Name: transretinal erg recordings from mouse retina: rod and cone photoresponses
Uploaded: 2012-03-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses at JoVE.com

Поддержка развития карьеры награду от исследований в области профилактики слепоты, NIH гранты EY19312 и EY19543 (Vjk), а также неограниченный грант от исследований в области профилактики слепоты и EY02687 (кафедра офтальмологии и визуальных наук в Университете Вашингтона).

1. Изготовление электродов <ol><li> Подготовка стеклянных электродов. Взвесьте 120 мг агара и смешайте его в 10 мл дистиллированной воды (конечная концентрация агара 1,2%). Растопить агар решение в ванну с горячей водой. Заполните стеклянные капилляры (мы используем инструменты Слово Presision TW100-...

<ol>
	<li>Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+fluctuations+in+membrane+current+of+single+toad+rod+outer+segments.">Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments.</a> Nature. 269, 78-80 (1977).</li><li>Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+features+of+the+S-+and+M-cone+photoreceptors+of+wild-type+mice+from+single-cell+recordings.">Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings.</a> J. Gen. Physiol. 127, 359-374 (2006).</li><li>Nymark, S., Heikkinen, H., Haldin, C., Donner, K., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+responses+and+light+adaptation+in+rat+retinal+rods+at+different+temperatures.">Light responses and light adaptation in rat retinal rods at different temperatures.</a> J. Physiol. 567, 923-938 (2005).</li><li>Heikkinen, H., Nymark, S., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cone+photoresponses+obtained+with+electroretinogram+from+the+isolated+retina.">Mouse cone photoresponses obtained with electroretinogram from the isolated retina.</a> Vision Res. 48, 264-272 (2008).</li><li>Frank, R. N., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodopsin+photoproducts:+effects+on+electroretinogram+sensitivity+in+isolated+perfused+rat+retina.">Rhodopsin photoproducts: effects on electroretinogram sensitivity in isolated perfused rat retina.</a> Science. 161, 487-489 (1968).</li><li>Wang, J. S., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+pathway+mediates+the+mouse+and+human+cone+visual+cycle.">An alternative pathway mediates the mouse and human cone visual cycle.</a> Curr. Biol. 19, 1665-1669 (2009).</li><li>Kolesnikov, A. V., Tang, P. H., Parker, R. O., Crouch, R. K., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+cone+visual+cycle+promotes+rapid+M/L-cone+pigment+regeneration+independently+of+the+interphotoreceptor+retinoid-binding+protein.">The mammalian cone visual cycle promotes rapid M/L-cone pigment regeneration independently of the interphotoreceptor retinoid-binding protein.</a> J. Neurosci. 31, (2011).</li><li>Calvert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototransduction+in+transgenic+mice+after+targeted+deletion+of+the+rod+transducin+alpha+-subunit.">Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 13913-13918 (2000).</li><li>Applebury, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+a+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27, 513-523 (2000).</li><li>Sillman, A. J., Ito, H., Tomita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+mass+receptor+potential+of+the+isolated+frog+retina.+I.+General+properties+of+the+response.">Studies on the mass receptor potential of the isolated frog retina. I. General properties of the response.</a> Vision Res. 9, 1435-1442 (1969).</li><li>Vinberg, F., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sets+the+physiological+value+of+the+dominant+time+constant+of+saturated+mouse+rod+photoresponse+recovery.">Calcium sets the physiological value of the dominant time constant of saturated mouse rod photoresponse recovery.</a> PLoS One. 5, e13025-e13025 (2010).</li><li>Bolnick, D. A., Walter, A. E., Sillman, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barium+suppresses+slow+PIII+in+perfused+bullfrog+retina.">Barium suppresses slow PIII in perfused bullfrog retina.</a> Vision Res. 19, 1117-1119 (1979).</li></ol>

Метод стержня и конус управляемой transretinal записи ЭРГ описанных выше становится мощным инструментом для исследования функции мыши фоторецепторы как дикого типа и генетически модифицированных животных. В дополнение к легкой характеристика основных свойств фотоотклика, этот простой ме...

