Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
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हम lentivirus GL261 - ल्यूक कोशिकाओं की तैयारी पर उपयोगी सुझाव के लिए के रूप में अच्छी तरह के रूप में प्रणाली माहिल राव के लिए plasmids के उदार उपहार के लिए डा. यहोशू बी रुबिन स्वीकार करते हैं करना चाहते हैं. हम SSBTR ब्रेन ट्यूमर () अनुसंधान, बैरो स्नायविक फाउंडेशन और अपने उदार सहायता के लिए वालेस फाउंडेशन सहायक छात्र धन्यवाद. जानवरों पर प्रयोग संस्थागत पशु देखभाल और सेंट जोसेफ अस्पताल और मेडिकल सेंटर का प्रयोग समिति द्वारा निर्धारित दिशा निर्देशों और नियमों के अनुसार में प्रदर्शन किया गया.

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	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

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एक 0.4 मिमी जेब बनाने के बाद सेल inoculum 2.6 मिमी की गहराई में मस्तिष्क की सतह से संचार होता है. उचित और सुई के स्थान गहराई सुनिश्चित करने के एक एक्स - रे एक सी शाखा या इसी तरह की छवि एक्स - रे तेज डिवाइस का उपयोग कर लिया जा सकता है है, तथापि, यह वैकल्पिक है. सर्जरी की जटिलताओं अगर पशु ठीक से बेहोश नहीं है उठता है, जो बिंदु पर पशु सेल जलसेक के दौरान कदम हो सकता है. इस सेल या सुई ट्रैक से खून बह रहा है मिश्रण का रिसाव हो सकता है. कोशिकाओं के रिसाव ट्यूमर कोशिकाओं के अस्थानिक वृद्धि का कारण बनता है. यह भी नहीं जो किया जा सकता है वेंट्रिकल पंचर महत्वपूर्ण है अगर burrhole 2.3 मिमी 4 प्रोटोकॉल में वर्णित करने के लिए औसत दर्जे का बना है. सुई और सेल प्रसार के उचित स्थान 2 μl methylene नीले डाई के साथ एक माउस infusing और मस्तिष्क के ऊतकों विदारक संचार डाई के स्थान की जाँच के द्वारा परीक्षण किया गया था. इस प्रोटोकॉल में हम vivo इमेजिंग प्रणाली और टी में IVIS स्पेक्ट्रम का इस्तेमाल किया हैवह छवि (4.0 v) सॉफ्टवेयर इस उपकरण के साथ उपयोग के लिए तैयार रहते हैं. (कैलिपर लाइफ साइंसेज). Vivo इमेजिंग सिस्टम और छवि विश्लेषण उपकरण में कोई तुलना करने के लिए इसी तरह के परिणाम प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इन प्रणालियों परंपरागत चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) के लिए एक प्रयोगात्मक intracranial ट्यूमर के विकास का पालन पर कुछ लाभ प्रदान करते हैं. सबसे स्पष्ट 2 उपकरणों के रिश्तेदार लागत जानवर एमआरआई मशीन कहीं अधिक महंगे हैं और आम तौर पर एक कुशल एमआरआई तकनीशियन की सेवाओं की आवश्यकता है. जैसे क्या यहाँ वर्णित किया गया था vivo इमेजिंग में अंत उपयोगकर्ता के द्वारा किया जा सकता है . bioluminescence डेटा मात्रात्मक है, जबकि एमआरआई डेटा के quantitation समय लेने वाली और कुछ हद तक अयथार्थ है. इसके अलावा, एमआरआई छवियों edema और ट्यूमर कोशिकाओं के अलावा में सूजन दिखाने के लिए और यह मुश्किल हो सकता है उपचार के प्रभाव से ट्यूमर अलग कर सकते हैं. इन कारणों के लिए बढ़ ट्यूमर की सटीक बड़ा माप प्राप्त करने के लिए एक चुनौती हो सकती है. Bioluminescence एटीपी की आवश्यकताइसलिए ही रहने वाले ट्यूमर कोशिकाओं ट्यूमर का आकार डेटा के लिए योगदान. इस के बावजूद, वहाँ एमआरआई के लिए कुछ लाभ कर रहे हैं अगर एक मशीन उपलब्ध है. कक्ष एक bioluminescent एमआरआई द्वारा visualized किया जा मार्कर के साथ लेबल नहीं किया जा है. पेरी-tumoral edema कल्पना करने की क्षमता कुछ प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के लिए एक लाभ हो सकता है. दोनों प्रौद्योगिकियों के एक ताकत है कि का उपयोग कर एक दूसरे का उपयोग नहीं रोकता है, तो डेटा ट्यूमर के विकास के रूप में अच्छी तरह के रूप में पेरी tumoral और एक ही पशु से edema सूजन की उपस्थिति पर प्राप्त किया जा सकता है जब दोनों प्रौद्योगिकियों उपलब्ध हैं शोधकर्ता के लिए.

