Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

우리는 GL261 룩 세포의 준비에 도움이 제안에 대한 lentivirus 시스템뿐만 아니라 Mahil 라오에 대한 plasmids의 관대한 선물에 대한 박사 조슈아 B. 루빈을 인정하고 싶습니다. 우리는 뇌 종양 연구 (SSBTR), 배로우 신경 재단과 관대한 지원 월러스 재단을 지원하는 학생 주셔서 감사합니다. 동물 실험은 세인트 조셉 병원과 의료 센터의 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

이 기사에 무료로 액세스 캘리퍼스 생명 과학 후원됩니다.

셀 inoculum은 0.4 mm의 포켓을 만든 후 두뇌의 표면에서 2.6 mm의 깊이에 들어갈 수 있습니다. 바늘의 적절한 배치와 심도를 보장하기 위해 X - 레이는 C - 암 또는 이와 유사한 X - 선 이미지 가속화 장치를 사용 취할 수 있지만, 이것은 선택 사항입니다. 동물이 제대로 진정되지 않으면 수술의 합병증은 동물 세포 주입하는 동안 이동할 수있는 시점에서 발생할 수 있습니다. 이것은 바늘 트랙에서 셀 믹스 또는 출혈의 누출을 일으킬 수 있습니다. 세포의 누수는 종양 세포의 성장을 이소성됩니다. burrhole이 프로토콜 4 설명한 2.3 mm까지 중간 만든 경우에도 소중히 할 수있는 뇌실를 중요하지 않습니다. 바늘과 세포 확산의 적절한 배치는 2 μl 메틸렌 블루 염색와 마우스를 일으키는 및 주입 염료의 위치를​​ 확인하기 위해 뇌 조직을 해부하여 테스트되었습니다. 이 프로토콜에서 우리는 생체내 이미징 시스템 및 t의 IVIS 스펙트럼을 사용한그는이 악기와 함께 사용하도록 설계 이미지 소프트웨어 (V 4.0) 생활. (캘리퍼스 생명 과학). 생체내 이미징 시스템과 이미지 분석 도구의 모든 비교는 유사한 결과를 얻을하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 시스템은 실험 intracranial 종양의 성장에 따라 기존의 자기 공명 이미징 (MRI)을 통해 몇 가지 이점을 제공합니다. 가장 확실한는 2 악기의 상대적인 비용이다 - 동물 MRI 기계는 훨씬 더 비싼 있으며, 일반적으로 숙련된 기술자 MRI의 서비스를 필요로합니다. 이러한 여기에서 설명한 있었는지와 같은 생체내 이미징의 최종 사용자에 의해 할 수 있습니다. MRI의 데이터 quantitation는 많은 시간과 다소 엄밀하지 않은 상태에서 bioluminescence 데이터는 양적 있습니다. 또한, MRI 이미지는 부종과 종양 세포 이외에 염증을 표시하고 치료 효과에서 종양을 구분하기 어려울 수 있습니다. 이러한 이유로 성장하는 종양의 정확한 용적 측정을 획득하는 것은 도전이 될 수 있습니다. Bioluminescence는 ATP가 필요합니다그러므로 오직 살아있는 종양 세포는 종양의 크기 데이터에 기여하고 있습니다. 기계가 사용할 수있는 경우에도 불구하고, MRI를 몇 가지 이점이 있습니다. 세포는 MRI에 의해 시각이 될 수있는 발광 생물 마커로 표시 될 필요가 없습니다. 사망 시에 tumoral 부종을 시각화하는 능력은 몇 가지 실험 프로토콜에 대한 이점 수 있습니다. 두 기술을 사용할 때 두 기술의 강도가 하나를 사용하면 다른의 사용을 배제하지 않으므로 데이터는 종양의 성장뿐만 아니라 같은 동물의 사망 시에 tumoral 부종과 염증의 존재를 얻을 수 있습니다 연구원 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약이나 공급의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> GL261 - luc2 Bioware 울트라 </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td> GL261 - luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco의 수정 독수리 중간 (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> 소태아 세럼 (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospate는 버​​퍼 식염수 (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr 마우스 </td><td> NCI - 프레드릭 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA의 눈물 윤활유 안과 연고 </td><td> Akorn Inc의 </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (케타민을 하이드로 클로라이드) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (xylazine 염산염) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 동물 Stereotaxic 악기 </td><td> Kopf 인 스트 루먼트 </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> SYS - Micro4 컨트롤러 UltraMicroPump </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> UMP3 - 1 </td><td> 사용할 수없는 경우 수동으로 달이다 수 있습니다 </td></tr><tr><td> 26 게이지와 10μl 주사기는 바늘 beveled </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison 집게 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 500,092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield 해부학자 </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ 정밀 글라이드 니들 </td><td> Beckton, 디킨슨과 회사 (BD) </td><td> 305,198 </td><td></td></tr><tr><td> 외과 블레이드 핸들 </td><td> BD </td><td> 371,030 </td><td></td></tr><tr><td> 15 사이즈 블레이드 </td><td> BD </td><td> 371,315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl 봉합사 </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> 뼈 왁스 </td><td> MEDLINE </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine - 요오드 면봉 스틱 </td><td> MEDLINE </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D - Luciferin의 칼륨 소금 </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td> 122,796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isoflurane) </td><td> 벡스터 </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero 현미경 </td><td> 칼 자이스 혈구, 주식 회사 </td><td></td><td> 모든 수술 현미경은 충분 </td></tr><tr><td> 선택 마취 시스템과 Xenogen IVIS 스펙트럼 </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

