Name: scale-up of mammalian cell culture using a new multilayered flask
Uploaded: 2011-12-05T13:00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask at JoVE.com

<ol>
	<li>Szabo, S. E., Monroe, S. L., Fiorino, S., Bitzan, J., Loper, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+an+automated+instrument+for+viability+and+concentration+mesurements+of+cryopreserved+hematopoietic+cells.">Evaluation of an automated instrument for viability and concentration mesurements of cryopreserved hematopoietic cells.</a> Lab. Hematol. 10, 109-109 (2004).</li><li>Bonnekoh, B., Wevers, A., Jugert, F., Merk, H., Mahrle, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+growth+assay+for+epidermal+cell+cultures+by+their+crystal+violet+binding+capacity.">Colorimetric growth assay for epidermal cell cultures by their crystal violet binding capacity.</a> Arch. Dermatol. Res. 281, 487-487 (1989).</li><li>Sengupta, N., Rose, S. T., Morgan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+Flux+analysis+of+CHO+cell+metabolism+in+the+late+non-growth+phase.">Metabolic Flux analysis of CHO cell metabolism in the late non-growth phase.</a> Biotechnol. Bioeng. 108, 83-83 (2010).</li><li>Zhu, M. M., Goyal, A., Rank, D. L., Gupta, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+elevated+pCO2+and+osmolality+on+growth+of+cells+and+production+of+antibody&#x2013;fusion+protein+B1:+a+case+study.">Effects of elevated pCO2 and osmolality on growth of cells and production of antibody&#x2013;fusion protein B1: a case study.</a> Biotechnol. Prog. 21, (2005).</li><li>Ryan, J. M., Sharf, B. B., Cristofalo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+culture+medium+volume+on+cell+density+and+life-span+of+human+diploid+fibroblasts.">The influence of culture medium volume on cell density and life-span of human diploid fibroblasts.</a> Exp Cell Res. 91, 389-389 (2004).</li><li>Flaherty, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tips and Techniques for enhancing your cell culture. , (2009).</li><li>Sanyal, S., Abraham, E. J., Slater, K., Cai, A., Lacey, B., Hartshorn, C., Flaherty, P., McHugh, B., Qian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Scaling up cells in BD Falcon Cell Culture Multi-Flasks. , (2011).</li><li>DiPersio, C. M., Jackson, D. A., Zaret, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix+coordinately+modulates+liver+transcription+factors+and+hepatocyte+morphology.">The extracellular matrix coordinately modulates liver transcription factors and hepatocyte morphology.</a> Mol. Cell. Biol. 11, 4405-4405 (1991).</li><li>Grose, R., Hutter, C., Bloch, W., Thorey, I., Watt, F. M., Fassler, R., Brakebusch, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+crucial+role+of+&#x03B2;1+integrins+for+keratinocyte+migration+in+vitro+and+during+cutaneous+wound+repair.">A crucial role of &#x03B2;1 integrins for keratinocyte migration in vitro and during cutaneous wound repair.</a> Dev. 129, 2303-2303 (2002).</li></ol>

Все авторы являются сотрудниками Becton Dickinson, Biosciences сегмента, Discovery лабораторные группы.

