Name: scale-up of mammalian cell culture using a new multilayered flask
Uploaded: 2011-12-05T13:00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask at JoVE.com

<ol>
	<li>Szabo, S. E., Monroe, S. L., Fiorino, S., Bitzan, J., Loper, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+an+automated+instrument+for+viability+and+concentration+mesurements+of+cryopreserved+hematopoietic+cells.">Evaluation of an automated instrument for viability and concentration mesurements of cryopreserved hematopoietic cells.</a> Lab. Hematol. 10, 109-109 (2004).</li><li>Bonnekoh, B., Wevers, A., Jugert, F., Merk, H., Mahrle, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+growth+assay+for+epidermal+cell+cultures+by+their+crystal+violet+binding+capacity.">Colorimetric growth assay for epidermal cell cultures by their crystal violet binding capacity.</a> Arch. Dermatol. Res. 281, 487-487 (1989).</li><li>Sengupta, N., Rose, S. T., Morgan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+Flux+analysis+of+CHO+cell+metabolism+in+the+late+non-growth+phase.">Metabolic Flux analysis of CHO cell metabolism in the late non-growth phase.</a> Biotechnol. Bioeng. 108, 83-83 (2010).</li><li>Zhu, M. M., Goyal, A., Rank, D. L., Gupta, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+elevated+pCO2+and+osmolality+on+growth+of+cells+and+production+of+antibody&#x2013;fusion+protein+B1:+a+case+study.">Effects of elevated pCO2 and osmolality on growth of cells and production of antibody&#x2013;fusion protein B1: a case study.</a> Biotechnol. Prog. 21, (2005).</li><li>Ryan, J. M., Sharf, B. B., Cristofalo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+culture+medium+volume+on+cell+density+and+life-span+of+human+diploid+fibroblasts.">The influence of culture medium volume on cell density and life-span of human diploid fibroblasts.</a> Exp Cell Res. 91, 389-389 (2004).</li><li>Flaherty, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tips and Techniques for enhancing your cell culture. , (2009).</li><li>Sanyal, S., Abraham, E. J., Slater, K., Cai, A., Lacey, B., Hartshorn, C., Flaherty, P., McHugh, B., Qian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Scaling up cells in BD Falcon Cell Culture Multi-Flasks. , (2011).</li><li>DiPersio, C. M., Jackson, D. A., Zaret, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix+coordinately+modulates+liver+transcription+factors+and+hepatocyte+morphology.">The extracellular matrix coordinately modulates liver transcription factors and hepatocyte morphology.</a> Mol. Cell. Biol. 11, 4405-4405 (1991).</li><li>Grose, R., Hutter, C., Bloch, W., Thorey, I., Watt, F. M., Fassler, R., Brakebusch, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+crucial+role+of+&#x03B2;1+integrins+for+keratinocyte+migration+in+vitro+and+during+cutaneous+wound+repair.">A crucial role of &#x03B2;1 integrins for keratinocyte migration in vitro and during cutaneous wound repair.</a> Dev. 129, 2303-2303 (2002).</li></ol>

מחברים כל עובדי בקטון דיקינסון, Biosciences, מגזר יחידת דיסקברי labware.

