Name: scale-up of mammalian cell culture using a new multilayered flask
Uploaded: 2011-12-05T13:00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask at JoVE.com

<ol>
	<li>Szabo, S. E., Monroe, S. L., Fiorino, S., Bitzan, J., Loper, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+an+automated+instrument+for+viability+and+concentration+mesurements+of+cryopreserved+hematopoietic+cells.">Evaluation of an automated instrument for viability and concentration mesurements of cryopreserved hematopoietic cells.</a> Lab. Hematol. 10, 109-109 (2004).</li><li>Bonnekoh, B., Wevers, A., Jugert, F., Merk, H., Mahrle, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+growth+assay+for+epidermal+cell+cultures+by+their+crystal+violet+binding+capacity.">Colorimetric growth assay for epidermal cell cultures by their crystal violet binding capacity.</a> Arch. Dermatol. Res. 281, 487-487 (1989).</li><li>Sengupta, N., Rose, S. T., Morgan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+Flux+analysis+of+CHO+cell+metabolism+in+the+late+non-growth+phase.">Metabolic Flux analysis of CHO cell metabolism in the late non-growth phase.</a> Biotechnol. Bioeng. 108, 83-83 (2010).</li><li>Zhu, M. M., Goyal, A., Rank, D. L., Gupta, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+elevated+pCO2+and+osmolality+on+growth+of+cells+and+production+of+antibody&#x2013;fusion+protein+B1:+a+case+study.">Effects of elevated pCO2 and osmolality on growth of cells and production of antibody&#x2013;fusion protein B1: a case study.</a> Biotechnol. Prog. 21, (2005).</li><li>Ryan, J. M., Sharf, B. B., Cristofalo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+culture+medium+volume+on+cell+density+and+life-span+of+human+diploid+fibroblasts.">The influence of culture medium volume on cell density and life-span of human diploid fibroblasts.</a> Exp Cell Res. 91, 389-389 (2004).</li><li>Flaherty, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tips and Techniques for enhancing your cell culture. , (2009).</li><li>Sanyal, S., Abraham, E. J., Slater, K., Cai, A., Lacey, B., Hartshorn, C., Flaherty, P., McHugh, B., Qian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Scaling up cells in BD Falcon Cell Culture Multi-Flasks. , (2011).</li><li>DiPersio, C. M., Jackson, D. A., Zaret, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix+coordinately+modulates+liver+transcription+factors+and+hepatocyte+morphology.">The extracellular matrix coordinately modulates liver transcription factors and hepatocyte morphology.</a> Mol. Cell. Biol. 11, 4405-4405 (1991).</li><li>Grose, R., Hutter, C., Bloch, W., Thorey, I., Watt, F. M., Fassler, R., Brakebusch, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+crucial+role+of+&#x03B2;1+integrins+for+keratinocyte+migration+in+vitro+and+during+cutaneous+wound+repair.">A crucial role of &#x03B2;1 integrins for keratinocyte migration in vitro and during cutaneous wound repair.</a> Dev. 129, 2303-2303 (2002).</li></ol>

جميع المؤلفين والعاملين في ديكنسون بيكتون ، الجزء العلوم البيولوجية ، وحدة المختبرات الطبية ديسكفري.