Данное исследование демонстрирует увеличение производительности, что Multi-Колба дизайн предлагает исследователям. Хотя важно следовать шаги, описанные выше, для достижения оптимальной производительности при использовании Multi-Колбы, Есть несколько важных шагов в этом протоколе, которые считаются наиболее существенными. К ним относятся (я) смешивание клеток и реагенты использованием смеси порт в сосуд (II) транспортировки Multi-колбу на 45 ° по часовой стрелке после перегородки жидкости в каждом из слоев (III), укладка Multi-Колба плоские разбиения на сообщение инкубатора. Правильное использование Multi-колба приводит к производству однородной популяции клеток внутри каждого судна, которое культивировали в среде, которая сравнима с Т-175 колб (5). Эти суда предоставить 3 и 5 раз больше клеток в аналогичный след, как T-175 колбу. 3 и 5-слойная судна обеспечивает 525 и 875cm 2 роста области, соответственно, и предлагают как пространство и труда сavings для пользователей. Тканевой культуры Обработка поверхности сравнима с колбами стандартного что позволяет масштабов без необходимости повторной оптимизации существующих условиях культуры или ущерба для качества, однородности или производительность клеток (6, 7). Это также обеспечивает сопоставимость с ранее собранными данными. Эти суда могут быть также покрыта реагентов, таких как коллаген, фибронектин, поли-D-лизина предоставить специализированные субстратом для прикрепления, роста и дифференциации определенных типов клеток, таких как гепатоциты 8, 9 kertainocytes, стволовые клетки, выращенные в бессывороточной СМИ формулировках. Покрытие решения могут быть удалены с минимальной остаточной удержанию жидкости в целях снижения потерь ценных реагентов, а также эффективное удаление раствор для покрытия до культивирования клеток. Рекомендуется оптимальный объем средств массовой информации к культуре клеток в нескольких колб от 0.142-0.287 мл / см 2, которые переводят на 25-50 мл на один слой. В отличие от другого многослойные колбу, тсвой продукт предлагает микс-порт судно, которое позволяет быстро, в-сосуд смешивания, а также равномерное распределение клеток и реагентов внутри и между слоями каждого судна. Разнообразные клеточные линии, первичных культур и стволовые клетки были расширены эффективного использования Multi-колбы. Эти сосуды особенно выгодно в приложениях, требующих большого количества клеток, например, в высокой пропускной способности отбор, производство вакцин, вирусной трансфекции вектора и клеточной терапии. Экономия времени, пространства, труда и снижение отходов являются ключевыми выигрыш Multi-Колба по сравнению с обычными культурами в однослойных сосудах. Мы можем культуры примерно в три раза превышает число клеток, полученных из 5, Т-175 колб в том же пространстве, используя 3, 5-слоя Multi-колбы. Это преимущество в экономии пространства, не ограничивается только на Т-175, но может быть распространено и на другие суда: стандартный аппарат бутылки ролик, который вписывается в общие лабораторные инкубаторы домов ~ 4 ROLлер бутылки (2200 мл), каждый из которых обеспечивает 850cm 2 площади поверхности. В этом же районе, ~ 20, 5-слойной Multi-Колбы могут быть размещены таким образом обеспечивая пятикратный рост поверхности к культуре клеток. Кроме того, с увеличением &quot;Go-зеленой&quot; общественности, что позволит уменьшить образование отходов является весьма желательным. В этом отношении, есть 38% (5, Т-175 колб весом ~ 640G в то время как один, 5-слойной Multi-Колба весит ~ 400 г) уменьшение образования отходов использованием Multi-Колбы по сравнению с Т-175 колб и эти преимущества ведут к снижению хранения и захоронения отходов затрат и привести к экономии средств для пользователя.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента / Оборудование </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> 3-слойная тканевой культуры обработанных 525cm 2 </td><td> BD Biosciences </td><td> 353143 </td><td rowspan="21"> <a href="http://www.bdbiosciences.com/cellculture/multiflasks/index.jsp">BD Biosciences культуре клеток - BD Сокол Multi-Колбы</a> </td></tr><tr><td> 5-слойная тканевой культуры обработанных 875cm 2 </td><td> BD Biosciences </td><td> 353144 </td></tr><tr><td> 100 мл пипетки </td><td> BD Biosciences </td><td> 357600 </td></tr><tr><td> 10 мл пипетки </td><td> BD Biosciences </td><td> 357551 </td></tr><tr><td> 5 мл аспирационной пипетки </td><td> BD Biosciences </td><td&gt; 357501 </td></tr><tr><td> 50 мл полипропиленовые конической трубе </td><td> BD Biosciences </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> Т-175 колбу тканевой культуры обработанных </td><td> BD Biosciences </td><td> 353028 </td></tr><tr><td> Грамм Crystal Violet </td><td> BD </td><td> 212525 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11885 </td></tr><tr><td> GMEM </td><td> Сигма </td><td> G5154 </td></tr><tr><td> RPMI-1640 </td><td> АТСС </td><td> 30-2001 </td></tr><tr><td> MEM </td><td> АТСС </td><td> 30-2003 </td></tr><tr><td> Трипсин-EDTA </td><td> Lonza </td><td> CC-5012 </td></tr><tr><td> Эмбриональной бычьей сыворотки </td><td> Invitrogen </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> Tryptose фосфат Отвар </td><td> Сигма </td><td> T8159 </td&gt; </tr><tr><td> ВНК-21 клетки </td><td> Сигма </td><td> 85011433 </td></tr><tr><td> Hep-G2, LNCaP </td><td> АТСС </td><td></td></tr><tr><td> Ecopack 2-293 </td><td> Clontech </td><td></td></tr><tr><td> Параформальдегид </td><td> Электронная микроскопия наук </td><td> 15710 </td></tr><tr><td> Полистирол бисера </td><td> PolySciences ООО </td><td> 24628-20 </td></tr><tr><td> Bio-Flex профиля Analyzer </td><td> Нова биомедицинских </td><td></td></tr></tbody></table>