<table border="1"><tbody><tr><td> Материал Имя </td><td> Тип </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментировать </td></tr><tr><td> DL-АР-4 </td><td></td><td> TOCRIS биологических наук </td><td> 0101 </td><td></td></tr><tr><td> Все остальные реагенты </td><td></td><td> Sigma-Aldrich </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Стеклянные капилляры </td><td></td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> TW100-4 </td><td> Для изготовления электродов </td></tr><tr><td> Фильтровальная бумага </td><td> HARG </td><td> Millipore </td><td> HABG01300 </td><td></td></tr><tr><td> Фотометр </td><td></td><td> UDT инструменты </td><td> S350 </td><td> Для легких калибровки </td></tr><tr><td> Радиометрический датчик кремния </td><td></td&gt; <td> UDT инструменты </td><td> 221 </td><td> Для легких калибровки </td></tr><tr><td> Anti-вибростол </td><td></td><td> Технические Manufacturing Corporation </td><td> TMC 78-239-02R, TMC63-26012-01 </td><td> Чтобы свести к минимуму механические шумы </td></tr><tr><td> Воздушный компрессор Пантера P 15TC </td><td></td><td> Вертер Международного </td><td> P 15TC </td><td> Подключение к антивибрационные стол </td></tr><tr><td> Стереомикроскоп </td><td></td><td> LEICA </td><td> MZ9.5 </td><td> Для мыши рассечение глаза </td></tr><tr><td> Инфракрасные преобразователи изображения </td><td></td><td> BEMeyers </td><td> ProwlerTM </td><td> Связанные с стереомикроскоп </td></tr><tr><td> Дифференциальный усилитель DP-311 </td><td></td><td> Warner Instruments </td><td> DP-311 </td><td></td></tr><tr><td> Axon DIGIDATA 1440A Digitizer </td><td>; </td><td> Molecular Devices </td><td> 1440A </td><td></td></tr><tr><td> Двухканальный 8-полюсный фильтр </td><td></td><td> Крон-HITE корпорации </td><td> 3382 </td><td></td></tr><tr><td> Керамическая резистор </td><td></td><td> TE подключения </td><td> CGS SBCHE618RJ </td><td> Для нагревательных перфузии решение </td></tr><tr><td> Термопара </td><td> Т </td><td> Physitemp инструменты </td><td> IT-18 </td><td></td></tr><tr><td> Температура монитор </td><td></td><td> Омега </td><td> DPi32 </td><td> Подключение к термопары </td></tr><tr><td> Светодиодная 505 нм </td><td></td><td> TT Electronics / Optek технологии </td><td> Digi-Key P / N 365-1185-ND </td><td> Чтобы применить тест вспышек / отбеливания свет </td></tr><tr><td> Прижигание перо </td><td></td><td> Bovie </td><td> AA25 </td><td> Для маркировки спинной частис помощью мыши глазного яблока </td></tr><tr><td> pCLAMP 10 электрофизиологии сбора данных и программного обеспечения для анализа </td><td></td><td> Molecular Devices </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

transretinal erg recordings from mouse retina: rod and cone photoresponses

Есть два различных классов формирования изображения фоторецепторов в сетчатке глаза позвоночных: палочки и колбочки. Стержни способны обнаруживать одиночные фотоны света в то время как конусы непрерывно работать в быстро меняющихся условиях яркого света. Поглощение света стержень и конус конкретных зрительных пигментов в наружных сегментов фоторецепторов вызывает фототрансдукции каскад, что в конечном итоге приводит к закрытию циклических нуклеотидов закрытых каналов на мембране клетки и гиперполяризации. Это светоиндуцированного изменения мембранного тока и потенциал может быть зарегистрирован в качестве фотоотклика, либо классический 1,2 электрод всасывания технику записи или записи transretinal электроретинограммы (ЭРГ) с изолированной сетчатки с фармакологически заблокирован постсинаптических компонентов ответ 3-5. Последний метод позволяет наркотики доступны длительные записи с мышью фоторецепторов и особенно полезна для получения стабильных photoresponses птОМ скудны и хрупкими конусов мыши. В случае конусы, такие эксперименты могут быть выполнены как в темно-адаптированных условиях и после интенсивного освещения, который отбеливает практически все зрительного пигмента, чтобы следить за процессом восстановления конус фоточувствительность в темное адаптации 6,7. В этом видео мы покажем, как выполнять стержень и M / L-конус управляемой transretinal записи с темно-адаптированных мыши сетчатки. Род записи будут осуществляться с использованием сетчатки дикого типа (C57BL / 6) мышах. Для простоты конус записи будут получены из генетически модифицированных стержень трансдуцина α-субъединицы нокаут (ta - / -) мышей, которые не имеют стержень сигнализации 8.

Watch this Scientific Journal Video about Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses at JoVE.com

Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses

Мы описываем относительно простой метод transretinal электроретинограммы (ЭРГ) записи для получения палочек и колбочек photoresponses с нетронутой сетчатке мышей. Такой подход имеет преимущество блока синаптической передачи от фоторецепторов, чтобы изолировать их свет ответы и записать их с помощью поля электродов, расположенных по всей изолированные плоские установлен сетчатки.

Transretinal записи ЭРГ от мыши Retina: палочек и колбочек Photoresponses

There are two distinct classes of image-forming photoreceptors in the vertebrate retina: rods and cones. Rods are able to detect single photons of light ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

Патч зажим Recordings от мыши нейронов сетчатки в темно-адаптированной фрагмент подготовка

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

В естественных условиях Электропорация развивающихся Мышь Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Оценка сосудистой регенерации в ЦНС Использование мыши Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome секционирования мыши Retina Подготовка фоторецептора культур

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Са изображений<sup&gt; 2+</sup&gt; Динамика колбочек аксонов мыши Retina

Retinal cone photoreceptors (cones) serve daylight vision and are the basis of color discrimination. They are subject to degeneration, often leading to ...

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

Где вы режете вопросы: Рассечение и анализа руководство для пространственной ориентации мыши сетчатки от глазной достопримечательности

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

Неинвазивный ЭЭГ записи от свободно перемещающихся поросят

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Транспупиллярная двухфотонная визуализация сетчатки мыши In vivo

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

Cone-Enriched Cultures from the Retina of Chicken Embryos to Study Rod to Cone Cellular Interactions

Обогащенные конусом культуры из сетчатки куриных эмбрионов для изучения клеточных взаимодействий между палочками и конусами

Human daytime vision relies on the function of cone photoreceptors at the center of the retina, the fovea. Patients suffering from the most prevalent form ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

In vivo Показания сосудистых повреждений в сетчатке мыши для повышения воспроизводимости

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...