המחקר הנוכחי מדגים את הגידול בפריון כי העיצוב Flask Multi-מציעה לחוקרים. בעוד חשוב לבצע את השלבים שתוארו לעיל, לקבלת ביצועים מיטביים כאשר באמצעות Multi-צלוחיות, ישנם כמה צעדים קריטיים בפרוטוקול זה נחשבים חיוניים ביותר. אלה כוללות: (i) ערבוב של תאים ריאגנטים באמצעות יציאת לערבב בתוך כלי (ii) העברת Multi-Flask בזווית של 45 מעלות עם כיוון השעון לאחר חלוקת נוזל לתוך כל השכבות (iii) הנחת Flask Multi-שלאחר שטוח לתוך מחיצות החממה. שימוש נכון Flask רב מוביל הייצור של אוכלוסייה הומוגנית תא בתוך כלי אחד כי הוא תרבותי בסביבה כי הוא חופף ל-T-175 צלוחיות (5). כלים אלה מספקים תאים 3 ו - 5 פעמים יותר טביעת דומה כמו בקבוק T-175. כלי 3 ו -5 שכבת מספק 525 ו 875cm 2 של אזור הגידול, בהתאמה ולהציע הן מרחב העבודה שלavings למשתמשים. בתרבית רקמה טיפול Surface ניתן להשוות צלוחיות סטנדרטי ומאפשר מדרוג כלפי מעלה ללא צורך מחדש אופטימיזציה התנאים תרבות קיימים או להתפשר על איכות, ההומוגניות או הביצועים של תאים (6, 7). זה גם מספק עבור השוואה עם נתונים שנאספו בעבר. כלים אלה יכולים להיות מצופים גם עם חומרים כימיים, כגון קולגן, פיברונקטין, poly-D-ליזין לספק תשתית לצמיחה המקצועית המצורף, והבחנה של סוגי תאים מסוימים, כגון 8 hepatocytes, kertainocytes 9, בתאי גזע בוגרים בסרום ללא מדיה ניסוחים. פתרונות ציפוי ניתן להסיר עם שמירה מינימלית נוזל שיורי כדי לצמצם בזבוז של חומרים כימיים בעלי ערך, כמו גם הסרה יעילה של פתרון הציפוי לפני תאים culturing. נפח התקשורת מומלץ אופטימלי לתאי תרבות במגוון רב צלוחיות של 0.142-0.287 מ&quot;ל / 2 ס&quot;מ אשר לתרגם 25-50 מ&quot;ל לכל שכבה. בניגוד בקבוק אחר multilayered, לאהמוצר שלו מציע שילוב יציאת בכלי המאפשר מהירה, כלי ערבוב וכן התפלגות אחידה של תאים ריאגנטים בתוך ובין שכבות של כל כלי. שורות תאים מגוונים, תרבויות יסודי בתאי גזע כבר scaled עד ביעילות באמצעות Multi-צלוחיות. כלים אלה הם יתרון במיוחד ביישומים הדורשים מספר רב של תאים כגון תפוקה גבוהה, סינון, ייצור החיסון, transfections וקטור ויראלי טיפול בתא. חסכון, עבודה הזמן, המרחב ואת ייצור הפסולת מופחתת הן זכיות המפתח של Flask רב לעומת תרבויות קונבנציונלי חד שכבתית כלי. אנחנו יכולים התרבות כ שלוש פעמים את מספר התאים שנקטפו מן 5, T-175 צלוחיות באותו מקום באמצעות 3, 5 רב שכבתיים צלוחיות. יתרון זה של שמירת מקום אינה מוגבלת רק ל-T-175, אך ניתן גם להרחיב את כלי אחר: הרים בקבוק סטנדרטי מנגנון שמתאים לבתים חממות משותף במעבדה 4 ~ רולהימלר בקבוקים (2200 מ&quot;ל) שכל אחד מהם מספק 850cm 2 שטח פנים. באותו אזור, ~ 20, 5 רב שכבתיים צלוחיות ניתן שוכנו ובכך לספק חמש פעמים את פני השטח של צמיחת תאים תרבות. יתר על כן, עם גידול המודעות &quot;לך ירוק&quot;, אפשרויות להפחתת ייצור הפסולת הוא רצוי מאוד. במובן זה, יש 38% (5, T-175 צלוחיות שוקל 640g ~ בעוד אחד, 5 רב שכבתיים Flask שוקל ~ 400 גרם) ירידה ייצור הפסולת באמצעות Multi-צלוחיות לעומת T-175 צלוחיות אלה יתרונות להוביל לירידה בעלויות אחסון פסולת לרשות והתוצאה חיסכון כלכלי למשתמש.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> 3 שכבת רקמה תרבות שטופלו 525cm 2 </td><td> BD Biosciences </td><td> 353143 </td><td rowspan="21"> <a href="http://www.bdbiosciences.com/cellculture/multiflasks/index.jsp">BD Biosciences תרבית תאים - BD פלקון Multi-צלוחיות</a> </td></tr><tr><td> 5 שכבת רקמה תרבות שטופלו 875cm 2 </td><td> BD Biosciences </td><td> 353144 </td></tr><tr><td> 100 מ&quot;ל פיפטה </td><td> BD Biosciences </td><td> 357600 </td></tr><tr><td> 10 מ&quot;ל פיפטה </td><td> BD Biosciences </td><td> 357551 </td></tr><tr><td> 5 מ&quot;ל aspirating פיפטה </td><td> BD Biosciences </td><td&gt; 357501 </td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל צינור פוליפרופילן חרוטי </td><td> BD Biosciences </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> T-175 רקמות בקבוק תרבות שטופלו </td><td> BD Biosciences </td><td> 353028 </td></tr><tr><td> גראם קריסטל ויולט </td><td> BD </td><td> 212525 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11885 </td></tr><tr><td> GMEM </td><td> סיגמא </td><td> G5154 </td></tr><tr><td> RPMI-1640 </td><td> ATCC </td><td> 30-2001 </td></tr><tr><td> מ </td><td> ATCC </td><td> 30-2003 </td></tr><tr><td> טריפסין-EDTA </td><td> Lonza </td><td> CC-5012 </td></tr><tr><td> סרום שור עוברית </td><td> Invitrogen </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> Tryptose פוספט מרק </td><td> סיגמא </td><td> T8159 </td&gt; </tr><tr><td> BHK-21 תאים </td><td> סיגמא </td><td> 85011433 </td></tr><tr><td> הפ-G2, LnCAP </td><td> ATCC </td><td></td></tr><tr><td> Ecopack 2-293 </td><td> Clontech </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> מיקרוסקופית אלקטרונים למדעים </td><td> 15710 </td></tr><tr><td> פוליסטירן חרוז </td><td> PolySciences בע&quot;מ </td><td> 24628-20 </td></tr><tr><td> Bio-Flex צפה Analyzer </td><td> נובה ביו </td><td></td></tr></tbody></table>

