Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
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我々は、GL261 - lucの細胞の調製に関する有用な提案のためのレンチウイルスのシステムだけでなく、Mahilラオのためのプラスミドの寛大な贈り物のために博士ジョシュアB.ルービンに感謝します。 我々は、脳腫瘍研究（SSBTR）、バロー神経財団とその寛大な支援のためのウォレス財団を支援する学生に感謝する。 動物実験は、セントジョセフ病院と医療センターの動物実験使用の委員会が定めるガイドラインおよび規則に従って行った。

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	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

この記事へのフリーアクセスは、キャリパーライフサイエンスが主催している。

細胞の播種は、0.4mmのポケットを作成した後、脳の表面から2.6 mmの深さで注入される。針の適切な配置と深さを確保するためにX線は、C -アームまたは類似のX線画像の激化デバイスを使用して取得できますが、これはオプションです。動物が適切に鎮静されていない場合、手術の合併症は、動物の細胞の注入の間に移動できる点で、発生する場合があります。これは、針のトラックからの細胞の混合または出血の漏洩を引き起こす可能性があります。セルのリーク電流は、腫瘍細胞の異所性増殖を引き起こす。またburrholeはプロトコル4で説明されている2.3ミリメートルの内側行われた場合に行うことができます心室ではない穿刺することが重要です。針と細胞拡散の適切な配置は、2μlのメチレンブルー色素でマウスを注入し、注入された色素の場所を確認するために脳組織を解剖することによって試験した。 このプロトコルでは、in vivoイメージングシステムとt で IVISスペクトラムを使用している彼はこの楽器で使用するために設計されたイメージのソフトウェア（V 4.0）リビング。 （キャリパーライフサイエンス）。 in vivoイメージングシステムと画像解析ツールであらゆる匹敵するが、同様の結果を得るために使用することができます。これらのシステムは、実験的な頭蓋内腫瘍の成長をフォローするために従来の磁気共鳴画像（MRI）に比べていくつかの利点を提供します。最も明白な2楽器の相対的なコストである-動物MRI装置は、はるかに高価であり、一般的に熟練したMRI技術者のサービスを必要とする。ここに記載されたものとin vivoイメージングでは 、エンドユーザが行うことができます。 MRIデータの定量には時間がかかり、やや不正確である間の生物発光データは、定量的である。また、MRI画像は腫瘍細胞に加えて、浮腫や炎症を表示し、それが治療効果から腫瘍を分離することが困難な場合があります。これらの理由から成長する腫瘍の正確な体積測定値を得ることが困難な場合があります。生物発光は、ATPが必要ですしたがって、唯一の生きている腫瘍細胞は、腫瘍の大きさのデータに貢献する。マシンが使用可能であればそれにもかかわらず、MRIにはいくつかの利点があります。細胞は、MRIで可視化するために生物発光マーカーで標識する必要はありません。周囲の腫瘍浮腫を視覚化する能力は、いくつかの実験的なプロトコルのための利点があります。両方の技術の強さは、いずれかを使用すると、他の使用を排除しない、両方のテクノロジが利用可能になったとき、そのデータは腫瘍の成長だけでなく、同​​じ動物からペリ腫瘍浮腫や炎症の存在を得ることができることです。研究者に。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬や供給の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> GL261 - luc2バイオウェアウルトラ</td><td>キャリパーライフサイエンス</td><td> GL261 - luc2 </td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM） </td><td>インビトロジェン</td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td>ジェネティシン（G418） </td><td> GIBCO（インビトロジェン） </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清（FCS） </td><td>インビトロジェン</td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospateは緩衝生理食塩水（PBS） </td><td>インビトロジェン</td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Crマウス</td><td> NCI -フレデリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アクワの涙の潤滑眼軟膏</td><td> Akorn株式会社</td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset（塩酸ケタミン） </td><td>ワイエス</td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine（キシラジン塩酸塩） </td><td>ワイエス</td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td>小動物の定位音源</td><td> Kopfは楽器</td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> SYS - Micro4コントローラとUltraMicroPump </td><td>世界の精密機器</td><td> UMP3 - 1 </td><td>利用できない場合は、手動で注入することが可能です</td></tr><tr><td> 26ゲージと10μlのシリンジは、針の面取り</td><td>世界の精密機器</td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison鉗子</td><td>世界の精密機器</td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td>ペンフィールド解剖</td><td>タラ漁船</td><td> 65から1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16グラム1 ½精密グライドニードル</td><td> Beckton、ディッキンソン社（BD） </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td>外科ブレードハンドル</td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td>サイズ15ブレード</td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4から0 Vicryl縫合糸</td><td>エチコン</td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td>骨ろう</td><td> MEDLINE </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine -ヨウ素綿棒スティック</td><td> MEDLINE </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D -ルシフェリンカリウム塩</td><td>キャリパーライフサイエンス</td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane（イソフルラン） </td><td>バクスター</td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero顕微鏡</td><td>カールツァイス株式会社</td><td></td><td>どんな手術用顕微鏡で十分です</td></tr><tr><td>オプションの麻酔システムとXenogen IVISスペクトラム</td><td>キャリパーライフサイエンス</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

