Name: transretinal erg recordings from mouse retina: rod and cone photoresponses
Uploaded: 2012-03-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses at JoVE.com

Ondersteund door Career Development Award van Onderzoek om blindheid te voorkomen, NIH subsidies EY19312 en EY19543 (VJK), maar ook door onbeperkte subsidie ​​van Onderzoek om Blindheid en EY02687 (Afdeling Oogheelkunde en Visual Sciences aan de Universiteit van Washington) te voorkomen.

1. Het maken van elektroden <ol><li> Bereid glas elektroden. Weeg 120 mg agar en meng dit in 10 ml gedestilleerd water (uiteindelijke concentratie van 1,2% agar). Smelt de agar oplossing in heet water bad. Vul het glas haarvaten (we gebruiken Word Presision Instrumenten TW100-4 capillairen met de volgende afmetingen: lengte = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm, en de interne volume = 44 pi) met de agar oplossing met behulp van plastic spuit. Verstevigen de agar bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten. Zo tot ongeveer 200 c...

<ol>
	<li>Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+fluctuations+in+membrane+current+of+single+toad+rod+outer+segments.">Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments.</a> Nature. 269, 78-80 (1977).</li><li>Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+features+of+the+S-+and+M-cone+photoreceptors+of+wild-type+mice+from+single-cell+recordings.">Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings.</a> J. Gen. Physiol. 127, 359-374 (2006).</li><li>Nymark, S., Heikkinen, H., Haldin, C., Donner, K., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+responses+and+light+adaptation+in+rat+retinal+rods+at+different+temperatures.">Light responses and light adaptation in rat retinal rods at different temperatures.</a> J. Physiol. 567, 923-938 (2005).</li><li>Heikkinen, H., Nymark, S., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cone+photoresponses+obtained+with+electroretinogram+from+the+isolated+retina.">Mouse cone photoresponses obtained with electroretinogram from the isolated retina.</a> Vision Res. 48, 264-272 (2008).</li><li>Frank, R. N., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodopsin+photoproducts:+effects+on+electroretinogram+sensitivity+in+isolated+perfused+rat+retina.">Rhodopsin photoproducts: effects on electroretinogram sensitivity in isolated perfused rat retina.</a> Science. 161, 487-489 (1968).</li><li>Wang, J. S., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+pathway+mediates+the+mouse+and+human+cone+visual+cycle.">An alternative pathway mediates the mouse and human cone visual cycle.</a> Curr. Biol. 19, 1665-1669 (2009).</li><li>Kolesnikov, A. V., Tang, P. H., Parker, R. O., Crouch, R. K., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+cone+visual+cycle+promotes+rapid+M/L-cone+pigment+regeneration+independently+of+the+interphotoreceptor+retinoid-binding+protein.">The mammalian cone visual cycle promotes rapid M/L-cone pigment regeneration independently of the interphotoreceptor retinoid-binding protein.</a> J. Neurosci. 31, (2011).</li><li>Calvert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototransduction+in+transgenic+mice+after+targeted+deletion+of+the+rod+transducin+alpha+-subunit.">Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 13913-13918 (2000).</li><li>Applebury, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+a+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27, 513-523 (2000).</li><li>Sillman, A. J., Ito, H., Tomita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+mass+receptor+potential+of+the+isolated+frog+retina.+I.+General+properties+of+the+response.">Studies on the mass receptor potential of the isolated frog retina. I. General properties of the response.</a> Vision Res. 9, 1435-1442 (1969).</li><li>Vinberg, F., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sets+the+physiological+value+of+the+dominant+time+constant+of+saturated+mouse+rod+photoresponse+recovery.">Calcium sets the physiological value of the dominant time constant of saturated mouse rod photoresponse recovery.</a> PLoS One. 5, e13025-e13025 (2010).</li><li>Bolnick, D. A., Walter, A. E., Sillman, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barium+suppresses+slow+PIII+in+perfused+bullfrog+retina.">Barium suppresses slow PIII in perfused bullfrog retina.</a> Vision Res. 19, 1117-1119 (1979).</li></ol>