scale-up of mammalian cell culture using a new multilayered flask

מספר גדל והולך של יישומים מבוססי תאים דורשים מספר גדול של תאים. שכבה אחת של שימוש T-צלוחיות, כי הם נאותים במהלך התרחבות בקנה מידה קטן, עשוי להיות מסורבל, מייגע זמן רב כאשר מספר גדול של תאים נדרשים. כדי לענות על הצורך הזה, את הביצועים של כלי תרבות חדשה רב שכבתית התא כדי להקל על סולם קל של תאים מן מרובד אחד T-צלוחיות יידונו. צלוחיות שנבדקו זמינים 3 - 5 ו - שכבתיים בפורמט ולאפשר תרבות התאוששות מלאה של שלוש עד חמש פעמים את מספר התאים בהתאמה, בהשוואה ל T-175 צלוחיות. תכונה מרכזית של Flask Multi-BD הוא נמל לערבב / איזון המאפשר מהירה, כלי ערבוב וכן התפלגות אחידה של תאים ריאגנטים בתוך ובין שכבות של כלי כל עקבי לייצר תאים שיכולים להיות מתורבת בסביבה הוא חופף ל-T-175 צלוחיות. העיצוב של אלה Multi-צלוחיות גם מאפשר גגישה פיפטה onvenient להוספת ריאגנטים ותאי ישירות לתוך צלוחיות כמו גם התאוששות יעילה של תאים ריאגנטים ערך מפחיתה את הסיכון של זיהום עקב שוטף. עבור יישומים בהם לשפוך היא המועדפת על pipetting, העיצוב מאפשר שמירה מינימלית נוזל שיורי כדי לצמצם בזבוז של תאים ריאגנטים יקר.

Watch this Scientific Journal Video about Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask at JoVE.com

Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask

תאים לשחק תפקיד מרכזי והגדלת במחקר, ואת גילוי ופיתוח של הרפוי חדש. עם הצורך הזה גובר מספר גדול יותר של תאים אנחנו צריכים דרכים יעילות יותר ויעיל גדל קצירת התאים מצורף תלוי. בקבוק רב שכבתי עם התכונות הנכון יכול לשרת מטרה זו.

Scale-Up של תרבית תאים היונקים באמצעות Flask multilayered חדש

A growing number of cell-based applications require large numbers of cells. Usage of single layer T-flasks, that are adequate during small-scale ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

לטווח ארוך הדמיה בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופית שדה רחב

Ole Isacson: Development of New Therapies for Parkinson's Disease

אולה Isacson: פיתוח טיפולים חדשים עבור מחלת פרקינסון

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

לייזר Microdissection לכידה של רקמות היונקים

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Development of New Therapeutic Applications Using Microfluidics

הפיתוח של יישומים טיפולית חדשה באמצעות מיקרופלואידיקה

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

שיטת לתרבות מוקדם של עוברים צ&#39;יק לשעבר vivo (תרבות חדש)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

המשימה esiRNA עבור הקרנת RNAi בתאי יונקים

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה Cell שרביט השלטון

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

ניתוח של עמדת מחזור התא בתאי יונקים

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

קביעת ספירת תאים יונקים, גודל התא ובריאות נייד באמצעות ת Moxi מיני מונה אוטומטי Cell

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

הכנת סרום העכברוש מתאים לתרבות עובר שלמה יונקים

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...