마우스 glioma 261 (GL261)은 생체내 모델 시스템에으로 인식되고 인간 glioblastoma multiforme의 (GBM)의 기능 중 많은 recapitulates. 셀 라인은 원래 C57BL / 6 마우스 syngeneic 스트레인 하나에 3 - 메틸 - cholantrene의 intracranial 주입에 의해 유도되었다, 따라서 immunologically 유능한 C57BL / 6 생쥐를 사용할 수 있습니다. 우리가 GL261을 사용하는 동안 다음과 같은 프로토콜은 어떤 intracranial 마우스 종양 모델의 주입 모니터링에 사용할 수 있습니다. GL261 세포는 안정적으로 표현 반딧불 루시페라제 (GL261 룩)으로 설계되었습니다. 우리는 또한 CMV 프로 모터에서 표현 luc2 유전자의 안정적인 transfection하여 밝은 GL261 - luc2 세포주를 만들었습니다. 국립 암 연구소, 프레데릭, MD에서 C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr 마우스 (C57BL / 6의 흰둥이 변종)는 검은 피부와 모피로 인해 빛을 감쇠를 제거하는 데 사용되었습니다. 흰둥이 C57BL / 6 마우스의 사용을 통해, 생체내 이미징의 생체내 메신저에서 IVIS 스펙트럼을 사용하여시스템을 노화 것은 주입의 날 (캘리퍼스 생명 과학, Hopkinton, MA)에서 가능합니다. GL261 룩과 GL261 - luc2 셀 라인은 부모 GL261 세포로 생체내 행동 동일하게 나타났다. 인간 GBMs에있는 공유 histological 기능이 마우스 모델 중 일부는 다음과 같습니다 : 종양 괴사, pseudopalisades, neovascularization, 침공, hypercellularity과 염증 1. 이전 주입 동물 stereotactic기구와 절개에 배치 300ml의 intraperitoneal 주사 (50 MG / kg), xylazine (5 밀리그램 / kg)과 buprenorphine (0.05 밀리그램 / kg)에 의해 anesthetized되었다이 이상 메스로 만들어진 두개골 중간선. burrhole는 bregma과 중간선의 오른쪽에있는 2.3mm로 0.1mm 사후되었다. 바늘은 2.6mm의 깊이 3mm와 0.4mm 철회의 깊이로 삽입되었다. GL261 룩이나 GL261 - luc2 전지 (10 7 셀 / ML)의 두 μl는 삼분의 과정을 통해 주입했다. burrhole는 폐쇄되었습니다bonewax과 절개는 봉합했습니다와 함께. stereotactic 주입 따라 발광 생물 세포가 이식 당일부터 감지하고 종양이 IVIS 스펙트럼 악기의 3D 이미지 재구성 기능을 사용하여 분석하실 수 있습니다. 동물 150μg luciferin / 이전 이미지로 kg의 체중 20 분의 피하 주사를 받게됩니다. 종양 부담 시간이 지남에 따라 의미 종양의 bioluminescence를 사용하여 계량입니다. 종양 베어링 생쥐는 병적 상태를 평가하기 위해 매일 관찰되었으며 다음과 같은 현상이 하나 이상 존재하는 경우 euthanized되었습니다 혼수, ambulate에 실패, hunched 자세, 신랑에 실패, 거식증은 체중의&gt; 10 %의 손실 발생. 종양 검시에있는 동물의 모든 분명했다.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

C57BL에 GL261 셀 / 6 마​​우스의 Intracranial 이식은 인간 glioblastoma multiforme의의 특징 중 많은 것들을 요점을 되풀이하다 악성 gliomas을 생산하고 있습니다. 우리는 우리가 사용할 수 있도록 안정 루시페라제 표현 GL261 세포를 사용<em&gt; 생체내에</em&gt; 영상은 종양 진행을 따르십시오. 수술 및 3D<em&gt; 생체내에</em&gt; 영상을 보여주 있습니다.

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서</emMurine Gliomas의> 발광 생물 이미징

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Murine 발광 생물 간장 Tumour 모델

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

연구

의학

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

생체 듀얼 기판 발광 생물 이미징에

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

마우스의 전단 응력 유발 죽상 경화증을 실행을위한 경동맥 혈압계의 주입

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

재 협착의 연구에 대한 경동맥 스텐트 시술의 쥐과 모형

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

소설 고해상도<em&gt; 생체 내</em종양의 성장과 치료학에 두개 내 구조물의 동적 응답을 공부하기&gt; 이미징 기술

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

에 대한 쥐의 내시경<em&gt; 생체</em&gt; 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light Sheet Microscopy에 의한 심근 성 심근염의 Murine 모델에서의 백혈구 침윤의 정량적 시각화

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서 발광 생물 이미징