De methode van staaf-en kegelvormige gedreven transretinal ERG opnames hierboven beschreven wordt een krachtig instrument voor het onderzoeken van de functie van de muis fotoreceptoren in zowel wild-type en genetisch gemodificeerde dieren. Naast de gemakkelijke karakterisering van elementaire photoresponse eigenschappen deze eenvoudige techniek biedt grote respons stabiliteit tijdens langdurige experimenten uitgevoerd op nagenoeg in intacte retina preparaten. Zowel donker aangepaste hengel maximale respons amplitude en ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Materiaalnaam </td><td> Type </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Commentaar </td></tr><tr><td> DL-AP-4 </td><td></td><td> TOCRIS bioscience </td><td> 0101 </td><td></td></tr><tr><td> Alle andere reagentia </td><td></td><td> Sigma-Aldrich </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glas haarvaten </td><td></td><td> Wereld Precision Instruments </td><td> TW100-4 </td><td> Voor het maken elektroden </td></tr><tr><td> Filtreerpapier </td><td> Harg </td><td> Millipore </td><td> HABG01300 </td><td></td></tr><tr><td> Fotometer </td><td></td><td> UDT Instrumenten </td><td> S350 </td><td> Voor lichte kalibratie </td></tr><tr><td> Radiometrische silicium sensor </td><td></td&gt; <td> UDT Instrumenten </td><td> 221 </td><td> Voor lichte kalibratie </td></tr><tr><td> Anti-triltafel </td><td></td><td> Technische Manufacturing Corporation </td><td> TMC 78 tot 239-02R, TMC63-26012-01 </td><td> Om de mechanische ruis te minimaliseren </td></tr><tr><td> Air compressor Panther P 15TC </td><td></td><td> Werther International </td><td> P 15TC </td><td> Verbonden met anti-vibratie tafel </td></tr><tr><td> Stereomicroscoop </td><td></td><td> LEICA </td><td> MZ9.5 </td><td> Voor de muis oog dissectie </td></tr><tr><td> Infrarood beeldomzetters </td><td></td><td> BEMeyers </td><td> ProwlerTM </td><td> Gebonden aan stereomicroscoop </td></tr><tr><td> Verschilversterker DP-311 </td><td></td><td> Warner Instruments </td><td> DP-311 </td><td></td></tr><tr><td> Axon Digidata 1440A Digitizer </td><td>; </td><td> Molecular Devices </td><td> 1440A </td><td></td></tr><tr><td> Dual Channel 8-polige filter </td><td></td><td> KROHN-HITE Corporation </td><td> 3382 </td><td></td></tr><tr><td> Keramische weerstand </td><td></td><td> TE Connectivity </td><td> CGS SBCHE618RJ </td><td> Voor opwarmen van de perfusie-oplossing </td></tr><tr><td> Thermokoppel </td><td> T </td><td> Physitemp Instrumenten </td><td> IT-18 </td><td></td></tr><tr><td> Temperatuur-monitor </td><td></td><td> Omega </td><td> DPi32 </td><td> Verbonden met thermokoppel </td></tr><tr><td> LED 505 nm </td><td></td><td> TT Electronics / Optek Technology </td><td> Digi-Key P / N 365-1185-ND </td><td> Om te testen flitsen / bleken licht toe te passen </td></tr><tr><td> Cauterisatie pen </td><td></td><td> Bovie </td><td> AA25 </td><td> Voor het markeren van de dorsale deelvan de muis oogbol </td></tr><tr><td> pCLAMP 10 Elektrofysiologie data-acquisitie en analyse software </td><td></td><td> Molecular Devices </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