الدراسة الحالية يدل على زيادة في الإنتاجية التي القارورة موضوع تصميم عروض الباحثين. في حين أنه من المهم أن تتبع الخطوات المذكورة أعلاه للحصول على الأداء الأمثل عند استخدام قوارير متعددة ، وهناك بضع خطوات حاسمة في هذا البروتوكول التي تعتبر الأكثر أهمية. وتشمل هذه (ط) من الخلايا وخلط الكواشف باستخدام مزيج داخل الميناء الباخرة (ب) نقل متعدد قارورة بزاوية 45 درجة في اتجاه عقارب الساعة بعد تقسيم السوائل في كل من طبقات (ج) وضع موضوع متعدد قارورة آخر شقة في التقسيم الحاضنة. الاستخدام السليم للموضوع متعدد قارورة يؤدي إلى إنتاج مجموعة من السكان داخل كل خلية متجانسة السفينة التي تربيتها في بيئة غير متطابقة إلى T - 175 قوارير (5). هذه السفن توفير خلايا 3 و 5 مرات اكثر في بصمة مشابهة لالقارورة T - 175. السفينة 3 و 5 طبقة يوفر 525 و 875cm 2 من مجالات النمو ، على التوالي ، وتقدم كل من الفضاء وق العملavings للمستخدمين. علاج الأنسجة السطحية الثقافة هي مماثلة لقوارير القياسية مما الحجم من دون الحاجة إلى إعادة تحسين ظروف الثقافة القائمة أو المساومة على جودة ، والتجانس أو أداء الخلايا (6 ، 7). وهذا يوفر أيضا المقارنة مع البيانات التي تم جمعها سابقا. يمكن أن تكون هذه السفن المطلية أيضا مع الكواشف مثل الكولاجين ، فبرونيكتين ، وبولي - D - يسين لتوفير التحتية المتخصصة لتحقيق النمو ، والتمايز مرفق من أنواع الخلايا مثل خلايا الكبد بعض 8 ، 9 kertainocytes ، والخلايا الجذعية التي تزرع في المصل خالية من وسائل الإعلام المستحضرات. ويمكن إزالة الطلاء حلول مع الحد الأدنى من الاحتفاظ السائل المتبقية ، وذلك لتقليل الفاقد من قيمة الكواشف وكذلك إزالة الحل الفعال للطلاء قبل استنبات الخلايا. الموصى بها وسائل الإعلام الأمثل لحجم الخلايا الثقافة في قوارير متعددة تتراوح 0،142-0،287 مل / سم 2 والتي تترجم إلى 25-50 مل لكل طبقة. خلافا آخر قارورة متعدد الطبقات ، رمنتج له مزيجا الميناء في السفينة التي يسمح السريع في وعاء الخلط ، وكذلك توزيع موحد للخلايا والكواشف داخل وبين طبقات من كل سفينة. تم تحجيم خطوط الخلايا المتنوعة والثقافات والخلايا الجذعية الأولية تصل بكفاءة استخدام قوارير متعددة. هذه السفن هي مفيدة بشكل خاص في التطبيقات التي تتطلب عددا كبيرا من الخلايا مثل ارتفاع في الإنتاجية والفرز ، وإنتاج لقاح ، transfections النواقل الفيروسية والعلاج بالخلايا. وفورات في ، وقت العمل ، والفضاء وخفض توليد النفايات هي المكاسب الرئيسية للقارورة متعدد الثقافات التقليدية في مقابل واحد الطبقات السفن. يمكننا الثقافة حوالي ثلاثة أضعاف عدد الخلايا التي تحصد من 5 ، T - 175 القوارير في نفس المساحة باستخدام 3 و 5 طبقات متعددة قوارير. ولا تقتصر هذه الميزة في توفير مساحة فقط إلى T - 175 ولكن يمكن أيضا أن تمتد إلى سفن أخرى : زجاجة الأسطوانة القياسية التي تناسبها في الأجهزة المشتركة مختبر الحاضنات المنازل ~ 4 رولزجاجات لير (2200 مل) كل منها يوفر مساحة 850cm 2. في نفس المنطقة ، يمكن أن يضم ~ 20 ، 5 طبقات متعددة قوارير وبالتالي توفير خمس مرات على سطح الخلايا لنمو الثقافة. علاوة على ذلك ، مع زيادة في الوعي &quot;الذهاب الخضراء&quot; ، وخيارات لخفض توليد النفايات غير مرغوب فيه للغاية. في هذا الصدد ، هناك 38 ٪ (5 ، T - 175 ~ 640g تزن القوارير في حين واحد ، 5 طبقات متعددة قارورة يزن 400g ~) النقص في توليد النفايات باستخدام قوارير متعددة مقارنة قوارير T - 175 وهذه المزايا تؤدي إلى انخفاض في تخزين النفايات وتكاليف التخلص منها وتحقيق وفورات اقتصادية للمستخدم.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف / معدات </td><td> شركة </td><td> كتالوج # </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> 3 طبقة الأنسجة الثقافة المعاملة 525cm 2 </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 353143 </td><td rowspan="21"> <a href="http://www.bdbiosciences.com/cellculture/multiflasks/index.jsp">BD الثقافة العلوم البيولوجية الخليوي -- فالكون دينار بحريني متعدد قوارير</a> </td></tr><tr><td> 5 طبقة الأنسجة الثقافة المعاملة 875cm 2 </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 353144 </td></tr><tr><td> 100ML ماصة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 357600 </td></tr><tr><td> 10 مل ماصة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 357551 </td></tr><tr><td> 5 مل ماصة الشفط </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td&gt; 357501 </td></tr><tr><td> 50 مل أنبوب البولي بروبيلين المخروطية </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> T - 175 قارورة الثقافة الأنسجة المعالجة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 353028 </td></tr><tr><td> غرام كريستال فيوليت </td><td> دينار بحريني </td><td> 212525 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11885 </td></tr><tr><td> GMEM </td><td> سيغما </td><td> G5154 </td></tr><tr><td> RPMI - 1640 </td><td> ATCC </td><td> 30-2001 </td></tr><tr><td> MEM </td><td> ATCC </td><td> 30-2003 </td></tr><tr><td> التربسين - EDTA </td><td> Lonza </td><td> CC - 5012 </td></tr><tr><td> المصل البقري الجنين </td><td> Invitrogen </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> Tryptose الفوسفات مرق </td><td> سيغما </td><td> T8159 </td&gt; </tr><tr><td> BHK - 21 الخلايا </td><td> سيغما </td><td> 85011433 </td></tr><tr><td> التهاب الكبد - G2 ، LnCAP </td><td> ATCC </td><td></td></tr><tr><td> Ecopack 2-293 </td><td> Clontech </td><td></td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> الإلكترون المجهري العلوم </td><td> 15710 </td></tr><tr><td> البوليسترين الخرزة </td><td> شركة PolySciences </td><td> 24628-20 </td></tr><tr><td> الملف الحيوي فليكس محلل </td><td> نوفا الطبية الحيوية </td><td></td></tr></tbody></table>

