.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

ההשתלה תוך גולגולתי של תאים לתוך GL261 C57BL / 6 עכברים מייצרת gliomas ממאיר לשחזר רבים מסימני ההיכר של multiforme glioblastoma האדם. השתמשנו GL261 התאים ביציבות להביע בלוציפראז כדי לאפשר לנו להשתמש<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה לעקוב אחרי התקדמות הגידול. ניתוח 3D<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה הם הפגינו.

השרשה תוך גולגולתי עם 3D לאחר In vivo Bioluminescent הדמיה של gliomas Murine

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

במצע כפולה vivo bioluminescent ההדמיה

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em&gt; בחי</em&gt; הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

העכברי אנדוסקופיה ל<em&gt; בVivo</em&gt; ריפוי Multimodal הדמיה של היווצרות הסרטן וההערכה של מעיים פצע ודלקת

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

דגם Murine של עורק הירך חוט פגיעה בהשרשה של perivascular החדרת תרופות תיקון

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

ויזואליזציה כמותית של ליקוציטים לחדור במודל Murine של שריר הלב הדוקרני על ידי מיקרוסקופית גיליון אור

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...