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक या आपूर्ति के नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> GL261 - luc2 Bioware अल्ट्रा </td><td> कैलिपर लाइफ साइंसेज </td><td> GL261 - luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> भ्रूण बछड़ा सीरम (एफसीएस) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospate buffered खारा (पीबीएस) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr चूहे </td><td> NCI-फ्रेडरिक </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Akwa आँसू स्नेहक नेत्र मरहम </td><td> Akorn इंक </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (ketamine हाइड्रोक्लोराइड) </td><td> विथ </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (xylazine हाइड्रोक्लोराइड) </td><td> विथ </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> लघु पशु Stereotaxic साधन </td><td> Kopf उपकरण </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> SYS-Micro4 नियंत्रक के साथ UltraMicroPump </td><td> विश्व परिशुद्धता उपकरण </td><td> UMP3 - 1 </td><td> उपलब्ध नहीं यदि यह संभव है मैन्युअल मन में बैठाना </td></tr><tr><td> 26 गेज के साथ 10μl सिरिंज सुई beveled </td><td> विश्व परिशुद्धता उपकरण </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison संदंश </td><td> विश्व परिशुद्धता उपकरण </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield जाँच - पड़ताल </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g एक साढ़े प्रेसिजन ग्लाइड सुई </td><td> Beckton, डिकिंसन और कंपनी (बी) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> सर्जिकल ब्लेड हैंडल </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> आकार 15 ब्लेड </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl सिवनी </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> अस्थि वैक्स </td><td> मेडलाइन </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine-आयोडीन झाड़ू से साफ़ करना छड़ें </td><td> मेडलाइन </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> डी Luciferin पोटेशियम साल्ट </td><td> कैलिपर लाइफ साइंसेज </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isoflurane) </td><td> बैक्सटर </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero माइक्रोस्कोप </td><td> कार्ल Zeiss, Inc </td><td></td><td> कोई शल्य चिकित्सा खुर्दबीन पर्याप्त होगा </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS स्पेक्ट्रम वैकल्पिक संज्ञाहरण प्रणाली के साथ </td><td> कैलिपर लाइफ साइंसेज </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The cell line was originally induced by intracranial injection of 3-methyl-cholantrene into a C57BL/6 syngeneic mouse strain 1; therefore, immunologically competent C57BL/6 mice can be used. While we use GL261, the following protocol can be used for the implantation and monitoring of any intracranial mouse tumor model. GL261 cells were engineered to stably express firefly luciferase (GL261-luc). We also created the brighter GL261-luc2 cell line by stable transfection of the luc2 gene expressed from the CMV promoter. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr mice (albino variant of C57BL/6) from the National Cancer Institute, Frederick, MD were used to eliminate the light attenuation caused by black skin and fur. With the use of albino C57BL/6 mice; in vivo imaging using the IVIS Spectrum in vivo imaging system is possible from the day of implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). The GL261-luc and GL261-luc2 cell lines showed the same in vivo behavior as the parental GL261 cells. Some of the shared histological features present in human GBMs and this mouse model include: tumor necrosis, pseudopalisades, neovascularization, invasion, hypercellularity, and inflammation 1.
Prior to implantation animals were anesthetized by an intraperitoneal injection of ketamine (50 mg/kg), xylazine (5 mg/kg) and buprenorphine (0.05 mg/kg), placed in a stereotactic apparatus and an incision was made with a scalpel over the cranial midline. A burrhole was made 0.1mm posterior to the bregma and 2.3mm to the right of the midline. A needle was inserted to a depth of 3mm and withdrawn 0.4mm to a depth of 2.6mm. Two &mu;l of GL261-luc or GL261-luc2 cells (107 cells/ml) were infused over the course of 3 minutes. The burrhole was closed with bonewax and the incision was sutured.
Following stereotactic implantation the bioluminescent cells are detectable from the day of implantation and the tumor can be analyzed using the 3D image reconstruction feature of the IVIS Spectrum instrument. Animals receive a subcutaneous injection of 150&mu;g luciferin /kg body weight 20 min prior to imaging. Tumor burden is quantified using mean tumor bioluminescence over time. Tumor-bearing mice were observed daily to assess morbidity and were euthanized when one or more of the following symptoms are present: lethargy, failure to ambulate, hunched posture, failure to groom, anorexia resulting in &gt;10% loss of weight. Tumors were evident in all of the animals on necropsy.

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Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

C57BL में GL261 कोशिकाओं / 6 चूहों intracranial आरोपण घातक gliomas है कि मानव glioblastoma मल्टीफार्मी की पहचान के कई पुनरावृत्ति करना पैदा करता है. हम GL261 stably luciferase व्यक्त कोशिकाओं का इस्तेमाल करने के लिए हमें का उपयोग करने के लिए की अनुमति<em&gt; Vivo में</em&gt; इमेजिंग ट्यूमर प्रगति का पालन करें. सर्जरी और 3 डी<em&gt; Vivo में</em&gt; इमेजिंग प्रदर्शन कर रहे हैं.

बाद 3 डी के साथ intracranial आरोपण Vivo में</emMurine Gliomas> bioluminescent इमेजिंग

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

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JoVE Journal

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Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

स्टीरियोटैक्टिक intracranial आरोपण और<em&gt; Vivo में</em&gt; Glioblastoma मल्टीफार्मी के एक माउस मॉडल प्रणाली में ट्यूमर xenografts के bioluminescent इमेजिंग

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Restenosis के अध्ययन के लिए कैरोटिड धमनी में स्टेंट आरोपण के एक murine मॉडल

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A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

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एक उपन्यास उच्च संकल्प<em&gt; विवो में</emट्यूमर के विकास और चिकित्सा विज्ञान के लिए Intracranial संरचनाएं के गतिशील प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए&gt; इमेजिंग तकनीक

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

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के लिए murine एंडोस्कोपी<em&gt; इन विवो</em&gt; Carcinogenesis और आंतों के आकलन के मल्टीमॉडल इमेजिंग घाव भरने और सूजन

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एक perivascular दवा वितरण पैच का आरोपण के साथ और्विक धमनी वायर चोट की murine मॉडल

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मानव ट्यूमर Xenografts से माउस कोशिकाओं की कमी गौरतलब है कि लक्ष्य प्रकोष्ठों के डाउनस्ट्रीम विश्लेषण बढ़ाता

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बाद 3 डी के साथ intracranial आरोपण Vivo में bioluminescent इमेजिंग