Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить доктора Джошуа Б. Рубин за щедрый дар плазмид для лентивирус системы, а также Mahil Рао за полезные предложения по подготовке GL261-Люк клеток. Мы благодарим студентов Поддержка опухоли головного мозга исследований (SSBTR), Курган Неврологический Фонд и Фонд Уоллеса за их щедрую поддержку. Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными по Уходу за животными и использованию комитета больнице Св. Иосифа и медицинский центр.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

Свободный доступ к этой статье проводится при финансовой поддержке суппорт наук о жизни.

Клетка посевной проникнуты на глубине 2,6 мм от поверхности мозга после создания 0,4 мм кармане. Для обеспечения надлежащего размещения и глубины иглы рентгеновского может быть сделан с использованием C-Arm или аналогичных рентгеновского изображения активизации устройства, однако это не является обязательным. Осложнения после операции могут возникнуть, если животное не правильно отключке, после чего животное может двигаться во время клеточного инфузии. Это может привести к утечке смеси клеток или кровотечение из иглы трек. Утечка клеток вызывает внематочную рост опухолевых клеток. Важно также, чтобы не проколоть желудочка, которая может быть сделано, если burrhole производится медиальнее 2,3 мм описано в протоколе 4. Правильное размещение распространения игл и клеточной была проверена путем инфузии мышь с 2 мкл метиленового синего красителя и рассечение тканей головного мозга и проверить расположение придают краски. В этом протоколе мы использовали Спектр ИВИС в естественных изображений системы и тон живой образ программного обеспечения (V 4.0) предназначен для работы с этим инструментом. (Суппорт Life Sciences). Любой сопоставимы в естественных условиях система формирования изображений и инструменты анализа изображения может быть использован для получения аналогичных результатов. Эти системы обеспечивают некоторые преимущества по сравнению с традиционными магнитно-резонансной томографии (МРТ) следовать рост экспериментальных внутричерепных опухолей. Наиболее очевидным является относительной стоимости 2 инструментов - животное МРТ машины гораздо дороже, и, как правило нуждаются в услугах квалифицированных МРТ техник. В естественных условиях визуализации, такие как то, что было описано здесь может быть сделано путем конечного пользователя. Биолюминесценции данные количественной, в то время как количественное МРТ данных занимает много времени и немного неточно. Кроме того, МРТ снимки показывают отек и воспаление в дополнение к опухолевым клеткам, и это может быть трудно отличить опухоль от эффекта лечения. По этим причинам получения точных количественных показателей растущая опухоль может быть проблемой. Биолюминесценция требует ATPПоэтому только живые клетки опухоли способствуют опухоли размер данных. Несмотря на это, Есть некоторые преимущества МРТ, если машина доступна. Клетки не должны быть помечены маркером биолюминесцентного быть визуализированы с помощью МРТ. Способность визуализировать пригородных опухолевых отек может быть преимуществом для некоторых экспериментальных протоколов. Сила обеих технологий является то, что с помощью одного не исключает использования других, так что данные могут быть получены на рост опухоли, а также наличие пери-опухолевых отек и воспаление от того же животного, когда обе технологии доступны для исследователя.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента или поставки </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ультра </td><td> Суппорт наук о жизни </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Дульбеко изменения Eagle Средняя (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Генетицин (G418) </td><td> Гибко (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Фетальной телячьей сыворотки (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Фосфат солевым буфером (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Мыши </td><td> NCI-Фредерик </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Аква Слезы смазки Офтальмология Мазь </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (кетамина гидрохлорид) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (ксилазина гидрохлорид) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Малый Инструмент стереотаксической животных </td><td> Kopf инструменты </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump с SYS-Micro4 контроллер </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> UMP3-1 </td><td> Если не доступен, то можно влить вручную </td></tr><tr><td> 10 мкл шприц с 26 калибр скошенной иглой </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Пинцет </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Пенфилд прозектором </td><td> Кодман </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Precision Glide иглы </td><td> Бектон, Дикинсон и компания (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Хирургическое Ручка Клинка </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Размер 15 Клинок </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Викрил Шовный </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Кость Воск </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine-Йод палочки Swab </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-люциферин калийной соли </td><td> Суппорт наук о жизни </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Форан (изофлюрана) </td><td> Бакстер </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero микроскоп </td><td> Carl Zeiss, Inc </td><td></td><td> Любой хирургический микроскоп хватит </td></tr><tr><td> Xenogen ИВИС спектра с опциональной системой анестезии </td><td> Суппорт наук о жизни </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