transretinal erg recordings from mouse retina: rod and cone photoresponses

Er zijn twee verschillende klassen van beeldvormende fotoreceptoren in het netvlies gewervelde: staafjes en kegeltjes. Hengels zijn in staat om enkele fotonen van het licht te detecteren terwijl kegels werken voortdurend onder snel veranderende fel licht. Absorptie van licht door staaf-en kegelvormige specifieke visuele pigmenten in de buitenste segmenten van fotoreceptoren activeert een fototransductie cascade die uiteindelijk leidt tot de sluiting van de cyclische nucleotide-gated kanalen op de plasmamembraan en cel hyperpolarisatie. Dit licht-geïnduceerde verandering in membraan huidige en potentiële kunnen worden geregistreerd als een photoresponse, door een van beide klassieke zuig-elektrode opnametechniek 1,2 of door transretinal electrogram opnamen (ERG) van geïsoleerde netvlies met farmacologisch geblokkeerd postsynaptische respons componenten 3-5. Deze laatste methode maakt het mogelijk drugs-toegankelijke langdurige opnames van de muis fotoreceptoren en is vooral handig voor het verkrijgen van een stabiele photoresponses frOM de schaarse en kwetsbare muis kegels. In het geval van kegels, kunnen dergelijke experimenten worden uitgevoerd, zowel in donker aangepaste voorwaarden en volgende intense verlichting die in wezen bleekt alle visuele pigment, om het proces van kegel fotosensibiliteit herstel te volgen tijdens de donkere aanpassing 6,7. In deze video laten we zien hoe de staaf-en M / L-cone-driven transretinal opnames van donker aangepaste muis netvlies uit te voeren. Stang opnamen worden uitgevoerd met netvlies van wild type (C57BL / 6) muizen. Voor de eenvoud zal conus opnames worden verkregen uit genetisch gemodificeerde staaf transducin α-subunit knockout (Tα - / -) muizen die stang missen signalering 8.

Watch this Scientific Journal Video about Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses at JoVE.com

Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses (Video) | JoVE

We beschrijven een relatief eenvoudige methode van transretinal electroretinogram (ERG) opnamen voor het verkrijgen van staafjes en kegeltjes photoresponses uit intacte muis netvlies. Deze aanpak maakt gebruik van het blok van synaptische transmissie van fotoreceptoren hun lichte reacties te isoleren en hen te registreren met behulp van elektroden veld geplaatst over de geïsoleerde platte gemonteerde netvlies.

Transretinal ERG Opnames van Mouse Retina: staafjes en kegeltjes Photoresponses

There are two distinct classes of image-forming photoreceptors in the vertebrate retina: rods and cones. Rods are able to detect single photons of light ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation (Video) | JoVE

Patch Clamp Opnamen van Mouse Retinal Neuronen in een donker aangepaste Slice Voorbereiding

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina (Video) | JoVE

In vivo Elektroporatie van de ontwikkelingslanden Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina (Video) | JoVE

Beoordeling van de Vasculaire Regeneratie in het CZS met de muis Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures (Video) | JoVE

Vibratome Sectioning Mouse Retina te Fotoreceptor culturen Bereid

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina (Video) | JoVE

Imaging Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Dynamiek in Cone fotoreceptorcellen Axon Terminals van de Mouse Retina

Retinal cone photoreceptors (cones) serve daylight vision and are the basis of color discrimination. They are subject to degeneration, often leading to ...

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks (Video) | JoVE

Waar je knippen zaken: Een dissectie en analyse-gids voor de ruimtelijke oriëntatie van het netvlies muis van oogbeschadigingen en/of bezienswaardigheden

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets (Video) | JoVE

Noninvasive EEG opnamen vrij bewegen biggen

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Visualizing Axonal Growth Cone Collapse and Early Amyloid &#946; Effects in Cultured Mouse Neurons

Visualizing Axonal Growth Cone Collapse and Early Amyloid ÃŽÂ² Effects in Cultured Mouse Neurons (Video) | JoVE

Visualiseren van axonale groei Cone ineenstorting en vroege amyloïde β effecten in gekweekte muis neuronen

Amyloid-&#946; (A&#946;) causes memory impairments in Alzheimer's disease (AD). Although therapeutics have been shown to reduce A&#946; levels in the ...

Cone-Enriched Cultures from the Retina of Chicken Embryos to Study Rod to Cone Cellular Interactions

Cone-Enriched Cultures from the Retina of Chicken Embryos to Study Rod to Cone Cellular Interactions (Video) | JoVE

Met kegels verrijkte culturen van het netvlies van kippenembryo's om staaf tot kegel cellulaire interacties te bestuderen

Human daytime vision relies on the function of cone photoreceptors at the center of the retina, the fovea. Patients suffering from the most prevalent form ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility (Video) | JoVE

In vivo Vasculaire letseluitlezingen in het netvlies van muizen om de reproduceerbaarheid te bevorderen

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...