scale-up of mammalian cell culture using a new multilayered flask

Все большее число клеточных приложения требуют большого количества клеток. Использование одного слоя T-колб, которые являются адекватными во время мелкие расширения, может стать громоздким, трудоемким и длительным, когда большое количество клеток не требуется. Чтобы удовлетворить эту потребность, производительность новой многослойной судна культуры клеток для облегчения расширения клеток из одного слоистого T-колб будет обсуждаться. Колбы испытания доступны в 3 - и 5-слойная формат и включить культуру и полное восстановление три и пять раз превышает число клеток, соответственно, по сравнению с Т-175 флаконов. Ключевой особенностью BD Multi-колбе смесь / уравновешивания порт, который позволяет быстро, в-сосуд смешивания, а также равномерное распределение клеток и реагентов внутри и между слоями каждое судно и постоянно производить клетки, которые можно культивировать в среде, которая сравнимо с Т-175 флаконов. Дизайн этих Multi-Колбы также позволяет сonvenient доступ пипетки для добавления реагентов и клеток непосредственно в колбах, а также эффективное восстановление ценных клеток и реагентов и уменьшает риск загрязнения в результате заливки. Для приложений, где проливной предпочтительнее, чем пипетки, конструкция позволяет минимальной остаточной удержанию жидкости в целях снижения потерь ценных клеток и реагентов.

Watch this Scientific Journal Video about Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask at JoVE.com

Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask

Клетки играют важную и все возрастающую роль в научных исследованиях, и открытие и разработку новых методов лечения. При этом растущая потребность в большем количестве клеток нам необходимо более эффективное и эффективные способы для выращивания и сбора урожая привязанности зависимые ячейки. Многослойные колбу с правом особенности могут служить этой цели.

Расширение масштабов культуры клеток млекопитающих использованием новых многослойных Колба

A growing number of cell-based applications require large numbers of cells. Usage of single layer T-flasks, that are adequate during small-scale ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Долгосрочные изображений клетках млекопитающих использованием широкого поля микроскопии

Ole Isacson: Development of New Therapies for Parkinson's Disease

Оле Isacson: Разработка новых методов лечения болезни Паркинсона

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Лазерная Захват микродиссекция ткани млекопитающих

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Development of New Therapeutic Applications Using Microfluidics

Разработке новых терапевтических приложений с помощью Microfluidics

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Метод культуры раннего куриных эмбрионов исключая виво (Новая Культура)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

МИССИЯ esiRNA для скрининга RNAi в клетках млекопитающих

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Определение сотовый номер при использовании культуры клеток Счетчик скипетр сотовый

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Анализ сотового Позиция цикла в клетках млекопитающих

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

Определение количества клеток млекопитающих, размер ячейки и клеточной здравоохранения на основе использования Moxi Z Мини Автоматизированная Сотовые Счетчик

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Подготовка сыворотки крыс Подходит для млекопитающих всей эмбрионов культуры

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...