マウス神経膠腫261（GL261）はin vivoでのモデル系として認識されているヒトの多形性膠芽腫（GBM）の機能の多くは反復する。細胞株は、もともとC57BL / 6同系マウスの系統1に3 -メチル- cholantreneの頭蓋内注射によって誘発されたので、免疫学的に有能なC57BL / 6マウスを使用することができます。我々はGL261を使用していますが、次のプロトコルは、任意の頭蓋内のマウス腫瘍モデルの移植とモニタリングに使用することができます。 GL261細胞を安定的に発現するホタルルシフェラーゼ（GL261 - LUC）に設計された。我々はまた、CMVプロモーターから発現luc2遺伝子の安定なトランスフェクションにより、明るくGL261 - luc2細胞株を作成した。国立癌研究所、フレデリック、MDからC57BL/6-cBrd/cBrd/Crマウス（C57BL / 6のアルビノ変異体）は黒の皮と毛皮による光の減衰を除去するために使用されていました。 in vivoイメージング生体 IM で IVISのスペクトラムを使用して、アルビノC57BL / 6マウスを使用するとシステムの老朽化と、移植の日（キャリパーライフサイエンス、ホプキントン、MA）から可能です。 GL261 - lucおよびGL261 - luc2細胞株は、親のGL261細胞として生体内挙動に同じことを示した。人間性GBMに存在する共有組織学的特徴とこのマウスモデルのようなものがあります：腫瘍壊死、pseudopalisades、血管新生、浸潤、細胞過多、および炎症1。 移植前の動物には、以上のメスで作成された定位装置や切開に入れ、ケタミン（50 mg / kgの）、キシラジン（5 mg / kg）をし、ブプレノルフィン（0.05 mg / kg体重）の腹腔内注射により麻酔し、頭蓋正中線。 burrholeはブレグマ後方0.1ミリメートルと正中線の右側に2.3ミリメートルとした。針は2.6mmの深さに3mmから撤退0.4mmの深さに挿入した。 GL261リュックまたはGL261 - luc2細胞（10 7細胞/ ml）の二つの液を3分間かけて注入した。 burrholeが閉じられましたbonewaxと切開を縫合したと。 定位の移植後の生物の細胞は、移植の日から検出され、腫瘍は、IVISのスペクトラム測定器の3次元画像再構成機能を使用して分析することができます。動物は、150μgルシフェリン/イメージングの前に体重20分の皮下注射を受ける。全身腫瘍組織量が時間の経過とともに平均腫瘍の生物発光を用いて定量される。担癌マウスは、罹患率を評価するために、毎日観察し、以下のいずれかまたは複数の現象が存在するときに安楽死さ：無気力、歩き回るに失敗、猫背の姿勢、新郎への障害、食欲不振、体重の&gt; 10％が失われる。腫瘍は剖検上の動物のすべてに明白であった。

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Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

C57BL / 6マウスにGL261細胞の頭蓋内注入は、人間の多形性膠芽腫の特徴の多くを再現悪性神経膠腫を生成します。私達は私達が使用できるようにするために安定的にルシフェラーゼを発現するGL261細胞を用い<em&gt; in vivoで</em&gt;イメージングは​​腫瘍の進行に従うこと。手術と3D<em&gt; in vivoで</em&gt;画像が実証されています。

その後の3Dと頭蓋内注入インビボでの</emマウス神経膠腫の>生物発光イメージング

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

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マウス生物発光肝腫瘤モデル

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Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

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定位頭蓋内注入と<emインビボ&gt;</em多形性膠芽腫のマウスモデル系における腫瘍異種移植片の&gt;生物発光イメージング

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

再狭窄の研究のための頸動脈内ステント留置のマウスモデル

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

新規高分解能<em生体内で&gt;</em腫瘍増殖と治療に頭蓋内構造物の動的応答を研究する&gt;イメージング技術

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

マウス内視鏡検査のため<em&gt;インビボ</em&gt;発がんと腸の評価のマルチモーダルイメージング創傷治癒および炎症

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

血管周囲ドラッグデリバリーパッチの移植に大腿動脈ワイヤ傷害のマウスモデル

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

ヒト腫瘍異種移植片からマウス細胞の枯渇は大幅に標的細胞の下流分析を向上させます

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

光シート顕微鏡による劇症心筋炎のマウスモデルにおける白血球浸潤の定量的可視化

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

その後の3Dと頭蓋内注入インビボでの生物発光イメージング