Мышь глиомы 261 (GL261) признан в модели системы естественных условиях, что повторяет многие особенности человеческого мультиформной глиобластомы (GBM). Клеточная линия была первоначально индуцированной внутричерепное введение 3-метил-cholantrene в C57BL / 6 сингенных штаммом мыши 1, поэтому иммунологически компетентных C57BL / 6 мышей могут быть использованы. Хотя мы используем GL261, следующий протокол может быть использован для внедрения и мониторинга внутричерепного любой модели опухоли мыши. GL261 клетки спроектирован, чтобы стабильно выразить люциферазы светляков (GL261-Люк). Мы также создали яркие GL261-luc2 клеточной линии стабильной трансфекции гена luc2 выразил от промоутера ЦМВ. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr мышей (альбинос вариант C57BL / 6) из Национального института рака, Фредерик, Мэриленд, были использованы для устранения ослабления света вызванные черной кожи и меха. При использовании альбиноса C57BL / 6 мышей, а в естественных условиях использования изображений ИВИС спектра в естественных условиях имстарения системы возможно с момента имплантации (суппорт Life Sciences, Хопкинтон, Массачусетс). GL261-Люк и GL261-luc2 клеточных линий показал то же самое в естественных условиях поведение родительского GL261 клеток. Некоторые общие гистологические особенности присутствуют в человеческой GBMs и это мышиной модели включают в себя: некроза опухолей, pseudopalisades, неоваскуляризации, вторжение, повышенное содержание паренхиматозных клеток, и воспалением 1. До имплантации животных под наркозом путем внутрибрюшинного введения кетамина (50 мг / кг), ксилазина (5 мг / кг) и бупренорфин (0,05 мг / кг), помещенный в стереотаксической аппарата и разрез был сделан со скальпелем над черепной средней линии. Burrhole было сделано 0,1 мм кзади от брегмы и 2,3 мм справа от средней линии. Вводилась игла на глубину 3 мм и изъяты 0,4 мм на глубину до 2,6 мм. Два мкл GL261-Люк или GL261-luc2 клетки (10 7 клеток / мл) были проникнуты в течение 3 минут. Burrhole был закрытс bonewax и разрез зашивается. После имплантации стереотаксической биолюминесцентного клетки обнаруживаются со дня имплантации и опухоли могут быть проанализированы с помощью функции 3D реконструкция образа инструмент Спектр ИВИС. Животные получают подкожного введения 150μg люциферин / кг массы тела 20 мин до начала съемки. Опухоль бремя количественно, используя средний биолюминесценции опухоли с течением времени. Опухоли мышей наблюдались ежедневно для оценки заболеваемости и были подвергнуты эвтаназии, когда один или несколько из следующих симптомов присутствуют: вялость, неспособность передвигаться, выгибание спины, отсутствие жениха, анорексия приводит к&gt; 10% потери веса. Опухоли были очевидны во всех животных на вскрытии.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Внутричерепное имплантации GL261 клеток в C57BL / 6 мышей производит злокачественных глиом, что повторять многие признаки человеческой глиобластомы мозга. Мы использовали GL261 клетки стабильно выражения люциферазы, чтобы позволить нам использовать<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Визуализации следовать прогрессии опухоли. Хирургии и 3D<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Изображения демонстрируются.

Внутричерепное имплантация с последующим 3D В Vivo Биолюминесцентный изображений из мышиной глиомы

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Мышиной модели Биолюминесцентный опухоли Печеночная

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

В естественных условиях двойного основания Bioluminescent изображений

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

Имплантация сонной манжеты для запуска Shear-стресс, вызванный атеросклероза у мышей

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Стереотаксическая имплантация и внутричерепных<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Bioluminescent Визуализация опухолевых ксенотрансплантатов в системе мышиной модели глиобластомы

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Мышиной модели имплантации стента в сонной артерии по изучению рестеноза

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

Роман с высоким разрешением<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Изображений методика исследования динамических характеристик внутричерепных структур к росту опухоли и терапии

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Мышиный Эндоскопия для<em&gt; В Vivo</em&gt; Мультимодальные изображений канцерогенеза и оценки кишечной заживления ран и воспаления

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Мышиной модели бедренной артерии Wire травмы с имплантацией Периваскулярный Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Истощение мышиных клеток из ксенотрансплантатов опухолей человека значительно улучшает Downstream Анализ клеток-мишеней

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Количественная визуализация инфильтрата лейкоцитов в мышиной модели фульминантного миокардита методом микроскопии легких листов

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...