scale-up of mammalian cell culture using a new multilayered flask

هناك عدد متزايد من التطبيقات المستندة إلى خلية تتطلب أعدادا كبيرة من الخلايا. استخدام طبقة واحدة T - القوارير ، والتي هي كافية خلال توسيع نطاق صغير ، قد تصبح مرهقة ، مجهدة ومضيعة للوقت عندما يطلب أعداد كبيرة من الخلايا. وستناقش لتلبية هذه الحاجة ، وأداء جديد متعدد الطبقات الخلية سفينة الثقافة لتسهيل مقياس سهل مكونة من خلايا من الطبقات واحد T - القوارير. في قوارير اختبار متوفرة في 3 -- 5 وشكل طبقة وتمكين الثقافة واستكمال الانتعاش من ثلاثة وخمسة أضعاف عدد الخلايا على التوالي ، مقارنة ب T - 175 القوارير. ومن السمات الرئيسية للقارورة متعدد دينار بحريني هو منفذ مزيج / موازنة تسمح السريع في وعاء الخلط ، وكذلك توزيع موحد للخلايا والكواشف داخل وبين طبقات من كل سفينة ، وتنتج باستمرار الخلايا التي يمكن تربيتها في بيئة غير متطابقة إلى T - 175 القوارير. تصميم هذه قوارير متعددة كما يسمح للجonvenient الوصول ماصة لإضافة الكواشف والخلايا مباشرة في قوارير ، وكذلك استرداد قيمة كفاءة الخلايا والكواشف ، ويقلل من خطر التلوث نتيجة لسكب. لتقديم الطلبات هو المفضل حيث تتدفق عبر pipetting ، وتصميم ليسمح الحد الأدنى من الاحتفاظ السائل المتبقية وذلك لتقليل الفاقد من الخلايا قيمة والكواشف.

Watch this Scientific Journal Video about Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask at JoVE.com

Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask

الخلايا تلعب دورا أساسيا ومتزايدا في البحث ، واكتشاف وتطوير علاجات جديدة. مع هذه الحاجة المتزايدة لعدد أكبر من الخلايا نحتاج طرقا أكثر كفاءة وفعالية لزراعة وحصاد الخلايا مرفق التابعة. ويمكن للقارورة متعددة المستويات مع ميزات حق خدمة هذا الغرض.

مقياس الهاتفي للثقافة خلايا الثدييات باستخدام قارورة جديد متعدد الطبقات

A growing number of cell-based applications require large numbers of cells. Usage of single layer T-flasks, that are adequate during small-scale ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

التصوير خلايا الثدييات على المدى الطويل باستخدام الميكروسكوب واسعة الميدانية

Ole Isacson: Development of New Therapies for Parkinson's Disease

Isacson أوله : تطوير علاجات جديدة لمرض باركنسون

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

الليزر Microdissection القبض على أنسجة الثدييات

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Development of New Therapeutic Applications Using Microfluidics

تطوير تطبيقات علاجية جديدة باستخدام على microfluidics

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

esiRNA بعثة لفحص رني في خلايا الثدييات

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

تحديد عدد الخلايا خلال زراعة الخلايا باستخدام خلية مكافحة الصولجان

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

تحليل المركز دورة الخلية في خلايا الثدييات

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

تحديد عدد خلايا الثدييات، وحجم الخلية والصحة الخلية باستخدام Z Moxi خلية الآلي البسيطة عداد

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

إعداد الجرذ مصل مناسب للالثدييات الجامع الثقافة الأجنة

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...